авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Эпидемиологическое и молекулярно-генетическое исследование нейрофиброматоза i типа в республике башкортостан

На правах рукописи

МУСТАФИН РУСТАМ НАИЛЕВИЧ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НЕЙРОФИБРОМАТОЗА I ТИПА В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН 03.02.07 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа – 2012 2

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН.

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна

Официальные оппоненты: Мустафина Ольга Евгеньевна доктор биологических наук, профессор Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН зав. лабораторией физиологической генетики Спицын Виктор Алексеевич доктор биологических наук, профессор ГУ Медико-генетический научный центр РАМН зав. лабораторией экологической генетики

Ведущая организация: ГБОУ ВПО национальный «Российский исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится «_» апреля 2012 г. в «_» часов на заседании Объединенного диссертационного совета ДМ 002.133.01 при ИБГ УНЦ РАН по адресу: 450054, г. Уфа, просп. Октября, 71, ИБГ УНЦ РАН.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Уфимского научного центра РАН, по адресу: 4500г. Уфа, просп. Октября, 71, с авторефератом – на сайте: ibg.anrb.ru/dissov.html, e-mail: molgen@anrb.ru, mbb@anrb.ru

Автореферат разослан «» марта 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Бикбулатова С.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Нейрофиброматоз I типа (НФ1) – аутосомно-доминантное заболевание с синдромом опухолевой предрасположенности тканей нейроэктодермального генеза, встречающееся с частотой 1:3500 населения в мире (Rasmussen et al., 2000;

Vandenbroucke, 2004;

Johannessen et al., 2005;

Ismat et al., 2006;

Jeong et al., 2006;

Hawes et al., 2007;

McDaniel et al., 2008;

Boyd et al., 2009;

Ponti et al., 2011). Примерно в 50% случаев болезнь развивается в результате мутаций de novo (D’Angelo et al., 2006;

Шнайдер, 2007;

Ponti et al., 2011). Основные клинические признаки НФ1: нейрофибромы, пигментные пятна на коже (CALM), гамартомы радужной оболочки глаза, глиомы зрительных нервов, когнитивные нарушения и костные дисплазии. Больные подвержены повышенному риску развития миелолейкоза и злокачественных опухолей из оболочек периферических нервов (MPNST) (Jeong et al., 2006;

Bottillo et al., 2007;

Gregorian et al., 2009;

Chen et al., 2010).

НФ1 возникает в результате мутаций в гене нейрофиброматоза I типа (NF1), локализованного на 17q11.2 (Upadhyaya et al., 1990;

Le et al., 2007).

Продукт гена NF1, белок нейрофибромин, функционирует в качестве онкосупрессора с негативной регуляцией активации прото-онкогена р21-ras. В базе данных генных мутаций человека (The Human Gene Mutation Database at the Institute of Medical Genetics in Cardiff, 2010) зарегистрировано более различных мутаций в гене NF1, расположенных практически во всех экзонах.

«Горячих точек» мутагенеза не выявлено (Rasmussen et al., 2000;

Горбунова и др., 2004). У 95% больных обнаруживаются внутригенные мутации, у 5% – делеции протяженного участка, включающего NF1 с соседними генами (Kluwe et al., 2004;

De Raedt et al., 2006;

Pasmant et al., 2009;

Sabbagh et al., 2009).

Описаны также случаи НФ1, обусловленные цитогенетическими перестройками, затрагивающими критический хромосомный сегмент 17q11. (Шнайдер, 2007). Несмотря на открытие огромного количества изменений в гене NF1, большинством исследователей не выявлено гено-фенотипических корреляций, за исключением случаев с делециями всего гена. Широкая вариабельность фенотипа, даже у больных с идентичной мутацией, говорит о вовлечении других факторов в детерминацию клинических проявлений, выявление которых имеет большое значение для разработки терапевтических моделей болезни (Rasmussen et al., 2000;

Kluwe et al., 2004;

Le et al, 2007;

Sabbagh et al., 2009).

Благодаря применению молекулярно-генетических методов стало возможным описание случаев НФ1 со стертым течением без кожных и плексиформных нейрофибром (Upadhyaya et al., 2007) и атипичной клиникой, проявляющейся исключительно опухолями спинного мозга (Kaufmann et al., 2001), а также мозаичной формы без четких клинических проявлений (Kaplan et al., 2010).

Молекулярно-генетическое изучение нейрофиброматоза типа в I Республике Башкортостан не проводилось. Наши исследования, (РБ) направленные на выявление первичного генетического дефекта, являются необходимыми для проведения ДНК-диагностики НФ1 в отягощенных семьях.

Цель работы:

Изучение эпидемиологических и молекулярно-генетических особенностей нейрофиброматоза I типа в Республике Башкортостан.

Задачи исследования:

1. Определить территориальные особенности распространения нейрофиброматоза I типа в Республике Башкортостан.

2. Дать клиническую характеристику больных нейрофиброматозом I типа.

3. Создать банк ДНК больных нейрофиброматозом I типа и членов их семей.

4. Провести поиск изменений нуклеотидной последовательности в гене NF у больных нейрофиброматозом I типа.

5. Провести анализ микросателлитных локусов маркеров 1int/STR(TCCA)n, и диаллельных IVS27AC28.4, D17S2237 (GXAlu), IVS38TG53. полиморфных вариантов rs1801052, rs2066736, rs9894862 в гене NF1 в семьях с нейрофиброматозом I типа.

6. Провести анализ корреляций обнаруженных мутаций в гене NF1 с клиническими проявлениями заболевания.

Научная новизна. Впервые дана эпидемиологическая характеристика нейрофиброматоза типа в Республике Башкортостан с учетом I административно-территориальной и этнической подразделенности населения региона. Впервые проведено исследование структурных изменений в гене NF у больных НФ1 из РБ, при этом выявлено 7 мутаций, ранее не описанных в литературе: с.1278GA с.1570GA (p.Trp426Х), (p.Glu541Lys), с.1973_1974delTC с.3526_3528delAGA (р.Leu658ProfsX10), (p.Arg1176del), с.3826delC с.4514+5GA, (р.Arg1276GlufsX8), c.5758_5761delTTGA (p.Leu1920AsnfsX7), а также 2 полиморфных варианта с.1674TC (p.Ile558Ile), с.7584AG (p.Ser2528Ser). Проведен подробный анализ гено-фенотипических корреляций у больных с идентифицированными мутациями.

Научно-практическая значимость. Полученные данные расширяют представление о молекулярно-генетических основах развития нейрофиброматоза I типа. В связи с трудностью выявления мутаций в гене NF1, пренатальная диагностика НФ1 в Республике Башкортостан до проведения настоящего исследования была невозможна. На основании полученных нами результатов создана пополняемая база данных мутаций больных НФ1 из РБ, которая позволяет проводить пренатальную диагностику данного заболевания в семьях с нейрофиброматозом I типа. Наша работа служит основой для дальнейшего усовершенствования ДНК-диагностики НФ1, оптимальной для РБ, и внедрения в практику медико-генетической консультации при ГУЗ «Республиканский перинатальный центр» РБ, медицинских диагностических центров и лечебных учреждений республики.

Полученные данные исследования могут быть использованы при чтении курсов медицинской генетики на биологических факультетах университетов, в медицинских ВУЗах и на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010), Международной конференции европейского общества генетиков человека (Амстердам, 2011), II Всероссийской школе-семинаре «Биомика – наука XXI века» (Уфа, 2011), конференции «Актуальные вопросы онкогенетики» (Москва, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них статьи в журналах из Перечня ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований и обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы (175 источников). Иллюстративный материал содержит рисунков и 8 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Для проведения эпидемиологических исследований использована база данных по больным нейрофиброматозом I типа, состоящим на учете в медико генетической консультации при ГУЗ «Республиканский перинатальный центр» РБ и членов их семей за 40-летний период. Карта территориальной распространенности НФ1 в РБ построена с помощью пакета программы ArcViewGISv.3.0.

В качестве материала для молекулярно-генетических исследований были использованы образцы ДНК 69 больных с установленным клиническим диагнозом «нейрофиброматоз I типа» из 56 семей из Республики Башкортостан и 50 их родственников. В качестве контроля использовалась ДНК здоровых индивидов (n=50).

Геномную ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции 1984). Поиск изменений (Mathew, нуклеотидной последовательности в гене NF1 проводили методом анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) с щелочной и температурной денатурацией Использованы (Orita et al., 1989).

олигонуклеотидные праймеры, фланкирующие экзоны и прилегающие интронные области, подобранные с помощью программы Primer Select 5.05 из пакета DNASTAR (1993-2002). После денатурации образцы наносили на 8% полиакриламидный гель (ПААГ) с глицерином;

электрофорез проводили при температуре 4-25°C при напряжении 100 вольт в течение 40 часов. Гель окрашивали 0,09% раствором азотнокислого серебра. Анализ образцов осуществляли по критерию присутствия или отсутствия дополнительных полос по сравнению с контрольной ДНК (норма). Определение последовательности нуклеотидов у образцов с измененной подвижностью однонитевой ДНК проводили с помощью автоматического секвенатора ABI PRISM 3100 («Applied Biosystems») с использованием набора для флюорисцентного мечения DYEnamicTM ET, согласно протоколу фирмы-производителя («Amersham Pharmacia Biotech» DYEnamicTM ET Terminator Cycle Sequencing Kit). Для «прочтения» последовательности нуклеотидов использовали приложение BioEdit v.5.0.9. (1997-2001), для анализа полученных результатов – MegAlign из пакета программ DNAStar Inc (1993-2002).

С целью выявления протяженных делеций гена NF1 проведен анализ семи внутригенных полиморфных локусов. При анализе четырех микросателлитных маркеров: STR(TCCA)n в интроне 1, IVS27AC28.4 в интроне 27a, D17S2237 (GXAlu) в интроне 27b, IVS38TG53.0 в интроне 38, образцы наносили на 8% полиакриламидный гель (ПААГ) с последующей окраской 0,09% раствором AgNO3. Детекцию полиморфного варианта rs проводили методом ПДРФ-анализа/RsaI, образцы инкубировали при 37°C в течение 12 часов, с последующим их нанесением на 7% ПААГ, гель окрашивали раствором бромистого этидия и визуализировали в проходящем ультрафиолетовом свете. Генотипирование локусов rs2066736 и rs проводили методом SSCP.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Эпидемиология нейрофиброматоза I типа в Республике Башкортостан В Республике Башкортостан на учете в медико-генетической консультации состоит 238 больных НФ1 из 192 семей. Распространенность нейрофиброматоза I типа в РБ составила в среднем 4,7 на 100000 населения, тогда как среднемировая распространенность НФ1 – 28 на 100000 населения (Rasmussen et al., 2000;

Johannessen et al., 2005;

Ismat et al., 2006;

Bottillo et al., 2007;

Chen et al., 2010;

Ponti et al., 2011).

Заболевание зарегистрировано в 38 из 54 административных районов и в 18 из 21 города республики. Минимальные показатели распространенности (менее 3 на 100000 населения) выявлены в городе Ишимбай;

Абзелиловском и Баймакском районах;

наивысшие показатели (более 13 на 100000 населения) – в Мишкинском и Нуримановском районах (рис. 1). Соотношение между долей больных среди жителей городов к доле больных среди сельских жителей, а также между долей больных мужского и женского пола не достигает статистически значимой разницы.

Распределение больных НФ1 по этническому составу в РБ оказалось следующим: татары – 31,9%, русские – 20,7%, башкиры – 14,8%, марийцы – 6%, чуваши – 3%, немцы – 1,5%, мордва – 1,5%, белорусы – 0,7%, украинцы – 0,7%. 19,2% больных НФ1 составили метисы.

Выяснение семейного анамнеза с последующим уточнением клинических признаков и составлением родословных проводилось во всех 192 семьях. На основании этих данных для 45% больных НФ1 определены семейные случаи заболевания (наследование от матери – 25%, от отца – 20%), в 55% случаях диагноз установлен только у одного члена семьи.

Рис. 1. Распространенность НФ1 в Республике Башкортостан.

Клиническая характеристика больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан При анализе клинических проявлений нейрофиброматоза I типа в РБ с оценкой возраста манифестации, первых симптомов, характеристики проявлений болезни по основным и дополнительным признакам, выявлены определенные особенности (табл. 1).

Нейрофибромы определены только у 58% пациентов, это может быть обусловлено тем, что возраст последнего обследования у 64% пациентов составлял младше 20 лет, у 29% – младше 10 лет. Тогда как нейрофибромы диагностируются у 95% больных НФ1 после 30 лет.

Таблица Сравнительная клиническая характеристика больных НФ1 из Республики Башкортостан с данными мировых исследований Клинический признак Частота встречаемости у Частота встречаемости у больных НФ1 в РБ, % больных НФ1 в мире, % CALM 90 Нейрофибромы 58 Низкий рост 18 Скелетные аномалии 28 Сколиоз 19 12- Псевдоартроз 2 Когнитивные нарушения 20 30- (North, 2000;

Ebinger, 2005;

Stevenson et al., 2006;

Boyd et al., 2009) У больных, наследовавших НФ1 от матери нами прослежено утяжеление клинической картины заболевания по четким клиническим признакам (табл. 2).

Таблица Сравнительная клиническая характеристика больных НФ1 из Республики Башкортостан в зависимости от наследования Клинический Частота Частота Частота признак встречаемости у встречаемости у встречаемости у больных со больных с больных с спорадическим наследованием наследованием НФ случаем НФ1, % НФ1 от отца, % от матери, % Низкий рост 7 16 Сколиоз 16 22 Псевдоартроз 1 - Когнитивные 15 22 нарушения Развитие осложнений нейрофиброматоза I типа у больных из РБ значительно отличается от данных по миру (табл. 3).

Таблица Сравнительная оценка осложнений, выявленных у больных НФ1 из Республики Башкортостан, относительно мировых статистических данных Осложнения Частота встречаемости у Частота встречаемости у больных НФ1 в РБ, % больных в мире, % Опухоли ЦНС 4 Глиомы зрительных 2 7 – нервов Гидроцефалия 3 Плексиформные 2 нейрофибромы Кисты головного мозга 1,7 1 – MPNST - 5 – (Rasmussen et al., 2000;

Gregorian et al., 2009;

Melean et al., 2010;

Бочков, 2011) При оценке клинических проявлений НФ1 больных из РБ по степени тяжести, у 54% пациентов диагностировано тяжелое течение заболевания, у 46% – средней тяжести и легкое.

Поиск мутаций в гене NF1 у больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан Нами проведен поиск мутаций в 42 экзонах гена NF1 у 69 больных с установленным клиническим диагнозом «нейрофиброматоз I типа» из 56 семей, проживающих на территории Республики Башкортостан и их родственников. Как контроль использовалась ДНК здоровых индивидов (n=50).

В качестве основного метода поиска мутаций нами был использован метод SSCP (Orita et al., 1989). Обнаруженные при SSCP-анализе образцы с измененной, по сравнению с контролем, подвижностью одноцепочечной ДНК, в дальнейшем исследовались с помощью метода секвенирования.

В результате исследования выявлено 18 типов изменений подвижности однонитевых фрагментов ДНК в 18 экзонах и прилегающих к ним интронных областях. Секвенирование образцов с измененной подвижностью позволило идентифицировать 10 различных мутаций (табл. 4) и 8 однонуклеотидных полиморфных вариантов (SNP) (табл. 5).

Таблица Спектр мутаций в гене NF1 у больных НФ1 из Республики Башкортостан Образец Мутация Локали- Изменение Тип № зация аминокислотной наследования последовательности от отца 29. с.1278GA 10a экзон p.Trp426Х 29.2 от матери 39. с.1570GA 10с экзон p.Glu541Lys 39.1 с.1973_1974 12b экзон р.Leu658ProfsX10 спорадический 46. delTC от матери 48. с.2991-1GC мутация сайта 48.1 17 интрон сплайсинга спорадический 51. от матери 43. с.3526_ 21 экзон от отца 45.0 p.Arg1176del delAGA 45.2 с.3826delC 22 экзон р.Arg1276GlufsX8 спорадический 25. с.4514+5GA мутация сайта от отца 47.0 интрон сплайсинга с.4537СТ 27a экзон спорадический 16.0 p.Arg1513Х 31 экзон от отца 44.0 c.5758_5761 p.Leu1920AsnfsX delTTGA с.6792СA 37 экзон спорадический 35.0 p.Tyr2264X Таблица Полиморфные варианты в гене NF1 у больных НФ из Республики Башкортостан.

Полиморфный вариант Локализация Эффект изменения Частота, % с.1674TC 11 экзон p.Ile558Ile 1, с.2851-16TC, rs17880825 16 интрон однонуклеотидная 5, замена в интроне 20 интрон однонуклеотидная c.3496+33CА, rs2066736 замена в интроне с.3974+38 TG, rs9894862 23-1 интрон однонуклеотидная замена в интроне с.4368-46GC, rs17881285 25 интрон однонуклеотидная 2, замена в интроне с.5172GA, rs17887014 28 экзон p.Lys1724Lys 4, с.7584AG 43 экзон p.Ser2528Ser 1, с.8050+20GA, rs55747230 46 интрон однонуклеотидная 1, замена в интроне В экзоне 10а гена NF1 обнаружена нонсенс-мутация с.1278GA у двух больных из одной семьи татарской этнической (p.Trp426Х) принадлежности (рис. 2). У пробанда женского пола, №29.0, очаговые кожные нейрофибромы больших размеров, CALM, сколиоз II степени. У отца пробанда, № 29.2, множественные кожные и подкожные нейрофибромы, CALM.

с.1278GA (p.Trp426Х) Рис. 2. Идентификация мутации с.1278GA (p.Trp426Х) в гене NF1.

В экзоне гена выявлена миссенс-мутация с.1570GA 10с NF (p.Glu541Lys) у двух больных НФ1 из одной семьи русской этнической принадлежности (рис. 3). У пробанда мужского пола, № 39.0, множественные CALM, задержка физического и умственного развития тяжелой степени. У матери пробанда, № 39.1, очаговые кожные нейрофибромы, множественные CALM.

с.1570GA (p.Glu541Lys) Рис. 3. Идентификация мутации с.1570GA (p.Glu541Lys) в гене NF1.

В экзоне гена обнаружена делеция с.1973_1974delTC 12b NF (р.Leu658ProfsX10) у одного больного башкирской этнической принадлежности со спорадическим случаем заболевания (рис. 4). У пробанда № 46.0, мужского пола, множественные CALM, плексиформная нейрофиброма области шеи с прорастанием в кости черепа и позвоночник.

с.1973_1974delTС р.Leu658ProfsX Рис. 4. Идентификация мутации с.1973_1974delTC (р.Leu658ProfsX10) в NF1.

В интроне 17 гена NF1 обнаружена известная ранее мутация сайта сплайсинга с.2991-1GC у 3-х больных из 2-х неродственных семей (рис. 5). В одной семье у 2-х больных башкирской этнической принадлежности: у пробанда мужского пола, № 48.0, очаговые кожные нейрофибромы, CALM, острый лимфолейкоз с 3 лет;

у матери пробанда, № 48.1, множество кожных и подкожных нейрофибром, CALM. В другой семье татарской этнической принадлежности у пробанда мужского пола, № 51.0, со спорадическим случаем заболевания, единичные нерофибромы области шеи, CALM. Мутация с.2991 1GC выявлена ранее у 3-х больных в Германии (Fahsold et al., 2000).

с.2991-1GC Рис. 5. Идентификация мутации с.2991-1GC в гене NF1.

В экзоне гена выявлена делеция с.3526_3528delAGA 21 NF (p.Arg1176del) у 3-х больных из 2-х неродственных семей (рис. 6). В одной семье у 2-х больных русской этнической принадлежности у пробанда мужского пола, № 45.0, множественные CALM, врожденная гидроцефалия, эпилепсия;

у отца пробанда, № 45.2, множественные подкожные нейрофибромы, CALM. В другой семье русской этнической принадлежности у пробанда мужского пола, № 43.0, с наследованием мутантного аллеля от матери, диагностированы задержка умственного развития, низкий рост, CALM, очаговые подкожные нейрофибромы, компенсированная гидроцефалия.

с.3526_3528delAGA (p.Arg1176del) Рис. 6. Идентификация мутации с.3526_3528delAGA (p.Arg1176del) в NF1.

В экзоне 22 гена NF1 обнаружена делеция с.3826delC (р.Arg1276GlufsX8) у одного больного, метиса (татарин/башкир), со спорадическим случаем заболевания (рис. 7). У пробанда мужского пола, № 25.0, диагностированы множественные подкожные нейрофибромы, в том числе больших размеров, множественные СALM. При проведении МРТ головного мозга у пациента выявлено объемное образование в области миндалины мозжечка.

с.3826delC р.Arg1276GlufsX Рис. 7. Идентификация мутации с.3826delC (р.Arg1276GlufsX8) в гене NF1.

В интроне 26 гена NF1 обнаружена мутация сайта сплайсинга с.4514+5GA (рис. 8) у одной больной русской этнической принадлежности с наследованием мутантного аллеля от отца. У пробанда № 47. диагностированы множественные СALM и характерные для НФ1 очаги Т2 взвешенной гиперинтенсивности при проведении МРТ головного мозга.

с.4514+5GA Рис. 8. Идентификация мутации с.4514+5GA в гене NF1.

В экзоне 27а гена NF1 обнаружена известная ранее нонсенс-мутация с.4537СТ у одной больной татарской этнической (p.Arg1513Х) принадлежности со спорадическим случаем заболевания (рис. 9). У пробанда № 16.0 множественные кожные и подкожные нейрофибромы небольших размеров, CALM. Мутация с.4537СT описана ранее у больных в Германии (Fahsold et al., 2000), Бельгии (Messiaen et al., 2000), Корее (Jeong et al., 2006) и Испании (Ars et al., 2000).

с.4537СТ (p.Arg1513Х) Рис. 9. Идентификация мутации с.4537СТ (p.Arg1513Х) в гене NF1.

В экзоне гена выявлена делеция 31 NF1 c.5758_5761delTTGA (p.Leu1920AsnfsX7) у одной больной, № 44.0, метиса (русская/татарка), с наследованием мутантного аллеля от отца (рис. 10). У пробанда очаговые кожные нейрофибромы в области грудной клетки, CALM, сколиоз II степени.

c.5758_5761delTTGA (p.Leu1920AsnfsX7) Рис. 10. Идентификация мутации c.5758_5761delTTGA (p.Leu1920AsnfsX7) в гене NF1.

В экзоне 37 гена NF1 обнаружена описанная ранее нонсенс-мутация с.6792СA у одной больной башкирской этнической (p.Tyr2264X) принадлежности со спорадическим случаем заболевания (рис. 11). У пробанда № 35.0 множественные CALM, ложный сустав голени, гидроцефалия. Мутация с.6792СA ранее выявлена у больных НФ1 в Испании (Ars et al., 2000), Германии (Fahsold et al., 2000), Бельгии (Messiaen et al., 2000) и Корее (Jeong et al., 2006).

с.6792СA (p.Tyr2264X) Рис. 11. Идентификация мутации с.6792СA (p.Tyr2264X) в гене NF1.

Таким образом, нами идентифицированы внутригенные мутации в гене NF1 у 23% исследованных больных НФ1 из РБ. При сопоставлении выявленных мутаций с клиническими проявлениями болезни гено фенотипических корреляций не обнаружено.

Идентификация протяженных делеций гена NF1 у больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан С целью выявления протяженных делеций гена NF1 проведен анализ микросателлитных локусов STR(TCCA)n в интроне 1, IVS27AC28.4 в интроне 27, D17S2237 (GXAlu) в интроне 27b, IVS38TG53.0 в интроне 38 и диаллельных полиморфных вариантов rs1801052 в экзоне 5, rs2066736 в интроне 20, rs9894862 в интроне 23-1 у 69 больных НФ1 из РБ, проживающих на территории Республики Башкортостан и 50 их родственников.

В результате проведенного исследования было выявлено два пробанда, гомозиготных по всем анализируемым маркерам. У пробанда № 3.0, женского пола, метиса (русская/татарка), со спорадическим случаем заболевания, врожденная гидроцефалия множественные (прооперирована), CALM, подкожные нейрофибромы, отставание в физическом и умственном развитии, сколиоз III степени. У пробанда № 52.0, женского пола, татарской этнической принадлежности, со спорадическим случаем заболевания, диагностированы плексиформная нейрофиброма, множественные подкожные CALM, нейрофибромы, дизморфизм лица, поперечные ладонные складки.

Таким образом, делеции протяженного участка гена NF1 обнаружены у 3% исследованных больных НФ1 из РБ. У данных больных определено тяжелое течение заболевание с развитием осложнений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Эпидемиологическое исследование нейрофиброматоза типа в I Республике Башкортостан выявило распространенность заболевания на уровень ниже, чем в среднем по миру. Распределение больных нейрофиброматозом I типа по этническому составу отражает демографическую ситуацию в республике.

При клиническом обследовании больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан выявлено более тяжелое течение заболевания при наследовании болезни от матери – у данных пациентов низкий рост, скелетные аномалии и задержка умственного развития диагностировались чаще. При анализе осложнений зафиксирована значительно более высокая частота развития опухолей головного мозга и низкая регистрация глиом зрительных нервов и плексиформных нейрофибром в сравнении с таковыми в мире.

Злокачественные опухоли из оболочек периферических нервов не диагностированы ни у одного больного. Более чем у 50% пациентов установлено тяжелое течение заболевания.

В результате анализа нуклеотидной последовательности 42 экзонов гена NF1 у 69 больных из 56 семей из Республики Башкортостан выявлено мутаций у 16 пациентов, что составило 23% в выборке больных. Мутации с.2991-1GC, с.4537СТ (p.Arg1513Х), с.6792СA (p.Tyr2264X) представлены в базе данных. Большинство идентифицированных мутаций приводят к укорочению белковой молекулы. При сопоставлении выявленных мутаций с клиническими проявлениями болезни гено-фенотипических корреляций не установлено, даже у членов одной и той же семьи. У больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан идентифицировано полиморфных вариантов, 2 из которых описаны впервые.

В результате проведенного анализа микросателлитных маркеров и D17S2237 (GXAlu), 1int/STR(TCCA)n, IVS27AC28.4, IVS38TG53. диаллельных полиморфных вариантов rs1801052, rs2066736, rs9894862 в семьях с нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан выявлены два неродственных пробанда, гомозиготных по всем маркерам, что является основанием для предположения о наличии у них протяженной делеции гена NF1. У данных больных отмечено тяжелое течение болезни с осложнениями.

ВЫВОДЫ Распространенность нейрофиброматоза типа в Республике 1. I Башкортостан составляет 4,7:100000 населения, что на порядок ниже среднемировой распространенности (28:100000 населения). Установлено неравномерное территориальное распределение заболевания по районам.

Выявлено 10 мутаций в гене NF1 у 16 пациентов, что составило 23% в 2.

выборке больных нейрофиброматозом I типа. Мутации с.1278GA с.1570GA с.1973_1974delTC (p.Trp426Х), (p.Glu541Lys), с.3526_3528delAGA с.3826delC (р.Leu658ProfsX10), (p.Arg1176del), с.4514+5GA, (р.Arg1276GlufsX8), c.5758_5761delTTGA (p.Leu1920AsnfsX7) описаны впервые.

Идентифицированы протяженные делеции гена NF1 у 3% обследованных 3.

больных нейрофиброматозом типа. У данных пациентов I диагностировано тяжелое течение заболевания.

Установлено, что у больных нейрофиброматозом типа 4. 45% I наследственная форма заболевания, у 55% – спорадические случаи. Из выявленных мутаций 8 являются уникальными для каждой семьи, из них 4 – спорадические случаи. Описанная ранее в литературе мутация с.2991 1GC обнаружена в двух неродственных семьях: со спорадическим случаем и с наследованием от матери. Мутация с.3526_3528delAGA (p.Arg1176del) выявлена в двух неродственных семьях: в одной семье – наследование от матери, в другой – от отца.

У больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан 5.

обнаружено 8 полиморфных вариантов в гене NF1, из которых с.1674TC (p.Ile558Ile) и с.7584AG (p.Ser2528Ser) описаны впервые.

Выявлено утяжеление течения нейрофиброматоза I типа по четким 6.

критериям у больных, наследовавших заболевание от матери.

Корреляции между типом мутации в гене NF1 и особенностями 7.

клинических проявлений у больных нейрофиброматозом I типа из Республики Башкортостан не выявлено.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К. Клинико эпидемиологическое исследование нейрофиброматоза типа в Республике Башкортостан // Якутский медицинский журнал. 2009. № (26). С. 23–25.

2. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К. Комплексный подход в изучении особенностей нейрофиброматоза 1 типа // Креативная хирургия и онкология. 2012. № 1. С. 98–102.

3. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К. Особенности нейрофиброматоза 1 типа // Медицинская генетика. 2012. № 3. С. 3–16.

4. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К.

Эпидемиологическое и молекулярно-генетическое изучение нейрофиброматоза 1 типа в Республике Башкортостан // Медицинская генетика. Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков. 2010. Ростов-на-Дону. С. 122.

5. Mustafin R., Bermisheva M., Khusnutdinova E. Epidemiological and molecular genetic study of Neurofibromatosis type 1 in the Republic of Bashkortostan // European Human Genetics Conference. 2011. Amsterdam, Netherlands. P. 428.

6. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К. Клинико эпидемиологическое и молекулярно-генетическое изучение нейрофиброматоза 1 типа в Республике Башкортостан // Биомика.

Электронный журнал ИБГ УНЦ РАН. 2011. № 2. С. 86–88.

7. Мустафин Р.Н., Бермишева М.А., Хуснутдинова Э.К. Поиск мутаций в гене больных нейрофиброматозом типа в Республике NF1 Башкортостан // Медицинская генетика. Материалы конференции «Актуальные вопросы онкогенетики». 2011. С. 16–17.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ МРТ Магнитно-резонансная томография НФ1 Нейрофиброматоз I типа РБ Республика Башкортостан Пятна цвета кофе-с-молоком CALM Злокачественные опухоли из оболочек периферических MPNST нервов Ген нейрофиброматоза I типа NF SSCP Single strand conformation polymorphism (конформационный полиморфизм одноцепочечной ДНК) SNP Single-nucleotide polymorphism (однонуклеотидный полиморфизм)

 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.