авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 ||

Моноклональные антитела в изучении структурных белков патогенных для человека вирусов

-- [ Страница 2 ] --

В связи с этим, целью данного этапа работы явилось получение на основе гибридомных МКА 9Е2, нейтрализующих все исследуемые штаммы ВЗН, рекомбинантных одноцепочечных (scFv 9E2) и гуманизированных (Fc 9E2) антител (рисунок 5) и проведение сравнительной оценки их свойств и нейтрализующей активности. Рекомбинантные антитела были получены под руководством сотрудника нашего Центра А.В. Перебоева совместно с сотрудниками Центра генотерапии (Университета Алабамы, Бирмингем, США) и представлены нам для исследования. С целью определения белка мишени для взаимодействий антиген-антитело, методом иммуноблота мы визуализировали реагирование scFv9E2 антител с ВЗН, перенесенным на мембрану. Как показали результаты иммуноблота, представленные на рисунке 6, очищенный препарат ВЗН взаимодействовал с рекомбинантным полипептидом ~ 30 кДа в составе лизата клеток штамма pOPE101/9E2. По видимому, антитела scFv 9E2 имитируют паратоп гибридомных МКА 9Е2 и могут быть использованы для создания гуманизированных антител.

Рекомбинантные химерные Fc-9E2 антитела были получены и очищены, как описано ранее [Pereboev A, et al 2008]. Мы фракционировали очищенные Fc-9E2 антитела в электрофорезе. Для сравнения на рисунке показана электрофореграмма МКА 9Е2 и очищенных гуманизированных антител Fc-9E2, подготовленных в редуцированных и нередуцированных (то есть без нагревания и обработки меркаптоэтанолом) условиях. Методом иммуноблота с ВЗН было показано (рисунок 7), что гуманизированные Fc-9E антитела, как и гибридомные МКА 9Е2, взаимодействуют с белком Е ВЗН, перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану.

Antiviral Res. 2008 Jan;

77(1):6-13.

Genetically delivered antibody protects against West Nile virus. [Pereboev A, et al 2008] Рисунок 6. Анализ рекомбинантных scFv 9E2 антител, синтезирующихся в E.coli.

Рисунок 5. Схема конструирования Электрофореграмма и иммуноблот.

рекомбинантных одноцепочечных А - 1 и 5 - лизат E.coli JM103;

2 - 4, 6 и 7 - лизат scFv 9Е2 и гуманизированных Fc- клонов E.coli JM103 трансформированных основе плазмидой pOPE101/9E2;

8 – белки-маркеры 9Е2 антител на нейтрализующих гибридомных МКА молекулярного веса фирмы «Sigma», 200, 96, 66, 43, 29, 18 и 14 кДа, соответственно. Б – 1 9Е2 против ВЗН. лизат E.coli JM103 (отрицательный контроль);

2 - лизат штамма-продуцента, синтезирующего антитела scFv 9E2;

Итак, нами было продемонстрировано, что гуманизированные Fc-9E антитела несут детерминанты Fc-фрагмента человеческого иммуноглобулина, так как реагируют с антивидовым коньюгатом, и в тоже время сохраняют специфичность гибридомных антител, так как взаимодействуют с белком Е ВЗН.

Для того чтобы убедиться, что полученные рекомбинантные аналоги (scFv 9E2 и Fc-9E2) сохраняют свойство природных антител, нейтрализовать инфекционность вирионов ВЗН, мы провели сравнительное изучение нейтрализующей активности полученных рекомбинантных и гибридомных 9Е2 антител.

.

Рисунок 7. Анализ рекомбинантных Fc-9Е2 антител.

Электрофореграмма. 1 - маркеры молекулярного веса белков фирмы «Sigma», 200, 96, 66, 43, 29, 18 и 14 кДа, соответственно;

2 – антитела Fc-9Е2 (10 мкл), приготовленные без меркаптоэтанола и нагревания;

3 - Fc-9Е2 (10 мкл), приготовленные c меркаптоэтанолом и нагреванием;

4 - гибридомные очищенные МКА 9Е2, 5мкл, (c меркаптоэтанолом и нагреванием).

Иммуноблот. Определение взаимодействия Fc-9E2 антител с белком Е ВЗН.

Полоски мембраны с белками ВЗН (штамм Vlg99-27889) обработаны: 1 гибридомными МКА 9Е2 в разведении (1/1000);

2 – очищенными рекомбинантными антителами Fc-9Е2 в разведении (1/1000);

3 рекомбинантными антителами Fc-9Е2 (культуральная среда от трансфекцированных клеток-продуцентов антител);

4 – лизат клеток нетрансфекцированных плазмидой.

Как видно из представленных данных (таблица 19), как гибридомные МКА 9Е2, так и их рекомбинантные аналоги (scFv 9E2 и Fc-9E2) нейтрализовали инфекционность вирионов ВЗН, штаммы Vlg99-27889 и Eg 101, в различных разведениях, то есть обладали различной противовирусной активностью. Так одноцепочечные антитела scFv 9E2, хотя и были использованы в концентрации ~ в 4 раза выше, чем гуманизированные антитела Fc-9E2, проявляли нейтрализующую способностью в 200-400 раз ниже.

Нейтрализующая активность полученных химерных антител Fc-9E2 в разведении 1/1024000 против 100 ТЦД50 штаммов Vlg99-27889 и Eg 101 ВЗН была сравнима с таковой гибридомных МКА 9Е2.

Таблица 19.

Исследование противовирусного действия очищенных гибридомных МКА 9Е и их рекомбинантных аналогов в реакции нейтрализации ВЗН.

Ингибирование вирионов штаммов ВЗН Антитела (С мг/мл) Штамм Vlg99-27889 Штамм Eg 1000 100 ТЦД50 ТЦД50 ТЦД50 ТЦД Титры антител (обр. величины), вызывающие эффект нейтрализации вируса* МКА 9Е2 1024000 1024000 (2,8) scFv 9E2 но 10240 но (2,5) Fc-9E2** 128000 1024000 (0,6) Fc-9E2*** 128000 1024000 (2,5) NS/0 асцит - - - контроль - - - вируса + + + + контроль клеток Примечание: * - обратные величины разведения антител или титры МКА, вызывающие эффект нейтрализации вируса;

- нет эффекта нейтрализации, полное цитопатическое действие вируса на клетки;

+ монослой клеток без явлений ЦПД;

но - не определяли;

** аффинноочищенные антитела (~90% чистоты) продуцируемые в культуре клеток А549 и очищенные, используя белок А;

***- антитела (~30%), продуцируемые в культуре клеток 293 и очищенные, используя переосаждение в сульфате аммония.

Таким образом, совокупность представленных нами результатов по сравнительному изучению свойств гибридомных МКА 9Е2 и их рекомбинантных аналогов, одноцепочечных scFv 9E2 и химерных Fc-9E антител, позволяют утверждать:

- полученные рекомбинантные антитела сохранили конформацию вариабельного домена исходных МКА 9Е2 и способны взаимодействовать с эпитопами поверхностного гликопротеина Е ВЗН, штаммов Vlg99-27889 и Vlg00-27924, циркулирующих на территории России;

- при взаимодействии с ВЗН рекомбинантные антитела (scFv 9E2 и Fc-9E2) проявляют свойство гибридомных МКА 9Е2, способность нейтрализовать инфекционность вирионов ВЗН, штаммов Vlg99-27889 и Eg 101.

Нейтрализующая активность полученных химерных антител Fc-9E2 в разведении 1/1024000 против 100 ТЦД50 вирионов штаммов Vlg99-27889 и Eg 101 ВЗН сравнима с таковой гибридомных антител и лишь несколько ниже (в разведении 1/12800 для Fc-9E2 вместо 1/1024000 для МКА 9Е2) против ТЦД50 штамма Vlg99-27889 ВЗН;

- относительная простота наработки и очистки гуманизированных антител Fc-9E2 в совокупности с вышеизложенными свойствами делает такие антитела перспективным объектом для дальнейшей оценки возможности их использования в разработке средств иммунотерапии против лихорадки Западного Нила.

ВЫВОДЫ 1. Cозданы и заложены на хранение (-1960С) в банк гибридом ГНЦ ВБ "Вектор" уникальные коллекции гибридных клеток-продуцентов, более чем 700 гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к различным биологически активным молекулам и к структурным белкам патогенных для человека вирусов, в том числе, к филовирусам, вирус Марбург (ВМ) ( гибридома) и вирус Эбола (ВЭ) (38 гибридом);

к ортопоксвирусам, вирус эктромелии (ВЭм) (125 гибридом), вирус осповакцины (ВОВ) (27 гибридом), вирусы оспы коров (ВОК) (9 гибридом);

к флавивирусам, вирус Западного Нила (ВЗН) (25 гибридом).

2. В результате использования панели МКА против структурных белков вирусов Марбург и Эбола получены приоритетные данные по антигенной структуре нуклеокапсидных, NP и VP35, и матриксного VP40 белков и их роли в формировании иммунного ответа:

- впервые показано, что белки NP и VP35 вирусов Марбург и Эбола содержат перекрестно-реактивные антигенные детерминанты, взаимодействующие с моноклональными и поликлональными антителами против филовирусов;

- впервые установлено, что МКА к NP, VP35 и VP40 белкам ВМ обладают антивирусной активностью - вызывают in vitro лизис инфицированных клеток в присутствии комплемента;

а предварительное введение морским свинкам МКА к VP40 ВМ ингибирует развитие филовирусной инфекции у животных;

- обнаружено, что иммунный ответ, как при иммунизации инактивированным вирусом, так и в процессе развития филовирусной инфекции у выживших животных, формируется, прежде всего, на нуклеокапсидные, NP и VP35, и VP40 матриксный белки;

- выявлено, что вирусные белки (NP, VP40, VP35 ВМ и VP35 ВЭ) и их рекомбинантные аналоги, полученные в результате экспрессии полноразмерного гена вирусного белка в E.coli, при введении в животных индуцируют синтез противовирусных антител, которые перекрестно реагируют с этими белками, что указывает на близкое сходство антигенной структуры вирусных белков и их рекомбинантных аналогов.

3. Впервые на структуре белка VP35 ВМ выявлено две антигенных детерминанты, по одной на N-концевой и С-концевой части последовательности, соответственно. Одна антигенная детерминанта локализована между 251-278 ао с помощью МКА, а вторая между 1-174 ао с помощью поликлональных антител;

- при картировании белка VP35 ВЭ впервые показано, что первые аминокислотных остатков N-концевой части последовательности принципиально важны для формирования антигенной структуры белка.

Причем первые 36 ао N-концевой части VP35 определяют формирование не менее двух эпитопов для паратопов МКА.

4. В результате анализа взаимодействия панели МКА с ортопоксвирусами выявлено наличие родоспецифических антигенных детерминант, определяющих перекрестную реактивность МКА против ВЭм с патогенными для человека ортопоксвирусами - ВОВ, ВОК и вирусом натуральной оспы:

- так 112 типов МКА (~ 90%), из 125 исследованных МКА против ВЭм, перекрестно взаимодействовали с антигенными детерминантами ВОВ и ВОК, и лишь 12 типов МКА (~ 10%) реагировали только с видоспецифическими детерминантами белка слияния ВЭм (ген 129L);

- белки слияния ВЭм (ген 129L), ВОВ (ген A27L), ВОК и ВНО (ген A30L) содержат общие перекрестно-реактивные эпитопы, способные индуцировать синтез В-клетками вируснейтрализующих антител против ВОВ и ВНО;

исследованные рекомбинантные полипептиды pr129L (ВЭм) и prA30L (ВНО) имитируют эти вирусные эпитопы.

5. С помощью панели МКА против штамма Vlg99-27889, выделенного в году в Волгограде, выявлена значительная антигенная вариабельность современных штаммов ВЗН, циркулирующих в Евразии:

-на структурных белках ВЗН выделено не менее 13 различных эпитопов (11 из которых расположено на Е гликопротеине), которые разделены на 4 группы при обобщении данных по перекрестной реактивности МКА с вирионами штаммов ВЗН и вирусом КЭ. МКА, взаимодействующие с группой I, способны нейтрализовать все 7 исследуемых штаммов ВЗН. Нейтрализующая активность МКА групп II-IV являлась вариабельной. Максимальные различия в реакции нейтрализации выявлены у штаммов Hp-94 и Tur-2914, у которых, по-видимому, изменены 7 эпитопов.

6. Продемонстрировано наличие двух дискретных районов белка Е ВЗН, вовлеченных в реакции (РН и РТГА) взаимодействия вируса с клеткой. Это район ао 321-466, включающий домен III (305-394 ао) белка E ВЗН и несущий эпитопы для МКА, нейтрализующих все исследуемые штаммы ВЗН. Второй район взаимодействия нейтрализующих МКА был локализован между ао 1 126. Эта последовательность включает аминокислотные остатки I и II доменов E белка и, в частности, пептид слияния (98-113 ао) белка Е ВЗН, который участвует в проникновении вируса в клетку.

7. Получены рекомбинантные аналоги нейтрализующих МКА 9Е2, одноцепочечные scFv 9E2 и гуманизированные Fc-9E2 антитела, которые сохранили способность взаимодействовать с эпитопами гликопротеина Е ВЗН и нейтрализовать in vitro инфекционность вирионов ВЗН. Нейтрализующая активность полученных гуманизированных антител Fc-9E2 сравнима с таковой у гибридомных антител.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ.

СТАТЬИ.

1. Pereboev A, Borisevich V, Tsuladze G, Shakhmatov M, Hudman D, Kazachinskaia E, Razumov I, Svyatchenko V, Loktev V, Yamshchikov V.

Genetically delivered antibody protects against West Nile virus //Antiviral Res. – 2008.- Vol.7, N1. – P.6-13.

2. Razumov I.A., E.I. Kazachinskaia, V.A. Ternovoi, E.V. Protopopova, I.V.

Galkina*, V.L. Gromashevskii*, A.G. Prilipov*, D.K. L'vov*, and V.B. Loktev.

Neutralizing monoclonal antibodies against Russian Strain of the West Nile Virus.

//Viral Immunology. - 2005, V.18. N3. - P. 558-568.

3. Разумов И.А, И.П. Гилева, М.А. Васильева, Т.С. Непомнящих, М.Н.

Мишина, Е.Ф. Беланов, Г.В. Кочнева, Е.Е. Коновалов, С.Н. Щелкунов и В.Б.

Локтев. Нейтрализующие моноклональные антитела перекрестно реагируют с белками слияния вирусов эктромелии (ГЕН 129L) и натуральной оспы (ГЕН A30L) //Мол. Биология – 2005. - том 39, № 6. - C.1046-1054.

4. Разумов И.А., М.А. Васильева, О.А. Серова, Л.В. Артемьева, Н.И.

Бормотов, Е.Ф. Беланов, Г.В. Кочнева, Е.Е. Коновалов, В.Б. Локтев.

Изучение нейтрализующей активности и перекрестного реагирования моноклональных антител к вирусу эктромелии с патогенными для человека ортопоксвирусами //Вестник РАМ. – 2004. - том 8. - C. 19-22.

5. Т.Н. Рудзевич, В.А.Терновой, Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, А.А.

Чепурнов, В.Б. Локтев, С.В. Нетёсов. Выявление антигенных детерминант на N-конце белка VP35 вируса Эбола с помощью коротких рекомбинантных фрагментов этого белка //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2003. - № 2. v- C. 38-41.

6. A.V. Sorokin, E.I. Kazachinskaia, A.V. Ivanova, A.V. Kachko, S.V. Netesov, A.A. Bukreyev, V.B. Loktev, and I.A. Razumov, Mapping of two dominant sites of VP35 of Marburg virus. //Viral Immunology. – 2002 - V.15/ - P. 481-492.

7. T. Cheusova, A.V. Kachko, A.V. Sorokin, E.I. Kazachinskaia, I. Cheshenko, I.

Razumov, S.V. Netesov, E. Ryabchikova. Studies of the expression of Marburg virus recombinant nucleoprotein. //G.I.T. Imaging & Microscopy – 2002. - V.4 P. 26-27.

8. Казачинская Е. И., В. А. Терновой, Т. Н. Рудзевич, С. В. Нетесов, А. А.

Чепурнов, И. А. Разумов. Исследование антигенной структуры белка VP вируса Эбола. //Вопр. Вирусологии. – 2001 - том 46, № 5. - C.25-31.

9. Разумов И.А., Е.Ф. Беланов, Н.И. Бормотов, Е.И. Казачинская. Выявление противовирусной активности моноклональных антител, специфичных к белкам вируса Марбург//Вопр. Вирусологии. – 2001. - т.46, №1, - с.33-37.

10. Качко А.В., Т.Б. Чеусова, А.В. Сорокин, Е.И. Казачинская, И.О. Чешенко, Е.Ф. Беланов, А.А. Букреев, А.В. Иванова, И.А Разумов, Е.И. Рябчикова, С.В Нетесов. Сравнительное изучение морфологии и антигенных свойств рекомбинантных аналогов нуклеопротеина вируса Марбург //Мол. Биология.

- 2001, том 35, № 3. - C.492-499.

11.. Казачинская Е.И, А.В. Перебоев, А.А. Чепурнов, Е.Ф, Беланов, И.А.

Разумов. Моноклональные антитела к вирусу Эбола: получение, характеристика и изучение перекрестной реактивности с вирусом Марбург //Вопр. Вирусологии. – 2000. - т.45, N3.- C.40-44.

12. Ivan V. Surovtseva, Ivan A. Razumovb, V.M. Nekrasov, Alexander N. Shvalovc J.T. Soini, V.P. Maltsev, A.K. Petrov, V.B. Loktev and A.V. Chernyshev Mathematical modeling the kinetics of cell distribution in the process of ligand receptor binding //J.theor. Biol. – 2000. - V.206, N3 - P. 407-417.

13. А.В.Сорокин, Е.И. Казачинская, А.В Качко, А.В. Иванова, А.А. Букреев, И А.Разумов. Сравнительное исследование антигенных и иммуногенных свойств природного и рекомбинантного белков VP35 вируса Марбург //Вопр. Вирусологии. - 1999.-т.44, N5.- C.274-279.

14. Ivan V. Surovtseva, Ivan V. Razumovb, Alexander N. Shvalovc Kinetic study of formation of antigen-antibody complexes on the cell surface with the scanning flow cytometry //SPIE Proceedings. - 1999 - Vol.3604. - P. 199-206.

15. Разумов И.А., Е.Ф. Беланов, А.А. Букреев, Казачинская Е.И.

Моноклональные антитела к белкам вируса Марбург и их иммунохимическая характеристика //Вопр. Вирусологии. – 1998. N6. C.274-279.

16. Кузьмичева Г.А., Кувшинов В.Н., Разумов И.А., Иванисенко В.А., Ерошкин А.М., Мишин В.П., Ушакова Т.А., Локтев В.Б., Ильичев А.А., Сандахчиев Л.С. Использование фаговой библиотеки пептидов в картировании группоспецифического гемагглютинирующего домена гликопротеина Е2 альфавирусов //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1997. N4-C.25-29.

17. Кузьмичева Г.А., Кувшинов В.Н., Разумов И.А., Иванисенко В.А., Ерошкин А.М., Мишин В.П., Орешкова С.Ф., Локтев В.Б., Ильичев А.А., Сандахчиев Л.С. Локализация группоспецифического, гемагглютинирующего эпитопа гликопротеина Е2 альфавирусов с помощью фаговой библиотеки пептидов //ДАН РФ. - 1997-Т.352, N1.-C.112-116.

18. Pereboev A.V., I.A.Razumov, V.A.Svyatchenko, V B Loktev. Glycoprotein E of the Venezuelan and Eastern equine encephalomyelitis viruses contain multiple cross-reactive epitopes //Arch.Virology. – 1996. - Vol.141, N. 11. – P.2191-2205.

19. Лифке В.В., И.А. Разумов, С.Н. Коновалова. Моноклональные антиидиотипические антитела, имитирующие антигенную детерминанту сайта гемагглютинации гликопротеина Е2 вируса ВЭЛ //Вопр. вирусологии. 1997. - Т.42,N1 - C.19-23.

20. Ильичев А.А. Меламед Н.В., Разумов И.А., Максютов И.А., Перебоев А.В., Закабанин А.И., Локтев В.Б. (1996). Изучение экспресии фрагментов гена белка Е2 вируса ВЭЛ в системе основанной на РНК-полимеразе фага Т //Мол. биология 1996. - T. 30, вып 1. - С. 76-83.

21. Шпилевая М.В., Кущ А.А., Разумов И.А., Архипов В.Н., ЦилинскийЯ.Я., Локтев В.Б. (1995). Эпитопная специфичность и протективная активность моноклональных антител к вирусу венесуэльского энцефаломиелита лошадей //Вопр. Вирусологии. - 1995, т. 40. N 2- С. 82-85.

22. Разумов И.А., Т.Н.Разумова Изучение роли моноклональных антител к вирусу ВЭЛ в качестве специфических активаторов in vivo иммунокомпетентных клеток, выявляемых in vitro //Вопр. вирусологии. 1995.N3.- C.106- 23. E.V. Agapov, I.A. Razumov, I.V. Frolov, A.A. Kolykhalov, S.V. Netesov and V.B. Loktev. Localization of four antigenic sites involved in Venezuelan Equine Encephalomyelitis virus protection //Arch.Virology.- 1994.-Vol.139.N1 2.- P.173-181.

24. Razumov I.A., A.D.Khusainova, E.V.Agapov, S.Ya.Gaidamovich, A.V.Pereboev, A.A.Kolykhalov, S.V.Netesov & V.B.Loktev, The study of the hemagglutination activity domains of VEE and EEE viruses //Intervirology. 1994. - Vol.37, N6.- P. 356-360.

25. Святченко В.А., Перебоев А.В., Агапов Е.В., Разумов И.А., и др.

Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ. Картирование сайтов Е2-2 и Е2-6 гликопротеина Е2 с помощью пептидов //Вопр. Вирусологии. – 1993. T.38, N4- P.162-167.

26. Перебоев А.В., Святченко В.А., Агапов Е.В., Разумов И.А., и др.

Изучение антигенной структуры гликопротеинов Е1 и Е2 вируса ВсЭЛ при помощи МКА //Вопр. Вирусологии.- 1993. - T.38, N3. - P.117-122.

27. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В,. Протопопова Е.В., Лебедева С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ при помощи моноклональных антител. 1. Получение гибридом и антигенная структура белка Е1 вируса ВЭЛ //"Итоги науки и техники" сер. Вирусология. -1992 т.28, часть 2 - "Арбовирусы и арбовирусные инфекции" под ред.

Д.К.Львова,-Москва - С. 66-72.

28. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В,. Протопопова Е.В., Лебедева С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ при помощи моноклональных антител. 1. Антигенная структура белка Е2 и протективная активность моноклональных антител // "Итоги науки и техники" сер.

Вирусология, - - 1992 -т.28, часть 2 - "Арбовирусы и арбовирусные инфекции" под ред. Д.К.Львова,-Москва - С. 73-80.

29. Агапов Е.В., Лебедева С.Д., Разумов И.А., Фролов И.В., Колыхалов А.А., Локтев В.Б., Нетесов С.В., Сандахчиев Л.С., 1991, Варианты вируса ВЭЛ, резистентные к нейтрализующему действию моноклональных антител.

//Доклады Академии наук СССР. - 320, N 6. - C.1485 -1488.

30. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В., Протопопова Е.В. Лебедева С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры гликопротеина Е1 вируса Венесуэльского энцефаломиелита лощадей с помощью моноклональных антител //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1991.N. – C. 21-24.

31. Разумов И.А., Агапов Е.В., Протопопова Е.В., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры альфавирусов при помощи моноклональных антител //"Итоги науки и техники" сер. Вирусология. - 1991 T.24 "Арбовирусы и арбовирусные инфекции" под ред. Д.К.Львова,- Москва. С. 54-57.

32. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В., Протопопова Е.В., Лебедева С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры гликопротеина Е2 вируса Венесуэльского энцефаломиелита лошадей с помощью крысиных моноклональных антител //Вопросы вирусологи. – 1991. Т.36. N 1 - C.34-37.

33. Разумов И.А., Перебоев А.В., Агапов Е.В.,Протопопова Е.В., Хусаинова А.Д., Агапов Е.В., Мельникова Е.Э., Гайдамович С.Я., Локтев В.Б.

Изучение рецепторной области вируса Венесуэльского энцефаломиелита лошадей при помощи моноклональных антител //Вопросы вирусологии. – 1991. T.36, N. 6. - C.489 - 492.

34. Razumov I A, Agapov E V, Pereboev A V, Protopopova E V, Lebedeva S D, Loktev V.B. Investigation of antigenic structure of attenuated and virulent Venezuelan equine encephalomyelitis virus by of monoclonal antibodies //Biomedical Science -1991.Vol.2 - P. 610-615.

35. Гайдамович С.Я., Локтев В.Б., Лаврова Н.А., Максютов А.З., Мельникова Е.Е., Перебоев А.В., Протопопова Е.В., Разумов И.А., Свешникова Н.А., Хусаинова А.Д. Моноклональные антитела перекрестно реагирующие с вирусом клещевого энцефалита и вирусом Венесуэльского энцефаломиелита лошадей. //Вопр. Вирусологии. - 1990.№3. – C.221-225.

ПАТЕНТЫ.

1. Васильева М.А., Разумов И.А., Локтев В.Б., Беланов Е.Ф.,. Коновалов Е.Е. «Штамм гибридных клеток животного Rattus norvegicus L. 122H9 продуцент перекрестно-реактивных нейтрализующих моноклональных антител против ортопоксвирусов патогенных для человека» Патент РФ на изобретение № 2265658 (Заявка на патент №2004126520, приоритет от 01.09.2004.

2. Казачинская Е.И, Алексенко Т.П., Разумов И.А, Протопопова Е.В., Локтев В.Б. «Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L. 9Е2, используемый для получения моноклональных антител к белку Е вируса Западного Нила штамм WNV/LEIV-Vlg99-27889». Патент РФ № 2265658 (заявка на патент №2004100930, приоритет от 09.01.2004).

3..А.В. Сорокин, И.А. Разумов.,Е.И. Казачинская, А.В. Качко,А.В.

Иванова, В.П. Мишин,А.А. Букреев, Е.Ф. Беланов,, С.В.Нетесов, В.Б.Локтев Рекомибинантная плазмидная ДНК Q_f35, кодирующая гибридный полипептид f35, обладающий антигенными и иммуногенными свойствами белка VP35 вируса Марбург, способ ее получения, и штамм бактерий E.Coli – сверхпродуцент рекомбинантного полипептида f35. Патент РФ 2144565. Положительное решение формальной экспертизы по заявке N 98120373 от 12 ноября 1998.

4. Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, В.Б. Локтев. Заявка на изобретение:

"Штамм гибридных культивируемых клеток животного Rattus norvegicus, используемый для получения моноклональных антител к вирусу гепатита А человека." Патент РФ № 2142507 Положительное решение формальной экспертизы от 11.08.97 по заявке на патент РФ N 97107909. от 13.05.

Pages:     | 1 ||
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.