авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Вирус западного нила в различных экосистемах юга западной сибири

На правах рукописи

Кононова Юлия Владимировна ВИРУС ЗАПАДНОГО НИЛА В РАЗЛИЧНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ЮГА ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.02 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Владимир – 2010

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России

Научный консультант:

кандидат биологических наук Шестопалов Александр Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Борисов Владимир Владимирович, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир доктор биологических наук Пономарев Всеволод Алексеевич, ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.К. Беляева», г. Иваново

Ведущая организация:

ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», г. Москва

Защита состоится « » апреля 2010 г. в «10» часов на заседании диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГУ «ВНИИЗЖ», тел/факс. (4922) 26-15-

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и на сайте: http://www.arriah.ru

Автореферат разослан « » марта 2010 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук А.П. Пономарев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Вирус Западного Нила (ВЗН), впервые изолированный в 1937 г. в Уганде, является представителем семейства Flaviviridae, рода Flavivirus, антигенного комплекса японского энцефалита и относится к группе арбовирусов.

Циркуляция ВЗН в природных очагах поддерживается в цепочке птицакомардругое позвоночное животное, при этом основная роль в поддержании циркуляции принадлежит птицам;

с птицами также может быть связан занос вируса на неэндемичные территории (Львов Д. К., 2000). ВЗН имеет широкий круг восприимчивых хозяев – он способен инфицировать многие виды птиц, млекопитающих (включая человека) и рептилий (Austin R. J.

et al., 2004;

Eidson M. et al., 2001;

Chowers M. Y. et al., 2001;

Weese J. S. et al., 2003;

Miller D. L. et al., 2003). Клиническая картина вызываемого им заболевания у восприимчивых хозяев варьирует от бессимптомных форм до лихорадки и менингоэнцефалита.

Ареал ВЗН включает в себя Африку, Южную и Центральную Европу, Австралию и Южную Азию (Львов Д. К., 2000;

Campbell G. L. et al., 2002). В России ВЗН циркулирует на территории Волгоградской, Астраханской, Ростовской областей и в Краснодарском крае (Атлас распространения природно-очаговых инфекций на территории Российской Федерации, 2001). В 90-е гг. ХХ века наблюдалась активизация очагов циркуляции ВЗН в пределах исконных эндемичных территорий (Tsai T. F. et al., 1998;

Triki H. et al., 2001;

Guthrie A. J. et al., 2003), а также интродукция вируса на Североамериканский континент (Lanciotti R.S. et al., 1999). Эти процессы характеризовались большим числом тяжёлых клинических форм и летальных исходов как среди заболевших людей, так и среди животных. Так, во время вспышек ЛЗН среди людей уровень смертности составил 4-12,5% (Tsai T. F. et al., 1998;

Update: West Nile Virus Encephalitis, 1999), некоторые эпизоотии среди лошадей характеризовались летальностью 38-57% (Castillo-Olivares J., and Wood J., 2004). Филогенетический анализ штаммов ВЗН, выделенных во время вспышек в различных частях ареала в конце ХХ–начале ХХI вв., показал принадлежность большинства из них к генотипу Ia (Lanciotti R. S. et al., 2002).

Юг Западной Сибири связан с эндемичными по ВЗН территориями миграционными путями многих видов птиц. Для отдельных районов на юге Западной Сибири установлен и подтверждён сезонный занос перелётными птицами ВЗН Ia генотипа (Терновой В. А. и др., 2004). В то же время установление факта заноса ВЗН на юг Западной Сибири не дает ответа на вопрос о возможности формирования местных очагов циркуляции вируса. Для изучения этого процесса необходим комплексный эколого-вирусологический подход, важной составляющей которого являются современные сведения о фауне потенциальных участников трансмиссивного цикла ВЗН и эпизоотических процессах, протекающих в их популяциях. В отношении ВЗН восприимчивых врановых птиц региона, в большинстве относящихся к многочисленным видам, в настоящее время отсутствуют данные о колебаниях их численности и наличии эпизоотий, которые могут быть связаны с эпизоотической активностью ВЗН (Yaremych S. A. et al., 2004). В отношении популяций кровососущих комаров в степных и лесостепных районах юга Западной Сибири последние эколого-фаунистические исследования проводились в 60-70-х гг. ХХ века (Кухарчук Л. П., 1981), что не отражает современного состояния фауны, особенно в связи с произошедшими климатическими изменениями. Актуальным является также вопрос об участии в циркуляции ВЗН иксодовых клещей, многочисленных и эпидемиологически значимых кровососущих членистоногих юга Западной Сибири. Другим необходимым аспектом исследования является оценка эпидемического и эпизоотического потенциала ВЗН в регионе, что имеет практическое значение.



Сезонные трансмиссивные заболевания людей, сопровождающиеся симптомами лихорадки или энцефалита, традиционно связываются с вирусами клещевого энцефалита или омской геморрагической лихорадки, однако в части случаев этиология остаётся не установленной. Учитывая патогенность ВЗН для многих видов животных, актуальным также является изучение роли ВЗН в заболеваниях сельскохозяйственных животных на юге Западной Сибири.

Цель и задачи исследования Цель работы – изучение особенностей циркуляции вируса Западного Нила в различных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири и оценка возможного формирования очагов циркуляции ВЗН. Для её достижения необходимо было решить следующие задачи:

1. В местах вероятного заноса ВЗН в разных ландшафтных зонах юга Западной Сибири выбрать природные экосистемы с наличием потенциальных участников трансмиссивного цикла ВЗН – птиц, мелких млекопитающих, кровососущих комаров и иксодовых клещей.

2. Провести сбор и анализ образцов от потенциальных участников трансмиссивного цикла для установления факта циркуляции среди них ВЗН.

3. Провести сравнительный анализ степени зараженности ВЗН участников трансмиссивного цикла с учётом климатических параметров сезона исследования для оценки возможного формирования природных очагов циркуляции ВЗН на юге Западной Сибири.

4. Исследовать возможность вовлечения в трансмиссивный цикл вируса случайных участников – сельскохозяйственных животных и людей.

5. Исследовать генетическое разнообразие ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Научная новизна По результатам комплексных эколого-вирусологических исследований показана возможность формирования на юге Западной Сибири очагов циркуляции ВЗН, не связанных с сезонным заносом вируса перелётными птицами. Впервые с использованием современных иммунологических и молекулярно-биологических методов была показана циркуляция ВЗН у диких птиц с разным миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей на юге Западной Сибири. Впервые в условиях региона выявлена зависимость между уровнем зараженности участников трансмиссивного цикла ВЗН и климатическими характеристиками сезона исследования. Было показано, что основным параметром, влияющим на зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла, является длительность периода с температурным режимом 26°С в сезоне. На основании данных серологического мониторинга здоровых доноров и диагностики случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области, показана эпидемическая напряжённость западносибирского очага циркуляции ВЗН. Филогенетический анализ полевых и клинических изолятов ВЗН, выделенных на юге Западной Сибири в 2003- гг. показал их принадлежность к генотипу Ia и выявил генетическую близость со штаммами ВЗН, изолированными от погибших пациентов во время вспышки ЛЗН в 1999 г. в Волгограде.

Теоретическая и практическая значимость Получены современные данные об особенностях циркуляции вируса Западного Нила в различных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири, которые могут быть использованы при диагностике сезонных случаев лихорадок и менингоэнцефалитов неясной этиологии у населения этого региона. По результатам выявления случаев заболевания людей, в структуре инфекционных заболеваний населения в Новосибирской области установлена новая нозологическая форма – лихорадка Западного Нила. Генетическая близость западносибирских полевых и клинических изолятов ВЗН с патогенными для людей штаммами вируса, изолированными на юге России, свидетельствует о наличии эпидемического потенциала у ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Материалы диссертации вошли в отчёты:

- по Договору между ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора и Новосибирским областным фондом поддержки науки и высшего образования при Администрации Новосибирской области по теме «Идентификация и генотипирование вируса Западного Нила, циркулирующего в Новосибирской области»;

- по научной теме гранта РНП.2.1.1.7515 ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы».

Совместно со специалистами ТУ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Новосибирской области разработан Приказ «О мерах по диагностике лихорадки Западного Нила у людей в Новосибирской области», вступивший в силу с 25.07.2006 г.

Положения, выносимые на защиту 1. Показана циркуляция вируса Западного Нила среди диких птиц с разным миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей в различных экосистемах юга Западной Сибири.

2. Зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла в экосистемах юга Западной Сибири зависит от длительности периода с температурами 26°С в сезоне. В степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири показано формирование природных очагов ВЗН, не связанных с сезонным заносом.

3. Показана эпидемическая напряжённость западносибирских очагов циркуляции ВЗН на основании данных серомониторинга здоровых доноров, а также по выявлению случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области.

4. Полевые и клинические изоляты ВЗН, выделенные в Западной Сибири в 2003-2006 гг., принадлежат к генотипу Ia и имеют высокий уровень гомологии с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

Апробация работы и публикации Материалы исследований были представлены на Всероссийской научной конференции «Сибирская зоологическая конференция» (Новосибирск, 2004), Международной научно-практической конференции «Болезни диких животных» (Покров, Владимирская область, 2004), Межрегиональной научно практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» (Омск, 2004), Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), Межрегиональной научной конференции «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни:

Проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006), на Международном семинаре «Emerging Diseases:

Tick-transmitted and influenza», (Новосибирск, 2007), III Межрегиональной научной конференции, посвященной 80-летию профессора К.П. Фёдорова (Новосибирск, 2009).

По материалам диссертации опубликовано 20 научных работ.

Полученные в работе фрагменты гена белка Е ВЗН, выделенного от птиц и заболевших людей, депонированы в базу данных GenBank (номера DQ059560 DQ059564, DQ304544, DQ304545).

Структура и объём диссертации Диссертация изложена на 181 страницах, содержит 25 таблиц и рисунков. Состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Заключение», выводов, списка литературы и «Приложения». Список литературы содержит 217 источников, из них 159 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Работа была выполнена в 2003-2008 гг. на базе ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

1. Места сбора материала и характеристика сезонов. В трёх ландшафтных зонах – степной, (Северная Кулунда, Карасукский р-н Новосибирской обл.), лесостепной (южная часть Барабинской лесостепи, Здвинский р-н Новосибирской обл.) и подзоне осиново-берёзовых лесов (г.

Томск и его окрестности) на основании орнитологических данных (Рябицев В. К., 2008) были определены места вероятного заноса ВЗН перелётными птицами, в которых выбраны биотопы для сбора полевого материала. Места обитания птиц были визуально обследованы на наличие эпизоотий.

Данные по климатическим параметрам сезонов 2003-2004 гг. и 2006- гг. в выбранных районах были получены с сервера Архива метеонаблюдений http://meteo.infospace.ru соответствующих метеостанций.

2. Материал для исследования. Полевой материал. В выбранных районах за указанный период было обследовано 162 птицы, 229 особей мелких млекопитающих;

в степной и лесостепной зонах собрано 11000 имаго кровососущих комаров, в подзоне осиново-березовых лесов – 2008 особей иксодовых клещей всех возрастных стадий. У позвоночных животных для анализа были взяты образцы внутренних органов – печени, селезёнки, головного мозга, дополнительно у млекопитающих – мочевые пузыри. Сбор полевого материала, транспортировку и хранение проводили по методикам, описанным ранее (Терновой В. А. и др., 2004;





Кононова Ю. В. и др., 2007;

Москвитина Н. С. и др., 2008). Полевой материал из Томской области был любезно предоставлен сотрудниками кафедры зоологии позвоночных Томского госуниверситета.

Сыворотки крови сельскохозяйственных животных (лошадей и КРС), собранные в сезоне 2004 г. были любезно предоставлены заведующим вирусологическим отделом Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории к.в.н. В. И. Аксёновым.

Клинический материал. Сыворотки крови здоровых доноров были получены в сезоне 2004 г. из клинико-диагностических лабораторий Здвинской и Карасукской Центральных районных больниц. Анамнестические анкетные данные доноров включали сведения о поле, возрасте и месте проживания.

Происхождение клинического материала от заболевших людей было описано ранее (Терновой В.А. и др., 2006), исследование этого материала утверждено Этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» от 10.02.2006.

3. Иммунологические методы. Выявление антигена ВЗН. В качестве диагностического вирусного антигена использовался белок Е – основной белок оболочки ВЗН (Львов Д. К., 2000). Выявление вирусного антигена из образцов полевого материала проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) по схеме, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2004). Для выявления случаев микст-инфекции с родственными флавивирусами (вирусы омской геморрагической лихорадки, клещевого энцефалита) образцы были проанализированы на наличие антигена этих вирусов по той же методике.

Определение титров специфических антител в сыворотках крови людей проводили с использованием тест-систем «ВектоНил-IgG», «ВектоВКЭ-IgG», («Вектор-Бест», Новосибирск) согласно инструкции производителя.

Определение титров специфических антител в сыворотках крови сельскохозяйственных животных проводили с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации (РН) согласно рекомендациям (Методические рекомендации по лабораторным и полевым исследованиями арбовирусов, 1975).

4. Молекулярно-биологические методы. Выделение РНК, синтез кДНК и полимеразную цепную реакцию (ПЦР) из образцов полевого и клинического материала проводили по методике, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2004).

Определение нуклеотидных последовательностей. Определение нуклеотидной последовательности выделенного ПЦР-фрагмента проводили на автоматическом секвенаторе «Beckman CEQ2000XL» (Beckman Coulter, США) с использованием наборов реактивов CEQ DTCS Kit (Beckman Coulter, США) согласно инструкции производителя. Нуклеотидная последовательность всех фрагментов была определена по обеим цепям, определение проводили дважды, в независимых экспериментах.

Анализ последовательностей. Для генотипирования выявленных вариантов ВЗН проводили филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей фрагмента гена белка Е длиной 322 нуклеотидных остатка (н. о.). Для сравнения использовали соответствующие последовательности других штаммов ВЗН из базы данных GenBank при помощи компьютерной программы VectorNTI Suite 8. Обработка данных проводилась с использованием программы GenDoc.

Построение филогенетического дерева осуществляли с использованием программы MEGA 4. Для оценки достоверности группирования применяли бутстреп-тест. Топология дерева была восстановлена при помощи метода объединения ближайших соседей. Индексы статистической поддержки узлов указаны для значений, превышающих 70%.

5. Вирусологические методы. Изоляцию ВЗН из полевого и клинического материала проводили по методике, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2006).

6. Статистические методы. Статистическую обработку результатов проводили по стандартной методике (Сырцова Л.А. и др., 2003).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Циркуляция ВЗН в экосистемах на юге Западной Сибири 1. 1. Краткая характеристика биотопов в местах заноса ВЗН В степной и лесостепной зонах выбранные биотопы были связаны с колониями грачей (берёзовые колки, лесополосы), а также с местами обитания водно-околоводных птиц, в подзоне осиново-берёзовых лесов – с местами обитания мелких воробьиных птиц, большинство из которых являются дальними мигрантами. В целом, для большинства биотопов было характерно присутствие диких перелётных птиц и кровососущих членистоногих, способных вовлекаться в циркуляцию ВЗН. В то же время биотопы различались по экологическим условиям, влияющим на обитание и активность участников трансмиссивного цикла, и степенью антропогенной нагрузки.

1. 2. Циркуляция ВЗН среди позвоночных животных Птицы. В выбранных экосистемах из участников трансмиссивного цикла ВЗН в первую очередь были обследованы птицы – основные позвоночные хозяева вируса. Результаты анализа внутренних органов на наличие ВЗН у птиц Северной Кулунды в сезонах 2003-2004 гг., южной лесостепи в сезоне 2004 г. и подзоны осиново-берёзовых лесов сезонов 2006-2007 гг. представлены в табл. 1.

Таблица Результаты анализа внутренних органов птиц на наличие ВЗН Северная Подзона осиново Южная Характеристика Кулунда лесостепь, березовых лесов выборки 2003 2004 2006 Общее количество 32 16 44 37 воробьеобразные 2 5 4 16 (Passeriformes) Отряды, число видов соколообразные — — 1 — — Falconiformes ржанкообразные — — — 1 Charadriiformes стрижеобразные — — — — Apodiformes гусеобразные — — — — Anseriformes антиген, % 18,8±14,1 93,8 38,6±14,8 43,2±16,5 42,8±17, ВЗН позитивные РНК, % 15,6±13,1 62,5±25,7 20,5±12,3 0 Подавляющее большинство добытых во всех ландшафтных зонах птиц относились к воробьеобразным. Высоко чувствительные к ВЗН птицы семейства врановых (Corvidae) составляли большую часть сборов в Северной Кулунде и южной лесостепи, в выборке птиц лесных биотопов подзоны осиново-берёзовых лесов преобладали славковые (Sylviidae), дроздовые (Turdidae) и вьюрковые (Fringillidae) птицы. Обследование колоний грачей в Северной Кулунде в 2003 г. выявило наличие мёртвых птиц без видимых повреждений.

Сравнение уровня зараженности птиц по сезонам и местам сбора материала выявило определённые различия. При сопоставлении сезонов 2003-2004 гг. в Северной Кулунде можно видеть, что в 2004 г. уровень зараженности птиц по обоим маркерам был выше, чем в 2003 г. Среди ВЗН-позитивных грачей 2003 г.

часть была найдена мёртвыми, что позволяет считать ВЗН возможной причиной гибели птиц.

В южной лесостепи в целом, как по выявлению антигена так и РНК ВЗН, процент инфицированных птиц в 2004 г. был меньше, чем птиц, добытых в том же сезоне в Северной Кулунде.

За весь период исследования у птиц из подзоны осиново-берёзовых лесов РНК ВЗН не была выявлена ни в одном образце внутренних органов, при этом антиген ВЗН встречался у птиц с одинаковой частотой в течение двух сезонов исследования.

Млекопитающие. На предмет вовлечения в циркуляцию ВЗН были обследованы мелкие млекопитающие. Результаты анализа внутренних органов на наличие ВЗН у мелких млекопитающих Северной Кулунды и южной лесостепи в сезоне 2004 г. и подзоны осиново-берёзовых лесов сезонов 2006 2007 гг. представлены в табл. 2.

Таблица Результаты анализа внутренних органов мелких млекопитающих на наличие ВЗН Подзона осиново Северная Южная Характеристика березовых лесов Кулунда, лесостепь, выборки 2004 г. 2004 г. 2006 Общее количество 55 18 53 грызуны Отряды, число 8 3 4 (Rodentia) видов насекомоядные 3 5 (Insectivora) хищники (Carnivora) ВЗН- антиген, % 40,0±13,2 100 34,0±13,1 61,8±9, позитивные РНК, % 12,7±9,0 47,4±24,2 9,4±8,0 2, Из обследованных мелких млекопитающих в степной зоне большую часть составили грызуны, среди которых преобладали серые полёвки (Microtus), а также три вида мышей, красная полёвка и степная пеструшка. Насекомоядные были представлены тремя видами бурозубок (27% от всех добытых животных);

также в сборах присутствовали две особи мелкого хищника ласки. В сборах южной лесостепи преобладали насекомоядные, представленные четырьмя видами бурозубок и водяной куторой, среди отловленных грызунов большую часть составили красные полёвки (лесные полёвки, Clethrionomys), узкочерепная полёвка и полевая мышь. В подзоне осиново-берёзовых лесов в течение двух сезонов основную часть сборов составили грызуны, среди которых преобладали лесные полёвки (три вида) и полевая мышь. Кроме них в сезоне 2006 г. встречалась обыкновенная бурозубка, а в сезоне 2007 г. – пашенная полёвка и полёвка экономка.

Можно видеть, что в сезоне 2004 г. частота встречаемости антигена и РНК ВЗН у зверьков южной лесостепи была значительно выше, чем у животных в Северной Кулунде.

При сравнении заражённости ВЗН мелких млекопитающих из подзоны осиново-березовых лесов можно видеть, что в сезоне 2007 г. вирусный антиген встречался почти в два раза чаще, чем у зверьков в сезоне 2006 г., в то время как РНК ВЗН была выявлена только у двух красных полевок.

1. 3. Экология, численность и циркуляция ВЗН среди кровососущих членистоногих Комары. В степной и лесостепной зонах были проведены эколого фаунистические исследования популяций кровососущих комаров. Результаты исследований приведены в табл. 3.

Таблица Результаты эколого-фаунистических исследований кровососущих комаров Северной Кулунды и южной лесостепи в летний период 2004 г.

Северная Южная Характеристика выборки Кулунда лесостепь Время сборов II половина июня I половина июля Общее количество 3170 Anopheles, Ochlerotatus, Aedes, рода Coquillettidia, Culex Фауна число видов 16 холодолюбивые 2 Экологические умеренно группы теплолюбивые (число видов) теплолюбивые полифаги Трофические связи орнитофильные (число видов) антропофильные 5 O. dorsalis, O. flavescens, O. excrucians, Ae. cinereus Виды-эудоминанты O. flavescens, cinereus, Coq. richardii, Coq. richardii Cx. modestus В различных биотопах Северной Кулунды и южной лесостепи были обнаружены комары, относящиеся к 5 родам, при этом в степной зоне было выявлено 16 видов, а в лесостепной – 17 видов комаров. По принадлежности к экологическим группам собранные комары были представлены в основном мезотермофильными (умеренно теплолюбивыми) видами, по трофическим связям большинство отловленных комаров относились к видам-полифагам.

Видами-эудоминантами в Северной Кулунде (более 15% от общего числа сбора) были O. flavescens, Ae. cinereus cinereus, Coq. richardii, в южной лесостепи – O. dorsalis, O. excrucians, O. flavescens, Coq. richardii, Cx. modestus.

По экологическим требованиям почти все они относились к мезотермофильным (за исключением термофильного Cx. modestus). По трофическим связям виды эудоминанты Северной Кулунды характеризовались предпочтительным питанием на людях и птицах, в то время как в южной лесостепи большинство эудоминантов относились к видам-полифагам. Различия в предпочтительных трофических связях эудоминантов степных и лесостепных районов позволяют объяснить высокую зараженность птиц в Северной Кулунде в противоположность высокой зараженности мелких млекопитающих в южной лесостепи.

За период, прошедший с последних эколого-фаунистических исследований в этих районах (60-70-е гг. ХХ века), было отмечено изменение в структуре видового состава комаров, выражающееся в замещении некоторых олиготермофильных (холодолюбивых) видов на мезотермофильные. В целом фауна комаров обеих ландшафтных зон была широко представлена мезотермофильными видами, однако для большей части биотопов степной зоны было характерно присутствие комаров термофильных видов, численность которых в отдельных местах достигала 6-12% при крайне редкой (менее 1%) встречаемости комаров холодолюбивых видов.

Среди встречающихся в обеих ландшафтных зонах комаров были выявлены эпидемиологически значимые виды, для которых на эндемичных по ВЗН территориях юга России и в США документированы изоляция вируса или выявление его РНК (http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/mosquitoSpecies.htm;

Fyodorova M. V. et al., 2006). Среди видов-эудоминантов к ВЗН-восприимчивым относились Ae. cinereus cinereus, O. dorsalis, Coq. richardii и Cx. modestus.

Клещи. В отношении иксодовых клещей подзоны осиново-берёзовых лесов были проведены эколого-фаунистические исследования, а также выполнен анализ клещей на наличие маркеров ВЗН. Результаты обследования иксодовых клещей на наличие ВЗН представлены в таблице 4 (стр. 12).

В сезонах 2006-2007 гг. основную часть сборов клещей составляли Ix.

persulcatus и Ix. pavlovskyi, крайне редко встречались личинки D. reticulatus, а в сезоне 2007 г. – личинки Ix. trianguliceps. ВЗН-позитивные клещи встречались среди представителей видов Ix. persulcatus и Ix. pavlovskyi всех возрастных стадий.

Пищевые предпочтения для конкретного вида клещей были установлены по питанию преимагинальных стадий. Предпочтение к питанию на птицах имели нимфы и отчасти имаго Ix. pavlovskyi, в то время как личинки этих клещей обнаруживались исключительно на мелких млекопитающих, для нимф таёжного клеща птицы были скорее случайными прокормителями. Большая часть ВЗН-позитивных взрослых клещей Ix. pavlovskyi была собрана с растительности, что позволяет предположить существование трансстадийной передачи вируса и отнести клещей Ix. pavlovskyi к эпидемиологически значимым в передаче ВЗН. В случае Ix. persulcatus наблюдалась гораздо меньшая орнитофильность, вместе с тем маркеры ВЗН широко встречались как у имаго с растительности, так и у преимагинальных стадий, питающихся на млекопитающих и рептилиях. Встречаемость вирусных маркеров у клещей всех возрастных стадий при наличии небольшого процента особей, питающихся на птицах, позволяет предполагать трансстадийную передачу, а также указывает на протекание в организме прокормителей продуктивной ВЗН-инфекции.

Таблица Результаты обследования иксодовых клещей подзоны осиново-берёзовых лесов на наличие ВЗН в сезонах 2006-2007 гг.

Характеристика выборки 2006 Общее количество (все 1429 возрастные стадии) 48,9 62, Ix. persulcatus состав, % Видовой 50,0 37, Ix. pavlovskyi 1,1 0, D. reticulatus — 0, Ix. trianguliceps pavlovskyi persulcatus антиген, % 10,1±3,3 0, ВЗН-позитивные, РНК, % 11,0±2,4 Ix.

антиген, % 7,8±1,9 1, виды РНК, % 4,3±1,5 Ix.

Общая заражен- антиген, % 8,8±1,4 0, ность ВЗН РНК, % 7,4±1,3 Для исследованных клещей сезона 2006 г. было характерно изменение частоты встречаемости маркеров ВЗН в зависимости от времени сборов. В конце апреля и в мае у преобладающих в сборах имаго вирусный антиген выявлялся в несколько раз чаще, чем РНК ВЗН. В июньских сборах клещей соотношение вирусных маркеров антиген/РНК было примерно одинаковым, причём оба маркера выявлялись у представителей всех возрастных стадий, что свидетельствует об активной репликации вируса в организме клещей в этот период сезона. Самая низкая за сезон частота встречаемости маркеров ВЗН была отмечена в июльских сборах клещей, в которых преобладали преимагинальные стадии.

В сезоне 2007 г. антиген ВЗН был обнаружен только в двух пулах имаго Ix.

persulcatus (0,3%) и Ix. pavlovskyi (1,4%), собранных с растительности в середине мая, РНК ВЗН не была обнаружена ни в одной пробе клещей этого сезона.

1. 4. Влияние климатических параметров сезона на зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла и возможность формирования местных очагов циркуляции ВЗН Исходя из результатов обследования участников трансмиссивного цикла ВЗН, было изучено влияние климатических особенностей сезонов на уровень заражённости птиц, мелких млекопитающих и иксодовых клещей.

Длительность сезона активности во всех ландшафтных зонах рассчитывалась следующим образом: его начало приходилось на начало активности имаго клещей и появление зимующих самок комаров – в Северной Кулунде и южной лесостепи это начало апреля, в подзоне осиново-берёзовых лесов – вторая декада апреля. Концом сезона активности членистоногих на всех исследуемых территориях считался сентябрь, когда прекращалась активность самок зимующих видов комаров.

В выделенный период года было подсчитано количество часов с допустимыми и оптимальными для членистоногих переносчиков условиями, а также количество часов с температурой, благоприятной для репликации ВЗН в их организме. У иксодовых клещей активность отмечается при температуре выше 0°С (Таежный клещ Ixodes persulcatus Schulze (Acarina, Ixodidae):

Морфология, систематика, экология, медицинское значение, 1985);

для комаров допустимый диапазон температур составляет 2-30°С, оптимальный – 7-25°С, при допустимой скорости ветра до 6 м/с и оптимальной – до 4 м/с в открытых биотопах (Кухарчук Л. П., 1980). Эффективная репликация ВЗН в комарах отмечается при температурах выше 26°С (Cornel A. J. et al., 1993), а в иксодовых клещах – выше 25°С (Азарова И. А., 2000). Поскольку в степной и лесостепной зонах в летний период основными кровососущими членистоногими являются комары, для этих районов было рассчитано только количество часов с температурами от 26°С. Эти данные, а также общая зараженность ВЗН позвоночных и иксодовых клещей, представлены в табл.№ и №6.

Таблица Характеристика сезонов активности членистоногих переносчиков ВЗН в сопоставлении с данными частоты встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла в Северной Кулунде и южной лесостепи Южная Северная Кулунда Параметры сезона лесостепь 2003 2004 Количество часов с температурой 3966 4104 выше 0° Количество часов с температурой 2 3840 (3654) 3810 (3540) 3438 (2748) 30°С (+ скорость ветра до 6 м/с) Количество часов с температурой 7 3012 (2514) 2976 (2880) 2724 (1668) 25°С (+ скорость ветра до 4 м/с) Количество часов с температурой 390 426 выше 26°С антиген, % 18,8±14,1 93,8 38,6±14, птицы Общая РНК, % 15,6±13,1 62,5±25,7 20,5±12, зараженность млекопита- антиген, % н.и. 40,0±13,2 ВЗН ющие РНК, % н.и. 12,7±9,0 47,4±24, Примечания: В скобках указано количество часов, когда оба параметра присутствовали одновременно;

н.и. – не исследовали При сравнении двух сезонов в Северной Кулунде можно видеть, что в сезоне 2004 г. уровень заражённости ВЗН птиц был выше, чем в 2003 г., причем это было справедливо при оценке по обоим маркерам. При сравнении в сезоне 2004 г. уровня заражённости птиц степной и лесостепной зон также можно видеть зависимость от климатических параметров, в то время как у мелких млекопитающих подобной зависимости не наблюдалось. В этом случае можно предположить влияние на этот процесс численности комаров, в частности, высокой численностью видов-полифагов.

При рассмотрении климатических параметров в районе подзоны осиново берёзовых лесов были обнаружены подобные закономерности, а также выявлены некоторые особенности, характерные именно для этой территории.

Поскольку на этой территории в качестве участников трансмиссивного цикла ВЗН рассматривались иксодовые клещи с многолетним жизненным циклом, был также охарактеризован сезон 2005 г., предшествовавший сезону исследования (табл. 6).

Таблица Характеристика сезонов активности членистоногих переносчиков ВЗН в сопоставлении с данными частоты встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла в подзоне осиново-берёзовых лесов Год Параметры сезона 2005 2006 Количество часов с температурой выше 3708 3708 0°С Количество часов с температурой 2-30°С1 3618 3540 Количество часов с температурой 7-25°С1 2868 2752 Количество часов с температурой выше 234 (312) 162 (252) 144 (222) 26°С (25°С) клещи (все антиген, % н.и. 8,8±1,4 0, виды и РНК, % н.и. 7,4±1,3 стадии) Общая зараженность антиген, % н.и. 43,2±16,5 42,4±17, птицы ВЗН РНК, % н.и. 0 млекопита- антиген, % н.и. 34,0±13,1 61,8±9, 2, ющие РНК, % н.и. 9,4±8, Примечания:

В скобках указано количество часов, когда оба параметра присутствовали одновременно;

– скорость ветра не приводится, т.к. в течение сезона количество дней со скоростью ветра больше 4 м/с не превысило 3-4 дней;

н.и. – не исследовали При анализе распределения вирусных маркеров у клещей можно видеть, что в сезоне 2006 г. антиген ВЗН и вирусная РНК встречались у клещей в целом почти одинаковой частотой, в то время как в сезоне 2007 г. вирусный антиген встречался на порядок реже, а РНК вируса вообще не выявлялась. Сезон 2006 г.

характеризовался наименее благоприятными для активности членистоногих переносчиков условиями, однако ВЗН-позитивные имаго и часть нимф, собранные в его начале, с большой вероятностью были инфицированы ВЗН в предыдущем сезоне до перехода в диапаузу. Сезон 2005 г. по условиям для репликации вируса был наиболее благоприятным, что способствовало развитию продуктивной инфекции у клещей, показателем которой была высокая частота встречаемости вирусной РНК. Таким образом, на процесс накопления вируса в клещах в сезон исследования оказывают влияния климатические условия предыдущего сезона.

У мелких млекопитающих, отловленных в сезоне 2006 г., антиген ВЗН встречался почти в два раза реже, чем у животных, добытых в 2007 г., а вирусная РНК, наоборот, выявлялась чаще в 2006 г. Наличие вирусной РНК является показателем эффективности репликации вируса, и в случае с мелкими млекопитающими также можно видеть зависимость между частотой встречаемости этого маркера и количеством времени с благоприятными для репликации вируса условиями. Что касается сравнения встречаемости вирусных маркеров у птиц, можно предположить, что примерно одинаковая частота встречаемости антигена ВЗН при отсутствии вирусной РНК в течение двух сезонов могла быть связана с видовой невосприимчивостью обследованных птиц.

Общим для всех сезонов и районов критическим параметром, определяющим степень продуктивности ВЗН-инфекции в членистоногих переносчиках и, как следствие, у позвоночных животных, было количество времени с температурами, благоприятными для репликации ВЗН. При рассмотрении в качестве основных переносчиков комаров на эффективность репликации вируса в них оказывает влияние температурный режим сезона исследования, а при рассмотрении в качестве векторов иксодовых клещей следует учитывать температурный режим предыдущего сезона. Влияние этого параметра на развитие ВЗН-инфекции у позвоночных животных также справедливо в случае мелких млекопитающих и восприимчивых к вирусу птиц.

В заключение можно сделать вывод, что в природных экосистемах юга Западной Сибири среди участников трансмиссивного цикла ВЗН имеет место циркуляция вируса, интенсивность которой зависит от длительности определённого температурного режима. Подтверждение факта циркуляции ВЗН, не связанной с сезонным заносом, свидетельствует о существовании на выбранных территориях природных очагов ВЗН.

2. Участие в трансмиссивном цикле ВЗН случайных хозяев – сельскозяйственных животных и людей 2. 1. Сельскохозяйственные животные Серологический мониторинг. Сельскохозяйственные животные – крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, лошади и, в отдельных частях ареала, верблюды – имеют разную видовую восприимчивость к ВЗН, однако у всех их после контакта с вирусом формируется иммунный ответ (Васильев А. В. и др., 2005).

Серомониторинг антител к ВЗН у сельскохозяйственных животных был проведён в сезоне 2004 г. у коров и лошадей, сыворотки крови которых были собраны соответственно в деревнях Карасукского (район Северной Кулунды) и Здвинского (юг Барабинской лесостепи) районов Новосибирской области.

Частота встречаемости антител к ВЗН в РТГА составила у коров 7,8±5,0% ( серопозитивных животных из 115), у лошадей – 9,2±6,6% (7 серопозитивных из 76). Для исключения возможного серологического перекрёста антител к встречающимся в Новосибирской области родственным флавивирусам (вирус ОГЛ, ВКЭ) с ВЗН, позитивные по наличию антител к ВЗН сыворотки были исследованы в РТГА с антигенами этих флавивирусов, а также исследованы в РН с ВЗН. Антитела к ВКЭ и вирусу ОГЛ в этих сыворотках обнаружены не были, а РН подтвердила наличие в них вируснейтрализующих антител, что свидетельствует о контакте серопозитивных животных с ВЗН.

Относительно частоты встречаемости антител можно отметить, что у коров и лошадей степной и лесостепной зон юга Западной Сибири она была сравнима с таковой у этих животных в Астраханской области в отдельные годы (Васильев А. В. и др., 2005).

Заболеваемость. По результатам ретроспективного анализа заболеваемости лошадей из разных районов Новосибирской области в период с апреля по сентябрь в 2004-2008 гг. с использованием данных годовых отчётов Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории у этих животных не было зарегистрировано случаев заболевания с неврологическими симптомами.

2. 2. Люди Серологический мониторинг. Заболевание людей, вызванное ВЗН, в большей части случаев протекает бессимптомно, в этом случае показателем контакта с вирусом является наличие антител. Результаты обследования Таблица Циркуляция антител к ВЗН и ВКЭ (вирусу ОГЛ) у здоровых доноров Карасукского (Северная Кулунда) и Здвинского (южная лесостепь) районов Новосибирской области Характеристика Карасукский Здвинский выборки район район Количество обследованных 175 дети и подростки до 2,8 — 14 лет, % Возрастные лица трудоспособ группы 74,0 97, ного возраста, % лица старше 55 лет, % 23,2 2, 41,7 — горожане, % Место жительства 58,3 сельские жители, % женщины, % 75,4 75, Пол мужчины, % 24,6 24, Доля к ВЗН, % 7,4±3,9 26,7±13, серопозитивных к ВЗН+ВКЭ, % 6,3±3,6 8,9±8, доноров сывороток крови здоровых доноров из Карасукского и Здвинского районов Новосибирской области в 2004 г. представлены в табл. 7.

По анамнестическим данным все доноры длительное время проживали в указанных районах, т.е. не относились к категории приезжих. Обследованные доноры были разделены на возрастные группы, а также по месту жительства и полу. При анализе сывороток доноров на антитела к ВЗН было принято во внимание, что оба района являются эндемичными по вирусу ОГЛ (антигенный комплекс клещевого энцефалита), а также учитывалась у кого-либо из доноров возможная вакцинация против ВКЭ в прошлом, поэтому позитивные по наличию антител к ВЗН сыворотки были проанализированы на антитела к родственным флавивирусам.

По результатам серологического мониторинга здоровых доноров, проживающих в Северной Кулунде и южной лесостепи, можно заключить, что на момент сбора сывороток часть населения этих районов имела контакт с ВЗН.

Контакт с вирусом чаще отмечался у жителей лесостепных районов, что может быть обусловлено высокой численностью комаров, а также меньшей степенью урбанизации. Частота встречаемости антител к ВЗН среди здоровых доноров юга Западной Сибири, сопоставимая с таковой в природных очагах ВЗН на юге России (8-10%) (Львов Д. К. и др., 2000;

Москвитина Э. А. и др., 2007), свидетельствует об эпидемической напряжённости западносибирских очагов ВЗН.

Заболеваемость. В летний период 2004 г. в отдел флавивирусов и вирусных гепатитов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» поступил клинический материал (цельная кровь и сыворотки) от трёх пациентов с симптомами лихорадки (два случая) и энцефалита (один случай) неясной этиологии. В отношении двух пациентов в лечебных учреждениях возникли затруднения в постановке точного диагноза, один пациент в лечебное учреждение не обращался.

Предварительный анализ клинического материала позволил исключить в качестве причины заболевания ВКЭ и вирус ОГЛ. Результат анализа клинического материала на наличие маркеров ВЗН, а также краткие данные по клинической картине приведены в табл. 8.

Таблица Краткие клинические данные и результаты анализа на маркеры ВЗН материала от пациентов Пол, возраст, место Сроки Основные Лабораторная № жительства заболевания симптомы диагностика Мужчина, 33 года, IgG к ВЗН 1:3200 20.05.04 – 1 житель Новосибирской Тяжелая лихорадка 1:6400, РНК ВЗН в 11.06. обл. крови Мальчик, 7 лет, житель 24.06.04 – IgG к ВЗН 2 Энцефалит г. Новосибирск 23.07.04 1:12800-1: IgG к ВЗН 1:400 Женщина, 28 лет, 19.07.04 – Лихорадка с катараль 3 1:200, выделение житель г. Новосибирск 21.07.04 ным воспалением вируса Несмотря на разную степень тяжести заболевания, в анамнезе всех трёх пациентов можно выделить общие черты. У всех пациентов за несколько дней до заболевания было пребывание в природных биоценозах, а также отсутствие выездов на эндемичные по ВЗН территории, что позволило исключить завозной характер заболевания. Следует также отметить, что двое пациентов (№1 и №3) были вакцинированы против клещевого энцефалита и имели выраженный титр антител против этой инфекции, однако это не защитило их от заболевания ЛЗН.

3. Генотипирование ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири Из части образцов, в которых были выявлены вирусные маркеры, с помощью ОТ-ПЦР были получены фрагменты кДНК, соответствующие участку гена белка Е ВЗН, которые были секвенированы. Секвенированные образцы имели следующее происхождение: образцы от серых ворон из Северной Кулунды 2003 г. (ChCorvus10-03, ChCorvus31-03), грачей из южной лесостепи 2004 г. (ChRook7-04, ChRook14-04, ChRook27-04), от красной полёвки из южной лесостепи 2004 г. (ChRodent-04), от заболевших людей (Пациенты №1 и №3, ChiWS-04 и HumWS-04 соответственно) и два пула имаго клещей Ix.

persulcatus и Ix. pavlovskiy из подзоны осиново-берёзовых лесов 2006 г. (Tomsk 1, Tomsk-2).

Генотипирование исследуемых нуклеотидных последовательностей позволило идентифицировать эти последовательности как относящиеся к генотипу Ia вируса Западного Нила. Западносибирские полевые и клинические изоляты ВЗН 2003-2006 гг. оказались высоко гомологичными (не более 1-3% расхождения) с волгоградским штаммом VLG-4 ВЗН.

При анализе филогенетического дерева (рис. 1, стр. 20) можно видеть, что они характеризуются невысоким уровнем генетических отличий и не имеют гостальной (хозяинной) специфичности. Можно видеть, что западносибирские изоляты ВЗН 2003-2006 гг. кластеризуются вместе с западносибирскими изолятами, выделенными в 2002 г., а также со штаммами ВЗН, изолированными на юге Европейской части России.

Полученные результаты согласуются с орнитологическими данными по путям миграций грачей, что может служить доказательством заноса ВЗН этими птицами на юг Западной Сибири с эндемичных территорий на юге РФ.

Генетическая близость исследованных изолятов с патогенными для людей штаммами ВЗН юга России позволяет предполагать наличие эпидемического потенциала у ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Рис. 11. Филогенетическое дерево полевых и клинических изолятов и штаммов ВЗН, построенное на основании сравнения нуклеотидных последовательностей фрагмента гена белка Е (322 н. о.) методом «объединения ближайших соседей». Линия отражает генетическую дистанцию. Бутстрепы приведены для значения индекса поддержки узлов 70%.

Примечания:

– птицы (серые вороны и грачи);

– красная полёвка;

– люди;

– клещи Ix.

persulcatus и Ix. pavlovskiy ВЫВОДЫ 1. Выявлена циркуляция ВЗН среди воробьеобразных птиц (Passeriformes) мигрирующих и оседлых видов в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. Частота встречаемости антигена и РНК ВЗН у птиц составила: в Северной Кулунде в сезоне 2003 г.

18,8±14,1% (антиген) и 15,6±13,1% (РНК), в сезоне 2004 г. – 93,8% (антиген) и 62,5±25,7% (РНК);

в южной лесостепи в сезоне 2004 г. антиген ВЗН был обнаружен у 38,6±14,8% птиц, вирусная РНК – у 20,5±12,3%. У птиц подзоны осиново-берёзовых лесов в течение двух сезонов наблюдения (2006-2007 гг.) из вирусных маркеров был обнаружен только антиген с частотой 43,2±16,5% и 42,4±17,5% соответственно.

2. В циркуляцию ВЗН в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново берёзовых лесов юга Западной Сибири вовлекаются мелкие млекопитающие – грызуны, насекомоядные и мелкие хищники. Наибольшая частота встречаемости антигена и РНК ВЗН в сезоне 2004 г. отмечена у мелких млекопитающих южной лесостепи – 100% (антиген) и 47,4±24,2% (РНК ВЗН), у животных Северной Кулунды антиген ВЗН был обнаружен у 40,0±13,2% особей, вирусная РНК – у 12,7±9,0%. У мелких млекопитающих подзоны осиново-берёзовых лесов встречаемость антигена и РНК ВЗН в сезоне 2006 г.

составила 34,0±13,1% и 9,4±8,0%, в сезоне 2007 г. – 61,8±9,5% и 2,0% соответственно.

3. Фауна кровососущих комаров в летний период сезона 2004 г. в степной зоне была представлена 16 видами, в лесостепной зоне – 17 видами. В биотопах степной зоны к видам-эудоминантам (более 15% от числа сборов) относились O. flavescens, Ae. cinereus cinereus, Coq. richardii, в лесостепной зоне – O.

dorsalis, O. excrucians, O. flavescens, Coq. richardii и Cx. modestus, cреди которых выявлены виды, способные принимать участие в трансмиссивном цикле ВЗН. Было отмечено исчезновение некоторых холодолюбивых видов и снижение численности большей части мезотермофильных видов при доминировании (более 5% от числа сборов) в отдельных биотопах комаров теплолюбивых видов.

4. Показано вовлечение в циркуляцию ВЗН имагинальных и преимагинальных стадий иксодовых клещей Ix. persulcatus и Ix. pavlovskiy в подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. В сезоне 2006 г. среди клещей Ix. persulcatus вирусный антиген был обнаружен у 10,1±3,3%, а РНК ВЗН – у 11,0±2,4% особей всех возрастных стадий;

среди клещей Ix. pavlovskiy было отмечено 7,8±1,9% позитивных по вирусному антигену и 4,3±1,5% по РНК ВЗН у особей всех возрастных стадий. В сезоне 2007 г. у обследованных клещей был обнаружен антиген ВЗН – у 0,3% имаго Ix. persulcatus и 1,4% имаго Ix. pavlovskiy.

5. Частота встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла ВЗН в экосистемах юга Западной Сибири зависит от длительности периода с температурой 26°С в сезоне. В степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири показано формирование природных очагов ВЗН, не связанных с сезонным заносом.

6.Установлено вовлечение в трансмиссивный цикл ВЗН на юге Западной Сибири случайных участников – сельскохозяйственных животных и людей.

Доля серопозитивных к ВЗН сельскохозяйственных животных в сезоне 2004 г.

среди КРС в Северной Кулунде составила 7,8±5,0%, среди лошадей в южной лесостепи – 9,2±6,6%. Показана циркуляция антител к ВЗН в сезоне 2004 г. на уровне 7,4±3,9% среди здоровых доноров из степных районов и 26,7±13,3% среди здоровых доноров из лесостепных районов Новосибирской области.

Были выявлены три случая заболевания ЛЗН у людей в Новосибирской области.

7. Секвенирование и последующий анализ фрагмента гена белка Е полевых и клинических изолятов ВЗН, выделенных на юге Западной Сибири, показал, что они принадлежат генотипу Iа ВЗН, являются генетически близкими между собой и с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ 1. Видовой состав кровососущих комаров (DIPTERA, CULICIDAE) и возможность формирования очагов циркуляции вируса Западного Нила на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Смирнова Ю. А. [и др.] // Паразитология – 2007 – Т. 41 - №6 – С. 459 - 470.

2. Выявление вируса Западного Нила и его генотипирование в иксодовых клещах (Parasitiformes: Ixodidae) в Томске и его пригородах / Москвитина Н. С., Романенко В. Н., Терновой В. А., Иванова Н. В., Протопопова Е. В., Кравченко Л. Б., Кононова Ю. В. [и др.] // Паразитология – 2008 – Т. 42 - №3 – С. 210-225.

3. Генетическое разнообразие инфекционных агентов, переносимых клещами в г.

Томске и его пригородах / Чаусов Е. В., Терновой В. А., Протопопова Е. В., Коновалова С. Н., Кононова Ю. В. [и др.] // Паразитология – 2009 – Т. 43 - № – С. 374-388.

4. Генотипирование вируса Западного Нила в популяциях диких птиц наземного и древесно-кустарникового комплексов на территории Барабинской лесостепи и Кулундинской степи (2003-2004 гг.) / Кононова Ю. В., Терновой В. А., Щелканов М. Ю. [и др.] // Вопр. вирусол. – 2006 – Т. 51 - № 4 - С. 19-23.

5. К познанию фауны и экологии кровососущих комаров (DIPTERA, CULICIDAE) лесостепных и степных районов Западной Сибири / Мирзаева А. Г., Смирнова Ю. А., Юрченко Ю.А., Кононова Ю. В. // Паразитология – 2007 – Т. 41 - №4 – С. 253-267.

6. Случаи лихорадки Западного Нила в Новосибирской области в 2004 г. и генотипирование вируса, вызвавшего заболевание / Терновой В. А., Протопопова Е. В., Кононова Ю. В. [и др.] // Вестник РАМН – 2007 - № 1 – С.

21-26.

7. Выявление антигена и РНК вируса Западного Нила у двух видов врановых на юге Западной Сибири. / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Терновой В. А. [и др.] // Сб. статей V Межрегион. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» – Омск, 2004 - Т.2 - С. 184-187.

8. Выявление антител к флавивирусам у населения лесостепной и степной зон Новосибирской области в 2004 году / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Федянин А. П. [и др.] // Журнал инфекционной патологии – Иркутск – 2004 - Т.

12 - №3-4 - С. 97-99.

9. Выявление маркеров вируса Западного Нила у мелких млекопитающих лесостепной и степной зон Новосибирской области / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Терновой В. А. [и др.] // Тр. Российской науч.-практ. конф.

«Инфекционные болезни: Проблемы здравоохранения и военной медицины» – Санкт-Петербург, 2006 - С. 161-162.

10. Выявление циркуляции вируса Западного Нила (Flaviviridae, Flavivirus) на юге Западной Сибири по данным обследования в РТГА сывороток крови крупного рогатого скота / Щелканов М. Ю., Кононова Ю. В., Аристова В. А. [и др.] // Сб.

мат. Росс. науч.-практ. конф. «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» – Санкт Петербург, 2004 – С. 287-288.

11. Изучение циркуляции вируса Западного Нила за период 2002-2003 гг. в популяциях птиц разных экологических комплексов, обитающих на территории Барабинской и Кулундинской низменностей / Кононова Ю. В., Юрлов А. К., Терновой В. А. [и др.] // Тез. докл. Всеросс. конф., посвящ. 60-летию Института систематики и экологии животных СО РАН – Новосибирск, 2004 – С. 383.

12. Мониторинг вируса Западного Нила в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Щелканов М. Ю., Юрлов А. К. [и др.] // Тез.

Междунар. науч.-практ. конф. «Болезни диких животных» – Покров, 2004 г. – С.

70-74.

13. Мониторинг вируса Западного Нила у врановых юга Западной Сибири / Кононова Ю. В., Юрлов А. К., Терновой В. А. [и др.] // Журнал инфекционной патологии – Иркутск – 2004 - Т. 11 - № 3-4 - С. 73-76.

14. О первых результатах эпидемиологического мониторинга за лихорадкой Западного Нила в Новосибирской области / Понотова Л. В., Михеев В. Н., Локтев В. Б., Кононова Ю. В. [и др.] // Сибирь-Восток – 2006 - №9 - С. 45-48.

15. Особенности биотопического распределения массовых видов кровососущих комаров в южной лесостепи и степи Западной Сибири / Мирзаева А. Г., Кононова Ю. В., Смирнова Ю. А. // Сб. мат. II межрегион. науч. конф.

«Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» – Новосибирск, 2005 – С. 142-143.

16. Оценка влияния климатических факторов на трансмиссивный цикл ВЗН в биоценозах лесостепной и степной зон Новосибирской области / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Юрченко Ю. А. [и др.] // Сб. мат. III Межрегион. науч.

конф., посвящ. 80-летию профессора К.П. Фёдорова – Новосибирск, 2009 – С.

129-133.

17. Оценка возможности формирования очагов циркуляции вируса Западного Нила на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Протопопова Е. В.

[и др.] // Тр. Росс. науч. конф. с междунар. участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» – Новосибирск, 2006 - С. 194-195.

18. Распространение вируса Западного Нила на Азиатскую часть России и генотипирование его вариантов / Локтев В. Б., Терновой В. А., Кононова Ю. В.

[и др.] // Сб. мат. Росс. науч.-практ. конф. «Генодиагностика инфекционных болезней» – Новосибирск, 2005 – С. 131-132.

19. Molecular epidemiology of the West Nile virus in Western Siberia / Kononova Yu. V., Protopopova E. V., Ternovoi V. A. [et al.] // In: «Emerging Diseases: Tick transmitted and influenza». The 2007 International Workshop – Novosibirsk, 2007 – P. 28.

20. West Nile virus is an emerging pathogen for Russia / Bogachek M. V., Kononova Iu. V., Protopopova E. V. [et al.] / In: «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza». The 2007 International Workshop – Novosibirsk, 2007 – P. 27.

БЛАГОДАРНОСТИ Автор выражает благодарность научному руководителю к.б.н. А.М.

Шестопалову и своим коллегам, в тесном сотрудничестве с которыми была выполнена диссертационная работа:

- сотрудникам отдела молекулярной вирусологии флавивирусов и вирусных гепатитов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» к.б.н. Е.В. Протопоповой, к.б.н. В.А. Терновому, к.б.н. Н.Л. Тупоте, к.б.н. Е.В. Чаусову, С.Н. Коноваловой, д.б.н., проф. В.Б. Локтеву;

- ведущему научному сотруднику лаборатории экологии вирусов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (г. Москва) к.б.н. М.Ю. Щелканову;

- сотрудникам Института систематики и экологии животных (ИСиЭЖ) СО РАН к.б.н. А.Г. Мирзаевой, к.б.н. А.В. Друзяке, к.б.н. Т.А. Дупал, к.б.н. А.К. Юрлову, Ю.А. Смирновой, к.б.н. В.А. Шило, д.б.н. С.Н. Борисову, к.б.н. Ю.А. Юрченко;

- специалистам ТУ Роспотребнадзора по Новосибирской области А.П. Федянину и к.м.н. Л.В. Самойловой;

- заведующему вирусологическим отделом Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории к.в.н. В.И. Аксёнову;

- сотрудникам кафедры зоологии позвоночных Томского государственного университета д.б.н., проф. Н.С. Москвитиной, С.С. Москвитину, д.б.н. В.Н.

Романенко, к.б.н. И.Г. Коробицыну, к.б.н. В.Н. Курановой, к.б.н. С.И. Гашкову, Н.В.

Ивановой, Н.П. Большаковой;

а также коллегам из отдела зоонозных инфекций и гриппа ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» за консультативную помощь и поддержку в написании диссертации.

Отпечатано на полиграфической базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ) Тираж 90 экз., март 2010 г.



 

Похожие работы:





 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.