авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 ||

Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных

-- [ Страница 2 ] --

Стимуляция мононуклеарных клеток PPD свидетельствует о весьма низкой специфичности туберкулина при использовании его как суммарного антигена при диагностировании туберкулеза с помощью IFN--ИФА. Она также подтверждается сравнением концентрации IFN- при стимуляции PPD с содержанием IFN-, полученного при стимуляции известными митогенами – конканавалином А и фитогемагглютинином, которые, как известно, вызывают неспецифическую активацию Т-лимфоцитов, не обусловленную связыванием с антиген-распознающими рецепторами. Пациенты под № 26, 28 и 36, как и остальные, являются больными туберкулезом, хотя туберкулез у 26- и 36-го выявляются однозначно только по гибридному белку rCFP10, а у 28-го – только по гибридному белку rESAT-6 и одновременно при использовании смеси рекомбинантных белков rESAT-6 + rCFP10. Значение концентрации IFN-, полученное при испытании в качестве индуктора rMPT64, не является определяющим, поскольку, как уже отмечалось ранее, ген, кодирующий этот белок, присутствует как в патогенном, так и в вакцинном штамме, применяемом в России. Таким образом, полученные результаты по какому-то одному выбранному из двух определяющих белков (rESAT-6 и rCFP10) могут оказаться неоднозначными. Для интерпретации результатов рекомендуется использовать процент специфического ответа (табл. 10 и рис. 18). Процент специфического ответа для применяемого антигена рассчитывали по формуле:

где: N = IFN- (МЕ/мл) для нулевого (отрицательного) контроля;

Ag = IFN- (МЕ/мл) для применяемого антигена;

М = IFN- (МЕ/мл) для митогенного контроля.

% специфического иммунного ответа 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Рис. 18. Гистограмма специфического иммунного ответа мононуклеарных клеток из образцов периферической крови, стимулированных PPD (синий цвет), ESAT6 (красный цвет), CFP10 (желтый цвет) Используемый метод позволяет определять количество IFN- в диапазоне 0,10–150 МЕ/мл с точностью ± 10 %. (внешний и внутренний коэффициент вариации не превышает 10 %).

Продукция IFN- при стимуляции периферической крови среди пациентов с туберкулезом легких в процессе противотуберкулезной терапии Был изучен иммунный ответ при туберкулезе на разных этапах антибиотиковой химиотерапии при использовании комплекса микобактериальных белков (M. bovis BCG, белки культурального фильтрата (ST-CF) и очищенных рекомбинантных антигенов (rESAT-6, rCFP10, rMPT64). Клинико-рентгенологические и лабораторные исследования проводили после применения курса интенсивной химиотерапии через 2 и месяцев. Эффективность лечения препаратами оценивали в Т-клеточном ответе при стимуляции видоспецифическими антигенами и белками культурального фильтрата по продукции IFN-. Процент позитивного ответа после проведенной терапии через 2 месяца составил 51,5 % для антигена rESAT-6 и 48,4 % для белка rCFP10. В 5 случаях для больных туберкулезом (диссеминированный туберкулез, инфильтративная форма туберкулеза) и Ш84 наблюдали расхождения по результатам теста между двумя антигенами.

Эти данные вызывают необходимость дополнительного проведения анализа с использованием альтернативных методов и повторной постановки теста. Все больные имели положительные показатели по данным культурального и микроскопического тестов до проведения антитуберкулезной терапии. У пациентов после курса проведенной терапии наблюдалась выраженная положительная динамика процесса. У больных с генерализованной инфекцией и диссеминированным туберкулезом практически отсутствовала секреция IFN-, что связано с иммуносупрессией. Согласно литературным данным, у подобного рода пациентов продукция IFN- может не происходить вообще или проходить на низком уровне (Bua A. et al., 2004;

Kobashi Y.

et al., 2008).

Применение технологии ELISРОТ для оценки специфического иммунного ответа на туберкулезную инфекцию ELISPOT-анализ в настоящее время является одним из эффективных методов для детекции и подсчета индивидуальных клеток, секретирующих специфические цитокины в результате стимуляции специфическими белковыми антигенами или синтетическими пептидами in vitro. Технология ELISPOT-анализа применяется для мониторинга ВИЧ-вакцинированных пациентов, онкологических заболеваний, вирусных гепатитов В и С, аутоиммунных заболеваний, для оценки Th1/Th2-иммунного ответа, при разработке вакцин и лекарственных препаратов, выявлении специфического иммунного статуса, для эпитопного картирования и определения гуморального иммунитета (Gaines H., Andersson L. 1996;

Pathan A.A., 2001;

Chee C., 1997;

Arlen P., 2000;

Mashishi T., 2002). ELISPOT-анализ включал 1 2 3 A B C D Рис. 19. ELISPOT-анализ различных образцов крови. А–D (1–2) – контрольные отрицательные образцы;

A – свежеприготвленная кровь при стимуляции антигеном ESAT 6 здоровых доноров (буферный раствор, нулевой контроль);

B (3–4) – стимуляция антигеном ESAT-6 больного туберкулезом (свежеприготовленная кровь), 2,0х105 IFN SFC;

C (3–4) – стимуляция антигеном ESAT-6 больного туберкулезом (криоконсервированная кровь) с добавлением IL-7 10 мкг/мл, 2,5х105 IFN- SFC;

D (3–4) – стимуляция антигеном ESAT-6 больного туберкулезом (криоконсервированная кровь), 2,0х105 IFN- SFC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Н 899 1109 1097 716 1361 798 1051 1170 1227 823 1028 Рис. 20. Митогенная стимуляция образцов свежей крови и криоконсервированной у пациентов с активным туберкулезом. 2, 3, 5, 7, 9, 11 – стимуляция свежей цельной крови ФГА;

1, 4, 6, 8, 10, 12 – стимуляция криоконсервированной цельной крови ФГА использование в качестве твердой фазы 96-луночных планшет, имеющих дно лунок из нитроцеллюлозы. Из периферической крови человека выделяли центрифугированием на смеси фиколл-гепака мононуклеарные клетки.

Суспензию мононуклеарных клеток крови, содержащей полную среду RPMI 1640 с 5 % FCS, с концентрацией 2,0х106, 2.5х106 или 2.5х105 в мл раскапывали по лункам, вносили антигены rESAT-6 и rCFP10 M. tuberculosis, митогены и инкубировали 12–24 ч при 37 °С в присутствии 5 % СО2. После инкубации клетки удаляли промыванием лунок PBS с 0,05 % Tween 20. Затем вносили в каждую лунку биотинилированные поликлональные антитела (вторичные антитела), специфические к выбранному цитокину. После IFN-гамма SFC/1х 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Количество образцов Рис. 21. Гистограмма стимуляции митогенами образцов крови, представленных на рис. 1 2 3 4 5 6 7 8 A B C D E F G H Рис. 22. Типичная картина выявления туберкулезной инфекции IFN--ELISPOT-анализом.

1(А–В) – положительный контроль (митогенная стимуляция, 48 ч, 2,0х106 клеток/мл), 1(G–H) – отрицательный контроль (стимуляция, 48 ч). Положительные образцы, n= отмывки от несвязавшихся биотинилированных антител добавляли конъюгат пероксидазы хрена (щелочной фосфатазы) и стрептавидина. Несвязавшийся фермент удаляли промыванием и вносили хромогенный субстрат BCIP/NTB.

В ходе ферментативной реакции образовывался окрашенный преципитат в виде сине-черных пятен в местах локализации антигена, где каждое отдельное пятно представлено индивидуальной клеткой, секретирующей цитокиновую продукцию в процессе стимуляции. Пятна, различающиеся по размеру, после высыхания лунок подсчитывали с помощью автоматического ELISPOT-ридера или визуально с помощью микроскопа. Реакцию считали положительной, если на 106 МКПК насчитывается не менее формирующих пятен. Было установлено, что около 70 % жизнеспособных клеток способны продуцировать IFN- при стимуляции антигенами M. tuberculosis. Оставшиеся после первичной стимуляции клетки способны секретировать IFN- при проведении вторичного ELISPOT-анализа из тех же самых образцов. Жизнеспособность клеток после выделения определяли с использованием стандартной процедуры с окрашиванием Trypan Blue в течение 1 ч до проведения ELISPOT-анализа и затем использовали их при проведении анализа на туберкулезную инфекцию (рис. 19 и 20). Клетки культивировали в присутствии IL-7 (10 нг/мл) или IL-15 (20 нг/мл) в течение 4–7 дней. Жизнеспособность клеток 70 % рассматривали в качестве положительного контроля при проведении теста. Коммерческие тесты с использованием рекомбинантных антигенов ESAT-6 и CFP10 и синтетических пептидов M. tuberculosis (например, SPOT-TB-тест) также позволяют выявлять M. tuberculosis со специфичностью 99,8–100 %. При этом чувствительность ELISPOT-IFN--анализа с использованием ESAT-6 и CFP10 антигенов превышает IFN--анализ и составляет 95,7 % при исследовании туберкулеза (Lalvani A. et al., 2001, 2007).

Диагностика ВЛКРС Изучение диагностической ценности разных коммерческих наборов и разработанных нами методов позволило применить их в диагностике вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Работа была выполнена на базе лаборатории лейкозов ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН и лаборатории биоинженерии ГНЦ ВБ «Вектор». Рекомбинантный антиген р24 к ВЛКРС и специфические моноклональные антитела получены в лаборатории лейкозов (Файззулин Р.З., Чекишев В.М., 1993). Исследования проводили на материале от 120 коров в возрасте 3–7 лет: интактных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом. Животные принадлежали хозяйствам Новосибирской области. Получение сыворотки проводили по общепринятой методике. По результатам реакции иммунодиффузии (РИД) в агарозном геле и гематологических исследований животных разделили на 3 группы: больные (в эту группу вошли гематологически больные животные и реагирующие на антиген р24 в РИД), РИД(+) и РИД(-) – табл. 12. Антитела к ВЛКРС выявляли с помощью РИД, используя набор для серологической диагностики лейкоза КРС производства Курской биофабрики, согласно наставлению производителя, а также методом ИФА в соответствии с временным наставлением по применению набора для выявления антител к ВЛКРС производства НПО "Нарвак" (Россия).

Таблица Результаты сравнительных серологических, гематологических и ПЦР методов исследования крови коров Группы Кол-во ИФА ПЦР животных коров (+) (-) (+) (-) Кол-во Кол-во Кол-во Кол-во % % % % коров коров коров коров Больные 13 13 100 13 – – – – РИД (+) 51 51 100 32 62,7 19 37, – – РИД (-) 56 6 10,7 50 89,3 5 8,9 51 91, Представленные результаты (рис. 23) выявления антител IgG с использованием разных по природе антигенов и с различной степенью очистки показывают, что выявление антител к ВЛКРС зависит от чистоты антигена (очищенный антиген р24 – 1) и способа нанесения белкового антигена на иммунопланшет (МКА/очищенный рекомбинантный антиген р – 4). Так, при использовании рекомбинантных белков с МКА процент выявления позитивных сывороток был наиболее высоким (80–92 %), тогда как коммерческий антиген позволял выявлять антитела к ВЛКРС с низкой эффективностью (54–67 %). Уровень антител в ИФА с использованием разных по природе антигенов соответствовал следующему ряду: 4 5 1 6 3 (см. рис. 23). Как показывают результаты анализов, оба метода, и РИД и ИФА, позволяют эффективно диагностировать антитела к ВЛКРС.

Диагностическая чувствительность и специфичность ИФА для рекомбинантных белков разной степени очистки по сравнению с РИД составила 70–93 %. Суммарная реактивность антигенов, используемых в работе, составила 90 % от общего числа тестируемых сывороток.

Образцы ДНК исследовали в ПЦР при помощи набора для экспресс индикации ДНК профага вируса лейкоза КРС методом ПЦР, согласно инструкции по применению производства «ЛАГИС» (Россия). Праймерная пара еnv (envelope), используемая в наборе, фланкирует фрагмент оболочечного гена длиной 346 п.н. и предназначена для скрининговой детекции всех вариантов ДНК BЛКРС, являясь маркером профага.

Амплификацию проводили в реакционной смеси, содержащей 0,5 мкг ДНК, 9 мкл буфера, 1 мкл раствора 1 мкл смеси MgCl2, дезоксирибонуклеозидтрифосфатов и праймеров и 0,3 мкл Taq-полимеразы под 20 мкл минерального масла в пластиковых пробирках объемом 0,5 мл.

Смесь помещали в амплификатор «Терцик» с заданной программой температурно-временных циклов. Как видно из табл. 12, при исследовании больных лейкозом коров (первая группа) и в ИФА, и в ПЦР были получены положительные результаты в 100 % случаев, что подтверждает наличие вируса и антител против него в сыворотке и крови животных. По литературным данным, с помощью ИФА можно выявлять антитела в разведении более чем 1:131000–1:220000 (Trono K.G., 2001).

Рис. 23. Результаты выявления антител к ВЛКРС методом ИФА среди РИД(+) и РИД(-) сывороток с использованием разных по природе антигенов. Цифрами по оси абсцисс обозначены разные по природе и степени очистки антигены (АГ): 1 – рекомбинантный очищенный АГ р24;

2 – рекомбинантный АГ р24;

3 – коммерческий АГ (из набора для постановки РИД);

4 –МКА/рекомбинантный очищенный АГ р24;

5 – МКА/рекомбинантный АГ р24;

6 –МКА/коммерческий АГ;

7 – контроль (т/с НПО «Нарвак»). По оси ординат – оптическая плотность при длине волны 450 нм.

Из 51 животного второй группы только 32 дали положительные результаты в ПЦР. При рутинном использовании ПЦР-диагностики возникают сложности в интерпретации результатов, так как совпадение данных ИФА, РИД и ПЦР анализа по выявлению ДНК ВЛКРС составляет 60–100 %, а для РНК – 60 %, (Dube S. et al., 1997;

Kubis P. et al., 1996). Компьютерный анализ тест-систем для выявления ВЛКРС посредством ПЦР показал, что применяемые в разных лабораториях праймеры характеризуются различной степенью гомологии.

Использование праймеров с невысокой степенью гомологии (90 % и менее) может существенно понижать чувствительность и специфичность ПЦР анализа и приводить к появлению ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Теми же причинами, по-видимому, можно объяснить несовпадение результатов сравнительного анализа ИФА и ПЦР диагностики ВЛКРС, проведенного на большом экспериментальном материале (Kubis P. et al., 1996). Однако в ПЦР нами были довыявлены 5 коров-вирусоносителей, которых ни с помощью РИД, ни ИФА не выявили.

На рис. 24 представлена электрофореграмма продуктов ПЦР.

Многочисленные данные, свидетельствующие о преимуществах ПЦР в сравнении с серологическими методами (более раннее выявление вируса, чем антител против антигенов ВЛКРС в РИД и ИФА на 1–8 недель, и выявление животных в случае скрытого вирусоносительства), а также данные, Рис. 24. Электрофореграмма продуктов ПЦР в 1,5 % агарозном геле:

1 – отрицательный контроль;

2 – положительный контроль;

3, 4 – (+)-пробы;

5 – маркер bр100;

6–8 – (-)-пробы.

полученные нами, характеризуют ПЦР как эффективный метод диагностики ВЛКРС. Напротив, ИФА зарекомендовал себя как высокоэффективный альтернативный или дополняющий РИД серологический метод, который можно, на наш взгляд, успешно использовать для диагностики лейкоза уже сегодня, особенно в хозяйствах на завершающих этапах оздоровления от лейкоза и в хозяйствах, где регистрируются единичные случаи ВЛКРС инфекции. Сравнительное выявление маркеров гуморального иммунного ответа у животных, инфицированных ВЛКРС, и молекулярных маркеров лейкозной инфекции приведено в табл. 13. Как показывают результаты, приведенные в табл. 13, 64 животных были диагностированы как позитивные по результатам нескольких тестов. Нами не было идентифицировано ни одного случая ложноположительного животного. Из 64 инфицированных ВЛКРС животных у 6 (9,4 %) не подтвердился диагноз ни одним из методов.

ИФА с использованием рекомбинантных антигенов подтвердил позитивный результат у 56 животных. Из 39 негативных было выявлено 10 с диагнозом заболевания ВЛКРС с применением ИФА и ПЦР, 3 животных оказались позитивными при использовании трех методов (ИФА с рекомбинантными белками и серологических и референсных методов – РИД и ИФА), однако дали отрицательный ответ в ПЦР. Процент выявления позитивных животных с помощью ПЦР и ИФА оказался существенно выше, чем при использовании методов ИФА и РИД. Чувствительность и специфичность ИФА составила 87,4 % и 93,5 % соответственно, что сравнимо с результатами ПЦР-теста.

Удовлетворительные результаты были получены нами при диагностике ВЛКРС на разных стадиях развития патологического процесса.

Необходимость новых подтверждающих тестов для выявления инфицированных и больных животных ВЛКРС, выявление маркеров гуморального иммунного ответа с целью профилактики, позволяет с более высокой достоверностью осуществлять контроль племенных стад КРС. И это является одним из путей в развитии диагностики ВЛКРС. Полученные результаты послужили основой для исследований по созданию диагностических тест-систем, в которых основным элементом являются рекомбинантные или нативные антигены, содержащие иммунодоминантные эпитопы в своей структуре. Использование рекомбинантного антигена р Таблица Сравнение результатов, характеризующих клинический статус и иммунореактивность животных в диагностике ВЛКРС Тест Результаты анализа Общее количество ИФА (р24 + – + + + + – – – + + – – + + рек.белки) ИФА – – + – + + – – + + + + – + + (референс тесты) ПЦР + – + + – + – – + + + – – + + РИД – – – – + – – – – + – + – + + ВЛКРС 10 0 7 2 0 12 1 2 1 3 5 2 3 12 4 (+) ВЛКРС (-) 10 5 0 0 3 0 14 7 0 0 0 0 0 0 0 Общее 20 5 7 2 3 12 15 9 1 3 5 2 3 12 4 кол-во позволяет применять его для оценки параметров гуморального иммунного ответа на стадии природного инфицирования животных, а также после проведения вакцинирования. При этом чувствительность антигена р ВЛКРС в ИФА к чувствительности белка р53 составляет 97 %, что согласуется с литературными данными (Molloy J. et al., 1990). Что касается РИД, этот показатель составил 96 %. Таким образом, открываются перспективы совершенствования новых направлений в диагностике инфекционных заболеваний и их практического применения. Как видно из приведенных результатов, новые методы, применяемые в диагностике инфекционных заболеваний, могут эффективно дополнять друг друга, развивая, таким образом, систему доказательной ветеринарии в диагностике инфекционных заболеваний животных.

4. ВЫВОДЫ 1. Разработана диагностическая тест-система «Вектогеп-А-IgM» для выявления антител класса M к вирусу гепатита А методом ИФА. По аналитическим характеристикам (чувствительности – 98–97 %, специфичности – 100 %, времени проведения анализа – 2–2,5 ч) тест-система сопоставима с тест-системами зарубежных фирм Abbott (CША) и La Roche (Швейцария). Тест-система по результатам проведения Госиспытаний, рекомендована Ученым советом ГИСК им. Л.А. Тарасевича и Комитетом по производству иммунобиологических препаратов (МИБП) к регистрации.

2. Разработан набор компонентов «Вектогеп-А-антитела» для выявления IgG-антител к ВГА с чувствительностью и специфичностью соответственно 98–99 % и 82 %. Аналитическая чувствительность диагностического набора составила 9,8 ± 1,2 мМЕ/мл, при этом чувствительность референс-тест системы «ИФА-анти-ВГА» составила 11,8 ± 1,6 мМЕ/мл.

3. Получены рекомбинантные штаммы E. сoli – продуценты химерных белков rESAT-6, rCFP10 и rMPT64 M. tuberculosis, которые депонированы в коллекции культур микроорганизмов ГНЦ ВБ «Вектор». Предложена технологическая схема для наработки и очистки рекомбинантных белков rESAT-6, rCFP10 и rMPT64 в растворимой форме.

4. На примере rESAT-6 и rCFP10 установлено, что с использованием рекомбинантных белков возможно выявлять антитела классов G, A и M среди разных групп обследуемых, но наиболее высокий показатель выявляемости иммуноглобулинов определен для антител класса G, который составил 70 % (для IgA – 31,4 %, IgM – 11,8 %).

5. Чувствительность и специфичность выявления IgG-антител методом иммуноферментного анализа к рекомбинантным антигенам rESAT-6, rCFP и rMPT64, оцененные по образцам сывороток от больных туберкулезом и здоровых доноров, составила 79 %, 65 %, 81 % и 92–98 %, 95–98 % и 76 % соответственно.

6. Определена корреляция между содержанием антител к антигенам микобактерий и активностью процесса. Показаны достоверные различия коэффициента корреляции между активностью процесса (выраженной в баллах) и уровнями антител класса G у больных туберкулезом легких независимо от формы процесса к Е-БЦЖ, к С-БЦЖ (соникат клеток), к Е H37Rv, к С-H37Rv (соникат клеток), и только при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких отмечалась достоверная корреляция между уровнями антител класса М к Е-H37Rv и С-H37Rv и степенью активности процесса.

7. Сравнительный анализ гуморального иммунного ответа больных на микобактериальные антигены с результатами патолого-гистологического исследования выявил достоверные коэффициенты корреляции между уровнями антител класса G к С-БЦЖ (r=0,476, p0,04), Е-H37Rv (r=0,495, p0,03) и уровнями антител класса М к С-БЦЖ (r=0,448, p0,04).

7.1. Достоверная корреляция между показателями содержания антител и клинико-рентгенологическими признаками заболевания, и между уровнями антител и патолого-гистологической картиной заболевания позволили конкретизировать диагностическую значимость уровней антител того или иного класса к определенным антигенам M. tuberculosis.

8. Чувствительность функционального анализа при выявлении маркеров Т-клеточного иммунного ответа (IFN-), определявшаяся при стимуляции мононуклеаров цельной крови рекомбинантными белками, rESAT-6, rCFP и rMPT64 составила 84–100 %, 80–95 %, 60–78 % соответственно, специфичность – 86–100 %, 82–100 % и 76–97 % соответственно. При использовании пула одновременно трех рекомбинантных белков – rESAT-6, rCFP10 и rMPT64 – специфичность составила 96,2 %, а чувствительность – 89,1 %. Разработаны диагностические компоненты наборов, позволяющие эффективно оценивать состояние клеточного иммунитета при туберкулезной инфекции.

9. Разработан алгоритм использования серологических тестов (РИД, ИФА) и молекулярно-биологических методов для (ПЦР, «nested»-ПЦР) обследования хозяйств с различной степенью инфицированности по лейкозу крупного рогатого скота (неблагополучные и благополучные):

– иммуноферментные методы определения антител к ВЛКРС позволяют дополнительно к РИД выявлять до 15,3 % животных, инфицированных ВЛКРС, в зависимости от эпизоотической ситуации по инфекции ВЛКРС.

Установлено, что 71 % сомнительных в РИД проб по результатам ИФА содержат антитела к ВЛКРС. С целью рационального использования иммуноферментного теста рекомендуется применять его при первичном разделении неблагополучного стада и на завершающей стадии оздоровления.

– доля животных, инфицированных ВЛКРС и выявленных разными методами, составила: для РИД – 76,1 %, для ИФА – 83,3 %, для ПЦР– 58,3 %, для «nested»-ПЦР – 72,6 %. Для максимального выявления всех инфицированных ВЛКРС животных необходимо комбинированное использование серологических (РИД, ИФА) и молекулярно-биологических (ПЦР, «nested»-ПЦР) методов диагностики.

– у гематологически больных лейкозом животных наличие ВЛКРС было подтверждено методами РИД, ИФА и ПЦР в 100 % случаев.

Список патентов, оформленных по теме диссертации 1. Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Болдырев А.Н., Татьков С.И. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTSE6, кодирующая гибридный полипептид GST-ESAT-6 со свойствами видоспецифичного микобактериального антигена ESAT-6, рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli – продуцент гибридного полипептида GST-ESAT-6 и рекомбинантный полипептид GST-ESAT-6. Патент RU № 2282661 C2 от 16.08.2004.

2. Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Болдырев А.Н., Татьков С.И. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTB232, кодирующая гибридный полипептид GST-CFP10 со свойствами видоспецифичного микобактериального антигена CFP10, рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli – продуцент гибридного полипептида GST-CFP10 и рекомбинантный полипептид GST-CFP10. Патент RU № 2381274 от 26.02.2008.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Аммосов А.Д., Гришаев М.П., Туманов Ю.В., Рукавишников М.Ю. Разработка иммуноферментных и зондовых тест-систем для выявления маркеров вирусных гепатитов, врожденных инфекций и клещевого энцефалита. Сборник матер.

Научно-практической конф. «Инфекционной службе г. Новосибирска – 90 лет».

Новосибирск. 5–7 октября 1994 г. С. 77–79.

2. Разумов И.А., Туманов Ю.В., Казачинская Е.И., Тюнников Г.Н., Локтев В.Б.

Изучение возможности использования крысиных моноклональных антител для конструирования диагностических тест-систем к вирусу гепатита А. «Актуальные вопросы современной медицины». Новосибирск. – 1995. – Т. 2. – С. 221–223.

3. Разумов И.А., Туманов Ю.В., Kазачинская Е.И., Тюнников Г.И., Локтев В.Б.

Моноклональные антитела в иммуноферментной диагностике вируса гепатита А // Вестник РАМН. – 1998. – № 3. – С. 9–13. (Список ВАК).

4. Лебедев Л.Р., Азаев М.Ш., Туманов Ю.В., Сизов А.А., Ильичев А.А., Татьков С.И. Искусственные микобактериальные частицы для иммунизации против туберкулеза // ДАН. – 2002. – Т. 387. – № 2. – С. 272–275. (Список ВАК).

5. Кузнецова Т.Н., Воевода М.И., Подколодная О.А., Куликов И.В., Кобзев В.Ф., Устинов С.Н., Малютина С.К., Логвиненко Н.И., Журавская Э.Я., Чердынцева Н.В., Туманов Ю.В., Морозова О.А., Баум В.А., Ромащенко А.Г. Делеционный полиморфизм 11-го интрона гена c-fms человека: частоты аллелей в некоторых популяциях России и возможная функциональная значимость // Генетика. – 2004. – T. 40. – № 1. – С. 102–112. (Список ВАК).

6. Азаев М.Ш., Лебедев Л.Р.. Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Кузьмичева Г.А., Боднев С.А., Донченко Н.А., Татьков С.И. Получение искусственных микобактериальных частиц и исследование их иммунногенных свойств // Биотехнология. – 2004. – № 4. – С. 32–34. (Список ВАК).

7. Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н., Туманов Ю.В., Кузнецов Н.Б., Михайлов Е.С., Седова Ю.В., Огиренко Н.П. Антитела к антигенам микобактерий у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. – 2004. – № 11. – C. 37–40. (Список ВАК).

8. Двоеглазов. Н.Г., Туманов Ю.В. Сравнительный анализ разных коммерческих тест систем и методов в диагностике ВЛКРС. «Актуальные вопросы ветеринарии»: матер.

Сиб. междунар. науч.-практ. конф. – Новосибирск. 2004. – С. 304–308.

9. Мокеева А.В., Орешкова С.Ф., Попова А.Г., Сивков А.Ю., Туманов Ю.В., Азаев М.Ш., Татьков С.И., Ильичев А.А. Генетический полиморфизм клинических штаммов микобактерий туберкулеза, циркулирующих на территории Новосибирской области // Вестник РАМН. – 2005. – № 1. – С. 20–24. (Список ВАК).

10. Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Болдырев А.Н., Вараксин Н.А., Татьков С.И.

Рекомбинантные белки M. tuberculosis в диагностике туберкулeза лeгких // Медицинская иммунология. – 2006. – № 2/3. – С. 294–295. (Список ВАК).

11. Татьков С.И., Носарева О.В., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Туманов Ю.В., Лебедев Л.Р., Порываева В.А., Ивлев-Дунтау А.П., Аутеншлюс А.И., Ткаченко С.Б., Стрелис А.К., Новицкий В.В., Уразова О.И., Воронкова О.В. Применение рекомбинантных видоспецифических белков M. tuberculosis для серологической диагностики туберкулeза // Клиническая лабораторная диагностика. – 2006. – № 12.

– С. 23–34. (Список ВАК).

12. Татьков С.И., Туманов Ю.В., Носарева О.В., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Лебедев Л.Р., Порываева В.А., Ивлев-Дунтау А.П., Ткаченко С.Б., Стрелис А.К., Новицкий В.В., Уразова О.И., Воронкова О.В. Применение рекомбинантных видоспецифических белков микобактерий туберкулеза для серологической диагностики инфекции // Эпидемиология и вакцинопрофилактика.

– 2006. – № 4(29). – С. 42–47. (Список ВАК).

13. Двоеглазов Н.Г., Туманов Ю.В., Храмцов В.В., Таслицкий С.Я. Использование различных по природе антигенов для диагностики инфекции ВЛКРС. // Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Сибири: сб. науч. тр. / РАСХН.

Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. – Новосибирск, 2006. – С. 73–76.

14. Татьков С.И., Сивков А.Ю., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Туманов Ю.В., Медведева Е.В., Ивлев-Дунтау А.П., Стрелис А.К., Новицкий В.В., Уразова О.И., Воронкова О.В. Результаты применения биочипов для определения лекарственной устойчивости M. tuberculosis в Новосибирской и Томской областях // Мол. Ген.

Микробиол. Вирусол. – 2007. – № 4. – С. 9–15. (Список ВАК).

15. Азаев М.Ш., Лебедев Л.Р., Кузьмичева Г.А., Туманов Ю.В., Донченко Н.А., Татьков С.И., Носарева О.В., Ильичев А.А. Исследование роли искусственных микобактериальных частиц в реализации иммунологических процессов при экспериментальном туберкулезе животных // Пробл. туберкулеза и болезней легких. – 2007. – № 2. – С. 38–48. (Список ВАК).

16. Двоеглазов Н.Г., Туманов Ю.В., Храмцов В.В. Сравнительный анализ антигенов при выявлении антител к вирусу лейкоза методом иммуноферментного анализа у инфицированного крупного рогатого скота // Сибирский Вестник сельскохозяйственной науки. – 2007. – № 8. – C. 91–94. (Список ВАК).

17. Nosareva O.V., Nesterov A.N, Boldyrev A.N., Smirnova O.Y., Tumanov Yu.

V., Tatkov S.I. Using a polysaccharide matrix for DNA-vaccine based on ESAT-6 // Biological Chemistry. – 2008. – V. 389. – N 5. – P. 579–583. (Список ВАК).

18. Nosareva O.V., Nesterov A.E., Boldyrev A.N., Smirnova O.Y., Tumanov Yu.

V., Tatkov S.I. Detection of ESAT-6 specific T-cell responses induced by vaccination mice with the preparation «KpONE6» // Clinical Microbiology and Infection. May – 2008. – V. 14s7. – P. 570.

19. Туманов Ю.В. «Мониторинг туберкулезной инфекции с использованием методов функционального анализа». ЕЖЕГОДНИК МЕДИЦИНСКИХ ИННОВАЦИЙ. Hannover. 2009, Европейское научное общество (ЕНО), Европейская академия естественных наук (ЕАЕН). – С. 186–187.

Доклады и тезисы конференций с международным участием 1. Дунтау А. П., Федорова М.В., Кожина Е.М., Липский К.А., Никитина О.Г., Жилина С.А., Челышева Л.Б., Астапова Н.А., Татьков С.И., Туманов Ю.В., Ильичев А.А. Анализ лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза по данным ГДТ № 1, Новосибирск. Тез. Докл. VII Международной конф. и дискуссионный научный клуб «Новые информационные технологии в медицине и экологии». Украина. Гурзуф, июнь 2000 г. – С. 110.

2. Туманов Ю. В., Дунтау А. П., Кожина Е. М., Федорова М. В., Липский К. А., Никитина О. Г., Жилина С. А., Челышева Л. Б., Астапова Н. А., Татьков С. И., Рассадкин Ю. Н., Шестопалов А. М., Ильичев А. А. Создание и характеризация коллекции штаммов M. tuberculosis, полученных от больных туберкулезом г.

Новосибирск. Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы (Мат. 8-й международной конф. «СПИД, рак и родственные проблемы». Санкт – Петербург).

– 2000. – Т. 4. – N1. – C. 38.

3. Туманов Ю.В., Дунтау А. П., Федорова М.В., Кожина Е.М., Липский К.А., Никитина О.Г., Жилин С.А., Челышева Л.Б., Астапова Н.А., Татьков С. И., Рассадкин Ю.Н., Шестопалов А.М., Ильичев А.А. Эпидемиологическая ситуация по распространенности туберкулеза с первичной лекарственной устойчивостью в г.

Новосибирске в 1999 году. Тез. Докл. Конф. «Проблемы биологической и экологической безопасности». Оболенск. – 2000. – С. 269.

4. Duntau E.M., Fedorova M.V., Tumanov Y.V., Tatkov C.I., Ilychev A.A. Primary Drug Resistant tuberculosis in Novosibirsk in 1999 Year. International Conference. May 18–23. 2001. San Francisco, California, American Thoracic Society.

5. Tatkov S.I., Kozhina E.M., Smirnova O.Y., Tumanov Y.V. et al. Additional region rpoB (202–206) for rapid detection of rifampicine-resistantce of M. tuberculosis by PCR SSCP. 11th ERS Annual Congress Berlin, Germany. 2001. September 22–26.

6. Двоеглазов Н.Г., Туманов Ю.В., Белявская В.А, Храмцов В.В. Смирнов П.Н.

Сравнительный анализ ПЦР и серологических методов выявления антител к ВЛКРС. Тез. Докл. Всероссийской научно-практ. конф. г. Иркутск 2002. С. 23–24.

7. Двоеглазов Н.А., Туманов Ю.В., Храмцов В.В. Рекомбинантные антигены ВЛКРС при выявлении антител к ВЛКРС. Тез.докл. Всероссийской конф.

г. Иркутск. 2002. С.17–18.

8. Двоеглазов Н.Г., Туманов Ю.В., Файзулин Р.З., Белявская В.А., Храмцов В.В. Создание стандартной лабораторной панели сывороток для выявления антител к ВЛКРС. Матер. научно-практ. конф., посвящ. 70-летию Иркутской НИВС. – Иркутск, 2002. С. 21–23.

9. Татьков С.И., Смирнова О.Ю., Туманов Ю.В., Азаев М.Ш., Кожина Е.М., Дунтау А.П., Медведева Е.В., Баранова О.И., Гришаева О.Н. Исследование генетических причин устойчивости к рифампицину штаммов M. tuberculosis, циркулирующих в г. Новосибирске. «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера». Вторая научная конф. с международным участием. Новосибирск. Россия. 29–30 мая. 2002. С.212.

10. Болдырев А.Н., Сивков А.Ю., Туманов Ю.В., Татьков С.И. Использование полимеразной цепной реакции для одновременного определения инфицированности пациента туберкулезом и устойчивости к рифампицину. Труды конф. «Межрегиональная научная конф., посвященная 100-летию со дня рождения академика АМН СССР С.П. Карпова», 7–10 октября 2003 г. – Томск. С. 169–170.

11. Сивков А.Ю., Болдырев А.Н., Азаев М.Ш., Медведева Е.В., Дунтау А.П., Туманов Ю.В., Татьков С.И. Оценка эффективности применения биочипа для определения изолятов, устойчивых к рифампицину. «Межрегиональная научная конф., посвященная 100-летию со дня рождения академика АМН СССР С. П.

Карпова», 7–10 октября, 2003, С. 170–171.

12. Смирнова О.Ю., Болдырев А.Н., Туманов Ю.В., Боднев С.А., Аутеншлюс А.И., Татьков С.И. Рекомбинантные белки M.tuberculosis в серологической диагностике туберкулеза. «Межрегиональная научная конф., посвященная 100-летию со дня рождения академика АМН СССР С. П. Карпова», 7–10 октября, 2003, С. 171–172.

13. Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н., Туманов Ю.В., Кузнецова Н.Б., Михайлова Е.С., Седова Ю.В. Антитела к антигенам M.tuberculosis и патоморфологическая картина при туберкулезном воспалении в легких. «VII Российский съезд фтизиатров» 3 – 5 июня 2003 года Москва. С. 6–7.

14. Nosareva O., Smirnova O., Boldyrev A., Tumanov Y., Azaev M., Lebedev L. еt al.

Соnstruction of artificial virus-like particles exposing Micobacterial ESAT-6, and the study of their immunogenic properties. Keystone Symposia “Tuberculosis: Inytegrating Host and Pathogen Biology”. Whistler, British Columbia, Canada 2–7. April 2005. Р. 94.

15. Nosareva,O.V, Nesterov A.E., Boldyrev A.N., Smirnova, O.J., Tumanov Y.V., Tatkov S.I. Investigation of the experimental preparation on the basis mycobacterium antigen ESAT-6. The International Simposium “EU-Russia: Prospects for Cooperation in Biotechnology in the Seventh Framwork Programme”, St-Petersburg, Rossia. June 5– 2006. Р. 72.

16. Болдырев А.Н., Носарева О.В., Смирнова О.Ю., Туманов Ю.В., Татьков С.И.

Применение рекомбинантных видоспецифических белков M. tuberculosis для серологической диагностики туберкулеза. III Российская научная конф. с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера». – Новосибирск. – Россия. – 27– сентября 2006 г. – С. 134–135.

17. Туманов Ю.В., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Лебедев Л.Р., Азаев М.Ш., Носарева О.В., Ивлев-Дунтау А.П., Татьков С.И. Выявление маркеров Т клеточного иммунитета в видоспецифической диагностике туберкулеза. // III Российская научная конф. с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера». – Новосибирск. – Россия. – 27–29 сентября 2006 г. – С. 166–167.

18. Туманов Ю.В., Рапута В.Ф., Рагино Ю.И., Воевода М.И. Оценка серологических маркеров вирусных и бактериальных инфекций среди населения, проживающего в техногенных зонах г. Новосибирска. «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера»: Тез. докл. III Росс. науч. конф. с междунар. участием (Новосибирск, 27–29 сент. 2006 г.) Новосибирск: ЦЭРИС, 2006. С.281–282.

19. Азаев М.Ш., Лебедев Л.Р., Туманов Ю.В., Донченко Н.А., Кузьмичева Г.А., Татьков С.И., Ильичев А.А. Создание искусственных микобактериальных частиц и исследование их роли в реализации иммунологических процессов при экспериментальном туберкулезе животных. «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера»: Тез. докл. III Росс. науч.

конф. с междунар. участием (Новосибирск, 27–29 сент. 2006 г.) Новосибирск:

ЦЭРИС, 2006. С.132–133.

20. Татьков С.И., Сивков А.Ю., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Туманов Ю.В.

Результаты применения биочипов для определения лекарственной устойчивости M.Tuberculosis в Новосибирской и Томской областях. «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера»: Тез. докл. III Росс. науч. конф. с междунар. участием (Новосибирск, 27–29 сент. 2006 г.) Новосибирск: ЦЭРИС, 2006. С.163–164.

21. Туманов Ю. В. Экспресс-тесты в диагностике вирусных и бактериальных инфекций. Международный Междисциплинарный Симпозиум «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», Судак, Крым, Украина, 17–27 сентября 2006 г. С. 73–75.

22. Носарева О.В., Нестеров А.Е., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Туманов Ю. В Татьков С.И. Исследование экспериментального препарата на основе микобактериального антигена ESAT6. Международная Школа-конференция молодых ученых «Биотехнология будущего» в рамках Симпозиума «ЕС-Россия:

перспективы сотрудничества в области биотехнологии в 7-й Рамочной Программе». 2006. С. 72–73. Москва, ОАО «Авиаиздат».

23. Туманов Ю.В., Болдырев А.Н., Носарева О.В., Смирнова О.Ю., Татьков С.И.

Использование рекомбинантных микобактериальных антигенов в диагностике туберкулеза легких. Сб. тез. II Российско-Германской конф. форума Коха Мечникова 9–12 сентября 2007 г. – Томск. – Россия. – С. 34–35.

24. Туманов Ю.В., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Лебедев Л.Р., Азаев М.Ш., Носарева О.В., Ивлев-Дунтау А.П., Татьков С.И. Видоспецифическая диагностика туберкулеза по маркерам Т-клеточного иммунитета. Сб. тез. II Российско Германской конф. форума Коха-Мечникова 9–12 сентября 2007 г. – Томск. – Россия. – С. 36–37.

25. Туманов Ю.В., Болдырев А.Н., Смирнова О.Ю., Татьков С.И.

Иммунологический мониторинг туберкулезной инфекции с использованием рекомбинантных белков rESAT-6 и rCFP10 M. tuberculosis. Четвертый Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», секция 1 «Биотехнология и медицина»12–16 марта 2007 г. с. 147.

26. Коробова Е.В., Курская О.Г., Сметанникова Н.А., Максимов В.Н., Туманов Ю.В., Воевода М.И., Белявская В.А. Распространенность инфекционных агентов и однонуклеотидных полиморфных (ОНП) маркеров генов подверженности к социально значимым заболеваниям у населения г. Новосибирска. Четвертый Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», секция 1 «Биотехнология и медицина» 12–16 марта 2007 г. С. 81.

27. Туманов Ю.В., Сергеев А.Н. Экспресс-технологии в диагностике вирусных и бактериальных инфекций. «Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России»: мат. научно практ. конф. (21–22 марта 2007, Ставрополь). – Ставрополь, 2007. – Ч. II. – С. 149– 151.

28. Сивков А. Ю., Болдырев А. Н., Смирнова О.Ю., Туманов Ю. В., Татьков С. И.

Результаты применения биочипов для определения лекарственной устойчивости M.tuberculosis в Новосибирской и Томской областях. II Российско-Германская конф. форума Коха-Мечникова, «Туберкулез, Спид, Вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении». Тез. Томск 9–12 сентября 2007 г., С.12–13.

29. Белявская В.И., Курская О.Г., Коробова Е.В., Максимов В.Н., Туманов Ю.В., Воевода М.И., Дроздов И.Г. Интегральные исследования в оценке риска развития гриппозной инфекции особой интенсивности (пандемии) у населения Новосибирска. «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах участниках СНГ»: мат. VIII Межгосударственной научно-практ. конф. государств участников СНГ – Саратов 2007. С.18–20.

30. Коробова Е.В., Курская ОГ., Туманов Ю.В. Максимов В.Н., Сметанникова Н.А., Икракинбек Р., Воевода М.И., Белявская В.А. Исследование маркеров инфекционных агентов и SNP (simple nucleotide polymorphism) генов р53 и ССR5 у мужского населения г. Новосибирска. III Российская конф. по фундаментальной онкологии «Петровские чтения – 2007», Санкт-Петербург, 20 апреля 2007 года, С. 31. Нестеров А.Е., Носарева О.В., Липкина Е.Е., Пасаженникова И.К., Витенков Е.И., Полтавченко А.Г., Болдырев А.Н., Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Татьков С.И. Перспективы применения рекомбинантного белка ESAT6 для ранней диагностики туберкулеза. Мат. междунар. научно-практ. конф. «Молекулярная диагностика инфекционных болезней», г. Минск, 17–18 мая 2007 г., С. 109.

32. Nosareva O. V., Nesterov A. N., Boldyrev A.N., Smirnova O. Y., Tumanov Y.V., Tatkov S.I. Immune response generated by DNA-vaccine with ESAT-6 and polysaccharide matrix in mice. Vaccine Congress, Amsterdam, the Netherlandsm 9– December 2007. Р.47.

33. Носарева О.В., Нестеров А.Е., Липкина Е.Е., Пасаженникова И.К., Витенков Е.И., Болдырев А.Н., Туманов Ю.В., Смирнова О.Ю., Татьков С.И. Перспективы применения ПЦР для выявления гена, кодирующего специфический микобактериальный антиген ESAT-6 в мононуклеарах периферической крови. Мат.

междунар. научно-практ. конф. «Молекулярная диагностика инфекционных болезней», г. Минск, 17–18 мая 2007 г. С. 110.

34. Туманов Ю.В., Технологии “point-of-care tests” в современной диагностике вирусных и бактериальных инфекций. Международный междисциплинарный симпозиум «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине». Судак. 17–28 сентября 2007. С.116–117.

35. Nosareva O., Nesterov A., Boldyrev A., Smirnova O., Tumanov Y., Tatkov S.

Influence genetic construction Based DNA encoding ESAT-6 M. tuberculosis on immune system in mice

Abstract

book of the Keystone Symposia “Tuberculosis: Biology, Pathology and Therapy”. Colorado, U.S.A. 25–30 January 2009. P. 123.

Учебные и методические пособия Щербакова С.А., Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Агафонов А.П., Туманов Ю.В., Щелкунов С.Н., Рябчикова Е.И., Яшина Л.Н., Терновой В.А., Полтавченко А.Г., Петров В.С., Локтев В.Б., Кузубов В.И., Сергеев А.Н., Нетесов С.В., Дроздов И.Г.

Лабораторная диагностика опасных инфекционных заболеваний. Практическое руководство. // под ред. Онищенко Г.Г., – М.: ЗАО «МП Гигиена», 2006, – 288 с.

Научно-техническая документация 1. Экспериментально-производственный регламент (ЭПР) 373–92. «Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А «Вектогеп-А-IgM».

2. Временная фармакопейная статья (ВФС 42-331ВС-92) на «Тест-систему иммуноферментную для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А «Вектогеп-А-IgM».

3. Инструкция по применению «Тест-системы иммуноферментной для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А «Вектогеп-А- IgM».



Pages:     | 1 ||
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.