авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 ||

Ядерный антиген пролиферирующих клеток (pcna): координатор клеточных функций в норме и патологии

-- [ Страница 2 ] --

Удивительно то, что имеется большой список связывающихся с PCNA белков, которые вовлечены в клеточные функции, где роль PCNA пока еще трудно объяснить (Naryzhny 2008). В случае с мембранными и цитоскелетными белками возникает искушение предположить, что взаимодействие PCNA с ними связано с транспортом. PCNA не содержит сигналов ядерной локализации, является очень кислым белком, что не характерно для ядерных белков, но локализуется обычно в ядре. По-видимому, другие механизмы, не регулируемые по классической схеме импортином альфа и импортином бета, отвечают за импорт PCNA в ядро. Взаимодействие PCNA с факторами трансляции (EF1A, E1F1B) или ферментами метаболизма указывает как на возможность дополнительных функций этих белков, так и на участие PCNA в метаболических процессах. Например, EF1A помимо того, что является основным фактором трансляции, возможно, является также компонентом убиквитин-зависимой системы протеолиза (Gonen, Smith et al. 1994), которая вовлечена в систему баланса между моно- и полиубиквитинированной формами PCNA (Toueille, Saint-Jean et al. 2007). PCNA регулируется через убиквитинирование и SUMO-илирование, и он сам также может управлять убиквитинированием и протеолизом других белков, таких, например, как Cdt1 (Arias and Walter 2006). Способность PCNA взаимодействовать с такими протеолитическими ферментами, как куллин-2 (CUL2_HUMAN), фактор 6, ассоциированный с TNF (TRAF6_HUMAN), или убиквитин-протеин-лигаза Mdm2 (Banks, Wu et al. 2006), дополняет картину участия PCNA в протеолизе других белков.

Взаимодействующие с PCNA белки, обнаруженные Фар-Вестерном.

Подход с использованием Фар-Вестерна в комбинации с 2DE выявил многочисленные пятна, представляющие белки в нормальных и раковых клетках, которые взаимодействуют с PCNA (Рис.18). Чтобы идентифицировать эти белки, каждый образец был подвергнут 2DE в дубликатах. Затем один гель был окрашен Кумасси, а другой переведен на PVDF мембрану и обработан в соответствии с протоколом Фар-Вестернa. Совмещая пленку и окрашенную мембрану, пятна, соответствующие сигналам на Фар-Вестерне были выявлены в геле, и самые мажорные из них были идентифицированы с помощью белковой дактилоскопии. Удалось идентифицировать более 16 взаимодействующих с PCNA белков, причем уровень экспрессии многих из них отличается в нормальных и раковых клетках, и они являются известными или потенциальными онкомаркерами (Табл.1). Наиболее сильно уровень экспрессии в раковых клетках по сравнению с нормальными клетками увеличен у EF1A2, чуть менее у пептидил пролил-цис-транс-изомеразы А, митохондриальной малат-дегидрогеназы и пероксиредоксина-6.

Особенно интересно то, что шесть белков в списке взаимодействующих с PCNA белков, обнаруженных Фар-Вестерном, являются гликолитическими ферментами (Табл.1). Естественным образом сразу возникает предположение об участии PCNA в гликолизе. Для получения дополнительной информации, подтверждающей это предположение, были проведены следующие эксперименты. Сначала взаимодействие ферментов гликолиза с PCNA было подтверждено с использованием чистых белков и опять же Фар-Вестерна, но в комбинации с одномерным электрофорезом. Шесть из 10 ферментов, участвующих в гликолизе, фруктозо-бифосфат альдолаза А, триозофосфатизомераза, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа, фосфоглицерат киназа 1, фосфоглицерат мутаза 1, альфа-энолаза подтвердили свое взаимодействие с PCNA.

Интересно то, что эти ферменты отвечают за шесть последовательных стадий гликолиза. В дополнение, взаимодействие некоторых из них с PCNA было подтверждено в экспериментах с использованием иммуноосаждения и гель фильтрации. Следует отметить, что в свое время было предложено множество гипотез и схем, объясняющих пространственную и временную организацию реакций гликолиза, который в большинстве клеток проходит в цитоплазме. Много усилий было потрачено также на обнаружение и выделение гликолизного комплекса. Однако Рисунок 18. PCNA связывающие белки, обнаруженные Фар Вестерном в нормальных, HMEC, (А, В) и раковых, MDA-MB468, (С, D) клетках.

(A) Клетки лизировали в буфере для образца, белки разделяли в 2DE, переводили на мембрану, ренатурировали, инкубировали с PCNA, и PCNA-связывающие белки детектировали антителами к PCNA, PC-10 (A, C). Белки, разделенные в 2DE, окрашивали Кумасси R350 (B, D).

убедительных доказательств его существования все еще не представлено. Трудность состоит в большом числе компонентов и их слабого взаимодействия друг с другом. Вполне возможно, что и PCNA также мог бы принимать участие в гликолизе за счет одновременного взаимодействия с разными белками-ферментами, обеспечивая эффективный переход продукт-субстрат.

Структурная организация PCNA очень хорошо подходит для этой роли. Он может одновременно разместить на себе разные белки-партнеры и, возможно, играть роль координирующей станции не только для репликации ДНК, репарации ДНК и сборки хроматина, но и для ферментов гликолиза Локализация PCNA.

Процессы гликолиза идут в цитоплазме и, соответственно, гликолитические ферменты локализованы в основном в цитоплазме. С другой стороны, PCNA, как даже следует из его № Название Функция Экспрессия при раке ALDOA_HUMAN (Fructose-bisphosphate 1 гликолиз, стадия #4 Не меняется aldolase A) Альдолаза TPIS_HUMAN (Triosephosphate isomerase) 2 гликолиз, стадия #5 Не меняется Триозофосфатизомераза G3P_HUMAN (Glyceraldehyde-3-phosphate 3 гликолиз, стадия #6 Не меняется dehydrogenase) Глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа PGK1_HUMAN (Phosphoglycerate kinase 1) 4 гликолиз, стадия #7 Не меняется Фосфоглицерат киназа PGAM1_HUMAN (Phosphoglycerate mutase 1) 5 гликолиз, стадия #8 Не меняется Фосфоглицерат мутаза ENOA_HUMAN (Alpha-enolase А) 6 гликолиз, стадия #9 Не меняется Альфа энолаза А LDHA_HUMAN (L-lactate dehydrogenase A 7 гликолиз, стадия #11 Не меняется chain) Лактат дегидрогеназа MDHM_HUMAN (Malate dehydrogenase, 8 Метаболизм Не меняется mitochondrial precursor) Малат дегидрогеназа EF1A2_HUMAN (Elongation factor 1-alpha 2) 9 Биосинтез белка, Повышенная Фактор элонгации 1 альфа 2 миграция клеток PPIA_HUMAN (Peptidyl-prolyl cis-trans 10 Структура белка Повышенная isomerase A) Пептидил-пролил цис транс изомераза А PRDX6_HUMAN (Peroxiredoxin-6) 11 Окислительно- Повышенная Пероксиредоксин 6 восстановительные реакции CAH2_HUMAN (Carbonic anhydrase 2) 12 метаболизм Не меняется Карбоновая ангидраза RSSA_HUMAN (40S ribosomal protein SA) 13 Синтез белка, передача Не меняется Белок SA из 40S рибосом сигналов 14 K2C7_HUMAN (Keratin, type II cytoskeletal 7) Цитоскелет, клеточный Пониженная Кератин из цитоскелета -7, тип 2 рост, дифференцировка 15 HNRH1_HUMAN (Heterogeneous nuclear Сплайсинг и процессинг Не меняется ribonucleoprotein H) Гетерогенный ядерный мРНК рибонуклеопротеин Н 16 ANXA2_HUMAN (Annexin A2) Физиология мембран Пониженная Аннексин А Таблица 1. PCNA-связывающиеся белки, обнаруженные Фар-Вестерном.

названия, считается ядерным белком, и если имеется функциональный вклад PCNA в гликолиз, то, по-видимому, это должно происходить в цитоплазме. Чтобы прояснить данную ситуацию, аспект локализации PCNA был проанализирован более детально, в разных клетках и при различных условиях. Оказалось, что хотя PCNA и является в основном ядерным белком, значительная часть его все-таки может присутствовать и в цитоплазме. Используя вектор, кодирующий GFP-PCNA, можно получить клеточные линии, стабильно экспрессирующие GFP PCNA. Что любопытно, локализация GFP-PCNA в этих линиях может быть очень разной, и в основном ядерной, и в основном цитоплазматической. Более того, распределение GFP-PCNA и ферментов гликолиза может быть очень похожим (Naryzhny and Lee 2010). Таким образом, следует отметить, что цитоплазматическая часть популяции PCNA может быть очень значительной.Однако, по-видимому, из-за того, что роль PCNA в процессах, происходящих в хроматине хорошо известна и интенсивно изучается, цитоплазматический PCNA до сего времени рассматривался в лучшем случае как артефакт, несмотря на то, что имеется много публикаций касающихся цитоплазматической локализации PCNA.

Активность ферментов гликолиза и PCNA.

Чтобы изучить возможный вклад взаимодействия PCNA с гликолитическими ферментами, активность некоторых из них была протестирована in vitro. Например, была измерена активность Рисунок 19. Реакции гликолиза могут стимулироваться PCNA in vitro. (А) Присутствие PCNA в системе ферментов, содержащих альдолазу (ALDOA), триозофосфатизомеразу (TPIS) и глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназу (G3P), представляющих стадии №4, №5, №6 гликолиза, заметно увеличивает скорость реакции. Альдолазную реакцию проводили после преинкубации ( мин, 4C) компонентов реакции с разными количествами PCNA (0 – нет PCNA, 1 – 2.5 мкг/мл, 2 – 5 мкг/мл, 3 – 10 мкг/мл). Использовали калорометрический набор от Caldon Biotech, Inc (Carsbad, CA, USA), содержащий TPIS, G3P, NADH и альдолазу (1мкг/мл) (В) Активерсть G3P, в экстрактах HEK клеток и в экстрактах HEK клеток, стабильно экспрессирующих GFP-PCNA. Активность G3P определяли по поглощению при 560 нм, используя набор реагентов KDalert kit и следуя инструкциям производителя (Ambion Inc, Austin, TX, USA). (С) Следует отметить, что уровень G3P в таких клетках одинаков, зато общее содержание PCNA за счет экспрессии GFP-PCNA повышено в ~1.5 раза (дорожки 3, 4 – PCNA и GFP-PCNA). На дорожки 1, 3 наносили экстракт клеток НЕК 293, а на дорожки 2, 4 – экстракт клеток НЕК 293, экспрессирующих GFP-PCNA. (1, 2) Окрашивание Кумасси R350. (3, 4) Иммуноокрашивание антителами к G3P, а затем антителами к PCNA (РС10).

альдолазы, используя ферментативный набор, содержащий триозофосфатизомеразу и G3Р.

Оказалось, что присутствие PCNA стимулирует эту активность (Рис.19). В данном случае мы имеем подражание ситуации с гликолизом in vivo, где вышеуказанные ферменты последовательно катализируют стадии гликолиза №4, №5, №6. А экстракт клеток, стабильно экспрессирующих цитоплазматический GFP-PCNA, показывает более высокую активность G3Р по сравнению с таким же экстрактом, полученным из контрольных клеток (Рис.19). В связи с тем, что кроме ферментов гликолиза имеется еще много других, взаимодействующих с PCNA, белков, которые в основном локализованы в цитоплазме, проявляется функциональная значимость присутствия PCNA в цитоплазме. Эти функции могут быть связаны с передачей внутриклеточных сигналов и цитоскелетом через взаимодействие с такими белками, как аннексин А2, сарколектин, EF1A2, PPIA или рибосомальный белок SA. Другая область – метаболические пути и взаимодействие с такими белками, как малат дегидрогеназа, пероксиредоксин 6, карбоновая ангидраза 2, альдолаза А, триозофосфатизомераза, G3P, фосфоглицерат киназа 1, фосфоглицерат мутаза 1 и альфа энолаза. Большая часть этих метаболических ферментов представляет гликолиз и, соответственно, логично предположить об участии PCNA в этом процессе. Если в случае репликации хроматина роль PCNA состоит в координации различных процессов, происходящих в одном месте (на репликативной вилке ДНК), в частности, синтеза ДНК и сборки хроматина (Рис.17), то в случае гликолиза координирующая роль PCNA может заключаться в обеспечении более эффективного прохождения последовательного каскада реакций. При этом за счет локализации ферментов этого каскада на PCNA, продукт одной реакции может немедленно использоваться как субстрат в следующей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Роль PCNA в клетке определяется способностью этого белка связываться с другими макромолекулами и координировать их функции. Эта координация обеспечивается за счет структуры PCNA в виде симметричного двойного кольца. Такое кольцо нанизывается на ДНК и обеспечивает связывание с белками, действующими в реакциях, направленных в противоположных направлениях цепи ДНК. Будучи связанным с ДНК и являясь движущейся платформой для ДНК-полимераз и других белков PCNA является своего рода “мастером координатором” процессов, происходящих в хроматине. Во время репликации ДНК, в S–фазе клеточного цикла, координация затрагивает в первую очередь синтез ДНК, который ведется разными полимеразами. Большинство из этих полимераз имеет свою узкую специализацию и приступает к своим функциям за счет взаимодействия с PCNA. То есть, в данном случае PCNA действует как переключатель, меняющий одного партнера на другого. Причем механизм такого переключения связан с модификациями PCNA, в первую очередь с убиквитинированием. Помимо этого PCNA также может действовать как адаптер или координатор, взаимодействуя с несколькими белками одновременно, а не по очереди. В таком режиме PCNA, находясь в хроматине, обеспечивает взаимодействия между процессами репарации/репликации ДНК и другими клеточными функциями, такими, как сборка хроматина и эпигенетические модификации.

PCNA может также служить платформой для различных белков, не взаимодействуя с ДНК. В таком случае возникает вопрос о том, как это связано с локализацией PCNA внутри клетки.

Взаимодействует ли PCNA со специальными структурами типа ядерного матрикса, или же свободно распределен в нуклеоплазме или цитоплазме? По-видимому, возможны все эти ситуации. Но если в ядре такие перемещения PCNA между нуклеоплазмой, ядерным матриксом и хроматином логично вписываются в картину регуляции процессов, связанных с генетическим и эпигенетическим материалом клетки, то в цитоплазме не все так очевидно. Однако обнаруженная связь PCNA с гликолизом в совокупности с тем, что повышенный уровень экспрессии PCNA и активация гликолиза являются характерными чертами раковых клеток, открывает для нас новые аспекты внутриклеточных белковых взаимодействий в нормальных и патологических ситуациях.

Среди возможных функциональных модификаций PCNA пока наиболее достоверно подтверждено убиквитинирование и ацетилирование. Высокочувствительный анализ с использованием изотопной метки показал отсутствие фосфорилирования PCNA in vivo.

Полиубиквитинирование PCNA по любому лизину или же N-концу необходимо для его протеасомной деградации. Имеется ряд доказательств об ацетилировании PCNA и его участии в репликации ДНК и в стабилизации комплексов PCNA с другими белками.

Четвертичная структура PCNA имеет вид двойного кольца, в котором кольца (тримеры) взаимодействуют друг с другом своими обратными сторонами, а лицевые стороны остаются открытыми для взаимодействия с другими белками. Двойной тример PCNA с симметричной структурой является двухсторонней платформой, которая может скользить по ДНК и взаимодействовать одновременно с разными белками, координируя процессы, происходящие на ДНК. Кроме того, показано взаимодействие PCNA с множеством белков, часть из которых участвует в процессах, происходящих за пределами хроматина и даже за пределами ядра, в цитоплазме. Показано, что многие из этих белков связаны с канцерогенезом, а уровень самого PCNA значительно повышен в опухолевых клетках. Чрезвычайно важный вопрос состоит в том, как регулируется взаимодействие отдельных белков с PCNA в определенное время и в определенном месте. Основным механизмом этой регуляции, по-видимому, являются посттрансляционные модификации PCNA и других белков. Таким образом, выявление сигнальных механизмов, ведущих к модификациям и ассоциации/диссоциации белковых комплексов с PCNA необходимо для раскрытия полной картины PCNA-зависимых процессов.

Изучение этих процессов затруднено из-за высокой динамики ассоциации и диссоциации PCNA с другими белками. Однако выяснение механизмов этого динамического взаимодействия является чрезвычайно важным для объяснения регуляции разнообразных клеточных функций.

ВЫВОДЫ 1) Показана многоплановая роль PCNA, как одного из ключевых белков интерактомики.

Имеется несколько модулей, таких как репликация хроматина и репарация ДНК, где PCNA достоверно является координирующим хабом. Интригующим выглядит участие PCNA в канцерогенезе и гликолизе.

2) Впервые показано существование многочисленных изоформ PCNA, которые представлены на 2DE в виде набора пятен различной интенсивности (нанопротеома). Основная (мажорная) форма PCNA млекопитающих располагается на 2DE-карте в точке, соответствующей теоретическим физико-химическим параметрам PCNA, и не модифицирована, а наличие множества минорных, модифицированных, форм PCNA указывает на то, что модификации PCNA являются очень динамичными и короткоживущими образованиями, и/или очень малая часть PCNA вовлечена в процессы, где необходимы данные модификации PCNA 3) Определены некоторые модификации PCNA и их функциональная роль. Достоверно подтверждено убиквитинирование и ацетилирование PCNA. Показано отсутствие фосфорилирования PCNA in vivo. Ацетилирование PCNA связано с репликацией ДНК и стабилизацией комплексов PCNA с другими белками, а неспецифическое убиквитинирование связано с метаболизмом (утилизацией) PCNA.

4) Проанализирован аспект, касающийся PCNA, как онкогена и маркера пролиферации.

Показано, что в раковых клетках значительно повышен общий уровень PCNA без появления каких-либо его дополнительных изоформ этого белка. Причем это повышение связано не с _ усилением пролиферации, а с иными причинами, скорее всего метаболизмом, в частности с активизацией гликолиза.

5) Показано взаимодействие PCNA с множеством белков, часть из которых участвует в процессах, происходящих за пределами хроматина и ядра, в цитоплазме. Среди этих белков большую группу составляют ферменты гликолиза. Кроме того, многие из этих белков связаны с канцерогенезом.

6) Показано присутствие PCNA не только в ядре, но и в цитоплазме, причем это присутствие может быть весьма существенным. Получены данные, указывающие на то, что PCNA играет стимулирующую роль в гликолизе.

7) Показано, что полная четвертичная структура PCNA имеет вид двойного кольца, в котором кольца (тримеры) взаимодействуют обратными сторонами. Таким образом, лицевые стороны остаются открытыми для взаимодействия с другими белками. Такая структура PCNA очень динамична и может быть нарушена под воздействием различных факторов, используемых при выделении этого белка.

8) Предложена структурная модель, в которой PCNA играет роль хаб-белка с широкими функциями.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Naryzhny S. N., Lee H. Proliferating cell nuclear antigen in the cytoplasm interacts with components of glycolysis and cancer // FEBS Lett. 2010. V.584. No.20. P.4292-8.

2. Richard C., Lanner C., Naryzhny S.N., Sherman L., Lee H., Lambert P., Zehbe I. The immortalizing and transforming ability of two common human papillomavirus 16 E6 variants with different prevalences in cervical cancer // Oncogene. 2010. V.29. P.3435-3445.

3. Naryzhny S. N. Blue Dry Western: simple, economic, informative, and fast way of immunodetection // Anal. Biochem. 2009. V.392. No.1. P.90-5.

4. Naryzhny S. N. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA): a proteomics view (review) // Cell. Mol.

Life Sci. 2008. V.65. No.23. P.3789-808.

5. Naryzhny S. N., Lee H. Characterization of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) isoforms in normal and cancer cells: There is no cancer-associated form of PCNA // FEBS Lett. 2007. V.581. No.25.

P.4917-20.

6. Naryzhny S. N., DeSouza L.V., Siu K.W.M., Lee H. Characterization of the human proliferating nuclear antigen physico-chemical properties: aspects of double trimer stability // Biochemistry and Cell Biology. 2006. V.84. No.5. P.669-676.

7. Lee H, Naryzhny S. N. Coordination of multiple cellular functions by PCNA: Implication of the PCNA double trimer model // Proliferating cell nuclear antigen (PCNA): Research Signpost, Kerala, India, 2006.

P.163-180.

8. Naryzhny S. N., Zhao H., Lee H. Human proliferating cell nuclear antigen (PCNA) may function as a double- homotrimer complex in the mammalian cell // J. Biol. Chem. 2005. V.280. No.14. P. 13888 13894.

9. Naryzhny S. N., Lee H. The post-translational modifications of proliferating cell nuclear antigen (PCNA): acetylation, not phosphorylation, plays an important role in the regulation of its function // J.

Biol. Chem. 2004. V.279. No.19. P.20194-20199.

10. Naryzhny S. N., Lee H. Observation of multiple isoforms and specific proteolysis patterns of PCNA in the context of cell-cycle compartments and sample preparations // Proteomics. 2003. V.3. P.930-936.

11. Naryzhny S. N., Lee H. Protein profiles of the Chinese hamster ovary cells in the resting and proliferating stages // Electrophoresis. 2001. V.22. P.1764-1775.

12. Naryzhny S.N., Levina V.V., Varfolomeeva E.Y., Drobchenko E.A., Filatov M.V. Active dissociation of the fluorescent dye Hoechst 33342 from DNA in a living cell: Who could do it? // Electrophoresis.

1999. V.20. P.1033-1038.

13. Naryzhny S.N. "Active" two-dimensional electrophoresis of rat liver DNA-polymerase alpha // Electrophoresis. 1997. V.18. P.553-556.

14. Нарыжный С.Н. Выделение каталитически активной субъединицы протеинкиназы из комплексной формы ДНК-полимеразы альфа печени крысы методом электрофракционирования в денатурирующих условиях // Мол.Биол. 1996. Т.30. № 6(2). С.1403-1408.

14а. Naryzhny S.N. Purification of protein kinase catalytic subunit from the complex form of rat liver DNA polymerase alpha by denaturing electrofractionation // Mol. Biol. 1996. V.30. No.6(2). P.845-849.

15. Naryzhny S.N. Upside-down stopped flow electrofractionation of complex protein mixtures // Anal.

Biochem. 1996. V.238. P.50-53.

16. Шевелев И.В., Нарыжный С.Н., Крутяков В.М. Выделение протеинфосфокиназы из комплексной формы ДНК-полимеразы альфа печени крысы // Мол.Биол. 1993. Т.27. №3. С.531 537.

16a. Shevelev I.V., Naryzhny S.N., Krutyakov V.M. Isolation of a proteinphosphokinase from the complex form of rat liver DNA polymerase alpha // Mol. Biol. 1993. V.27. No.3. P.531-537.

17. Нарыжный С.Н. Обнаружение ДНК-связывающих белков в полиакриламидном геле после денатурирующего электрофореза // Мол.Биол. 1992. Т.26. №2. С.307-314.

17а. Naryzhny S.N. Detection of DNA-binding proteins in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis // Mol.Biol. 1992. V.26. No.2. P.307-314.

18. Нарыжный С.Н., Крутяков В.М. Анализ белков нормальной и регенерирующей печени крысы методом двумерного электрофореза // Биохимия. 1989. Т.54. №.12. С.2030-2036.

18a. Naryzhny S.N., Krutyakov V.M. The analysis of normal and regenerating rat liver proteins by two dimensional gel electrophoresis // Biochemistry. 1989. V.54. No.12. P.2030-2036.

19. Нарыжный С.Н. К вопросу об онкомаркерах: о чем нам может рассказать PCNA? // Материалы Всероссийской научной конференции “Медико-генетические проблемы онкологических заболеваний”. 2010. Стерлитамак. Креативная Хирургия и Онкология. 2010. №.4 (Приложение).

C.43.

20. Naryzhny S. N., Lee H. Role of PCNA Interactions in cancer: proteomics view // Materials of the HUPO 8th Annual World Congress. 2009. Toronto, Canada. Clinical Proteomics. 2009. V.5. S1. P.72.

21. Naryzhny S. N., Lee H. Proteomics of PCNA: cell transformation is accompanied by up-regulation of PCNA without post-translational modifications // Materials of the HUPO 7th Annual World Congress.

2008. Amsterdam, NL. P.85.

22. Naryzhny S. N., Lee H. Cell transformation is accompanied by up-regulated level of PCNA without post-translational modifications // Materials of CPI (Canadian Proteomic Initiative) Conference. 2007.

Ottawa, Canada. P.56.

23. Naryzhny S.N. Coordination of multiple cellular functions by proliferating cell nuclear antigen (PCNA): Structure-functional aspect // Бреслеровские чтения II. Молекулярная генетика биофизика и медицина сегодня. С.-Петербург. 2007. С.1-13.

24. Naryzhny S.N., Lee H. The high level of PCNA may result in genetic instability // Materials of the HUPO 5th Annual World Congress. 2006. Long Beach, USA. Molecular & Celular Proteomics. 2006.

V.5. No.10. S.76.

25. Naryzhny S.N., Lee H. Analysis of PCNA Structure and functions by proteomics approach // Materials of the CPS (Canadian Proteomic Society) Conference. Ottawa, Canada. 2005. P.44.

26. Naryzhny S.N., Zhao H., Lee H “The Lord of the Rings: PCNA can coordinate multiple cellular functions due to symmetrical double ring structure // Materials of the CPI (Canadian Proteomic Initiative) Conference. Toronto, Canada. 2005. P.65.

27. Naryzhny S.N., Lee H. Human proliferating cell nuclear antigen (PCNA) may function as a double homotrimer complex in the mammalian cell // Materials of the HUPO 4th Annual World Congress. Munich, Germany. Molecular & Cellular Proteomics. 2005. V.4. No.8. S.50.

28. Naryzhny S.N., Zhao H., Lee H. Mammalian proliferating cell nuclear antigen (PCNA) has a double homotrimer structure. Can it be molecular Janus? // Materials of the CPS (Canadian Proteomic Society) Сonference. London, Canada. 2004. P.55.

29. Naryzhny S.N., Lee H. Post-translational modifications of proliferating cell nuclear antigen (PCNA):

Acetylation, not phosphorylation, plays an important role in the regulation of PCNA function // Materials of the CPI (Canadian Proteomic Initiative) Conference. Montreal, Canada. 2004. P.61.

30. Naryzhny S.N., Lee H. Heterogeneity (micro-proteome) of proliferating cell nuclear antigen _ where is a bottom? // Materials of the CPI (Canadian Proteomic Initiative) Conference. Vancouver, Canada.

2003. P.18.

31. Naryzhny S.N and Lee H. PCNA Turnover in Cell Cycle and Involvement in DNA Repair is Linked to Modification by Ubiquitin // Materials of the HUPO 2nd Annual & IUBMB XIX World Congress.

Montreal, Canada. Molecular & Cellular Proteomics. 2003. V.2. No9. P.746.

32. Naryzhny S.N., Lee H. About multiple forms of PCNA, or proteomics (microproteomics) approach to PCNA heterogeneity // Materials of the -5th Siena 2-D Electrophoresis Meeting, (from Genome to ProteomeSiena, Italy. 2002. P.281.

33. Naryzhny S.N., Lee H. Protein profiles of the Chinese hamster ovary cells in the resting and proliferating stages // Materials of the 4th Siena 2-D Electrophoresis Meeting, (from Genome to Proteome). Siena, Italy. 2000. P.402.

34. Naryzhny S.N., Becker E.G., Sinitsyn A.P. Detection and study of cellulases and other proteins from Chaetomium cellulolyticum: 2D-electrophoresis maps of secreted proteins from different fungal strains // Materials of the International Conference "Biocatalysis-98, Fundamentals and Applications". Pushchino, Russia. 1998. P.47.

35. Нарыжный С.Н. Прибор для препаративного электрофракционирования ДНК и белков:

cвидетельство №4533, Российская Федерация, МПК C12P19/00. №95111359, заявл. 03.07.1995, опубл. 16.07.1997, Бюл. №7.

36. Нарыжный С.Н.;

Метод препаративного электрофракционирования ДНК и белков: патент №2104082, Российская Федерация, МПК B01D57/02, G01N27/28. №95111365, заявл. 03.07.1995, опубл. 10.02.1998, Бюл. №4.

37. Naryzhny S.N. Discrete preparative electrofractionation of complex protein mixture // PNPI Research Report 1994-1995. Gatchina. 1996. P.215-217.

38. Naryzhny S.N., Levina V.V., Varfolomeeva E.Y., Drobchenko E.A., Filatov M.V. Active dissociation of the fluorescent dye Hoechst 33342 from DNA in a living cell: Who could do it? // Materials of the 3th Siena 2-D Electrophoresis Meeting, (from Genome to Proteome). Siena, Italy. 1998. P.259.

39. Naryzhny S.N. "Active" two-dimensional electrophoresis of rat liver DNA-polymerase alpha // Materials of the 2th Siena 2-D Electrophoresis Meeting, (from Genome to Proteome). Siena, Italy. 1996.

P.116.



Pages:     | 1 ||
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.