авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Характеристика микрофлоры верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях

На правах рукописи

Лискова Елена Викторовна ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОФЛОРЫ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ ПРИ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ 03.02.03 – «Микробиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург – 2012 2

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Минздрава России и в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Усвяцов Борис Яковлевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО Оренбургская государственная медицинская академия Минздрава России Челпаченко Ольга Ефимовна доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Минздрава России Туйгунов Марсель Маратович

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО Челябинский государственный медицинский университет Минздрава России

Защита состоится « 20 » декабря 2012 г. в 11- 30 на заседании диссертационного совета Д 208.066.03 в Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, зал заседаний диссертационного совета (конференц-зал аудитория 205).

Тел.: (3532)40-35-62;

факс (3532)77-24-59;

e-mail: orgma_ds1@esoo.ru;

официальный сайт: http:orgma.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА Автореферат разослан «_» 2012г., автореферат и текст объявления размещен на сайте ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Грипп и другие острые респираторные заболевания остаются до настоящего времени неуправляемыми инфекциями, наносящими существенный ущерб здоровью населения и экономике стран во всем мире (Дерягин Ю.П., 2005). Массовые поражения людей, инициированные вирусами гриппа и вирусами иных таксономических групп, с сезонной периодичностью продолжают отмечаться во всех уголках планеты и практически во всех странах мира (Деева Э.Г., 2008). Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) представляют одну из медицинских проблем современной науки и практической медицины. Способы борьбы с ними не достигли высоких результатов (Воробьев К.В., 2002). По данным ВОЗ, каждый взрослый человек 1-2 раза в год переносит грипп, парагрипп или аденовирусную инфекцию.

Среди всех инфекционных болезней грипп и другие острые респираторные вирусные инфекции составляют 90-95% (Покровский В.И. и соавт., 1986).

Смертность от ОРВИ и их осложнений по данным ВОЗ 4,5 млн. человек в год (Гендон Ю.З., 2010). Бактериальные осложнения при острых респираторных вирусных инфекциях вызываются условно-патогенной микрофлорой (Кондратенко Г.П., 1989).

Работы, посвященные изучению количественных и качественных изменений микрофлоры верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях, немногочисленны. Изменение микросимбиоценоза, биологических свойств микросимбионтов слизистой верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях и возможных путях их коррекции изучено недостаточно. Имеются работы с использованием иммуномодуляторов, которые влияют на микрофлору верхних дыхательных путей (Учайкин Ф.Ф., 2001). Иммуномодуляторы обладают двояким эффектом, с одной стороны, иммуномодулирующим, а с другой, изменяют факторы патогенности и персистенции, способствуя элиминации условно-патогенных микроорганизмов (Чайникова И.Н. и соавт., 2006, О.В.

Бухарин,2012). В литературе имеются единичные работы по практическому применению препарата ИРС 19 («Эбботт Хелскеа САС», Франция) для профилактики ОРВИ. Изменение микросимбиоценоза, биологических свойств микросимбионтов верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях и возможных путях коррекции для улучшения результатов лечения остаются актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования Цель исследования – определение особенностей изменений микрофлоры слизистой оболочки носа и миндалин при острых респираторных вирусных инфекциях для прогнозирования течения заболевания и возможности его коррекции.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Определить количественные и качественные изменения микрофлоры носа и миндалин человека при острых респираторных вирусных инфекциях (при гриппе и парагриппе).

Выявить микробиологические показатели, значимые для 2.

прогнозирования бактериальных осложнений острых респираторных вирусных инфекций (пневмонии, бронхиты, синуситы).

3. Изучить действие препарата ИРС 19 на микросимбиоценоз верхних дыхательных путей человека для обоснования его профилактического применения при ОРВИ.

Новизна исследования Определены изменения условно-патогенной микрофлоры верхних отделов дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях.

У больных ОРВИ отмечено снижение численности видов микросимбионтов верхних отделов дыхательных путей. Микрофлора носа и миндалин больных ОРВИ характеризовалась, по сравнению со здоровыми, большей частотой встречаемости факторов патогенности, персистенции и антибиотико резистентности. Микроорганизмы, выделенные от этих больных с осложнениями, по сравнению с больными без осложнений, характеризовались большей частотой встречаемости факторов патогенности и персистенции.

Более разнообразные по составу ассоциации микроорганизмов встречались у здоровых и при парагриппе в сравнении с гриппом. У здоровых преобладали четырех- и пятикомпонентные ассоциации микроорганизмов, при парагриппе чаще встречались двух- и трехкомпонентные ассоциации, при гриппе микроорганизмы изолировались как правило в монокультуре, преобладали двухкомпонентные ассоциации.

Факторы патогенности и персистенции микрофлоры при парагриппе встречались реже, чем при гриппе. При парагриппе чаще выделялись ассоциации микроорганизмов, нежели при гриппе.

Анализ результатов исследования микросимбиоценоза верхних дыхательных путей у пациентов с ОРВИ показал, что наличие осложнений, преимущественно связано с увеличением частоты появления бактерий видов S. aureus и K. pneumoniaе и изменением их биологических свойств.

Использование пакета программ, включающих корреляционный, факторный и дискриминантный анализ позволил на основе выявленных информативных показателей микрофлоры у больных с осложнениями острых респираторных вирусных инфекций выделить три наиболее значимых фактора: «фактор антибиотикорезистентности» (32%), «фактор патогенности бактерий» (17%) и «фактор физиологических функций микроорганизмов» (9%). Суммарный вклад этих факторов составил 58%. На основании выделенных факторов построена модель прогнозирования бактериальных осложнений у пациентов с острыми респираторными вирусными инфекциями, показавшая эффективность в 94% случаев.

При изучении влияния препарата ИРС 19 на биологические свойства микроорганизмов, изолированных со слизистой оболочки больных ОРВИ, было установлено, что препарат подавлял персистентный потенциал K. pneumoniae и S. aureus (антилизоцимную активность и биопленко образование), а также снижал ростовые характеристики микроорганизмов.

Практическое использование препарата ИРС 19 при ОРВИ сопровождалось элиминацией K. pneumoniae и S. aureus и меньшим процентом развившихся осложнений.

Практическая значимость Полученные в работе данные расширяют представления о патогенетической роли представителей микрофлоры слизистой оболочки верхних дыхательных путей в норме и при острых респираторных вирусных инфекциях. Предложенный метод прогнозирования осложнений при ОРВИ с учетом состояния микрофлоры верхних дыхательных путей может быть рекомендован к применению в условиях бактериологической лаборатории.

ИРС 19 является препаратом выбора при лечении ОРВИ и пригоден для профилактики бактериальных осложнений (пневмоний, бронхитов, синуситов).

Материалы диссертации используются в учебном процессе со студентами на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии (Акт внедрения от 24 мая 2012 г.) Положения, выносимые на защиту:

Развитие острых респираторных вирусных инфекций 1.

сопровождается снижением видового разнообразия микрофлоры верхних дыхательных путей и увеличением патогенного и персистентного потенциала микросимбионтов.

На основе информативных параметров базовых физиологических 2.

характеристик микрофлоры пациентов перенесших ОРВИ, построена диагно стическая модель прогнозирования бактериальных осложнений.

Защитное действие иммуномодулятора ИРС19 при ОРВИ 3.

определяется подавлением препаратом ростовых характеристик и персистентного потенциала условно-патогенной микрофлоры больных, способствуя е элиминации из организма и профилактике осложнений.

Апробация работы Материалы работы были доложены и обсуждены на III Ежегодном Всероссийском конгрессе по инфекционным болезням (Москва 28-30 марта 2011 г.), на конференции «Актуальные проблемы экологии, гигиены и эпидемиологии» (г. Оренбург 16-30 апреля 2011 года).

Публикации По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе публикации в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертационной работы Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследования, три главы собственных исследований, заключение, выводы.

Указатель литературы содержит 119 отечественных и 63 зарубежных источников литературы. Текст иллюстрирован 10 таблицами и 19 рисунками.

Связь работы с научными программами Диссертационная работа является составной частью комплексной темы кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии «Микробные биоценозы тела человека при различных патологических состояниях».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования Материалом для исследования послужили 529 штаммов микроорганизмов, изолированных со слизистых оболочек носа (287 штаммов) и миндалин (242 штамма) клинически здоровых и больных острыми респираторными вирусными инфекциями. Группу здоровых составили человек в возрасте 19-25 лет, группу больных – 98 человек с гриппом и человек с парагриппом в возрасте 19-60 лет. С целью изучения биоценозов верхних дыхательных путей забор материала проводился на первые сутки госпитализации до начала терапии и повторялся на 5-7 сутки. Из обследования исключены лица с первичными и вторичными иммунодефицитами, хроническими заболеваниями лор-органов и бронхолегочной системы. Всем больным проводилось обследование по следующим показателям: общий анализ крови, общий анализ мочи, реакция микропреципитации на сифилис, рентгенологическое исследование органов грудной клетки, электрокардиография, идентификация вируса методом иммунофлюоресценции (люминисцентный микроскоп «Микрос»). Больные получали противовирусную, дезинтоксикационную, десенсибилизирующую, противовоспалительную, симптоматическую терапию, витаминотерапию, 24 пациента получали препарат ИРС 19.

Выделение и идентификацию штаммов микроорганизмов проводили на основании общепринятых методов (Биргер М.О., 1982;

Шапиро А.В., с соавт., 1984). Дальнейшая идентификация до вида проводилась с помощью дифференциально-диагностических тест-систем STAPHYtest, STREPTOtest, ENTEROtest, NEFERMtest (LaChema, Чехия). У выделенных микроорганизмов изучали факторы патогенности: (гемолитическую, лецитовителлазную активности), колонизации (лизоцимную активность) и персистенции (антилизоцимную активность, биопленкообразование) по общепринятым методикам (Биргер М.О., 1982;

Бухарин О.В. с соавт., 1999;

G. O,Tool, 2000).

При изучении влияния ИРС 19 на биологические свойства микроорганизмов использовали штаммы видов K. pneumoniae, S. aureus, изолированные со слизистой верхних дыхательных путей с осложненным течением ОРВИ. В экспериментальных условиях для изучения влияния ИРС («ЭбботтХелскеа САС», Франция) на исследуемые культуры микроорганизмов проводили соинкубирование в стерильном бульоне Luria Bertani (LB-бульон) 0,1 мл микробной взвеси (0,5 McFarland) и препарата в количестве 0,025;

0,05;

0,1;

0,2 мл. Контролем служили посевы, в которые вместо ИРС добавляли соответствующий объем физиологического раствора (0,025;

0,05;

0,1;

0,2 мл). Посевы инкубировали при 37°С в течение 18-24 часов. Рост контролировали турбидиметрически на спектрофотометре Elеx 808 (BioTek, США) при =540 нм через каждые 20 мин. По полученным данным строили зависимости lg(D)= (t). По тангенсу угла наклона определяли удельные скорости роста микроорганизмов, ч-1.

Эксперименты по изучению регулирующего влияния ИРС 19 на гемолитическую, антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов проводили при 1/2 МПК препарата (Кириллов Д.А., 2004).

Для изучения механизма защитного действия ИРС 19 при ОРВИ были сформированы 2 группы пациентов. Первая группа (24 человека) кроме общепринятой терапии получала ИРС 19 в дозе используемой в экспериментах 3 раза в день, на протяжении 5-7 дней и вторая группа (74 человека, группа сравнения) не получавшая данный препарат. Оценка состояния больных проводилась ежедневно. После курса применения препарата проводили повторное микробиологическое исследование слизистой верхних дыхательных путей.

Данные по видовому составу и биологическим свойствам микрофлоры верхних дыхательных путей были подвергнуты статистической обработке в компьютерной оболочке Windows с помощью процессора электронных таблиц Microsoft Office Excel 2003 и программы «Биостат» (Гланц С., 1999) путем подсчета средней арифметической (M) и средней ошибки средней величины (m). Данные по определению регулирующего влияния ИРС 19 на биологические свойства микроорганизмов были подвергнуты статистической обработке непараметрическим методом с применением критерия Манна-Уитни и параметрическим методом с применением t-критерия Стьюдента. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при значении р0,05. Для создания математической модели прогнозирования течения ОРВИ использованы автоматизированные системы программ «Кореляционный анализ», «Факторный анализ» и «Дискриминантный анализ».

Результаты исследования и их обсуждение При анализе бактериологической картины течения острых респираторных вирусных инфекций были описаны изменения видового состава микрофлоры верхних дыхательных путей, а также биологических свойств микросимбионтов у пациентов при гриппе и парагриппе.

Результаты проведнных исследований позволили сопоставить изменения микросимбиоценоза верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях с группой сравнения (здоровыми), сравнить изменения биоценоза носа и миндалин больных гриппом и парагриппом (рис. 1). В микробиоценозе носа представители рода Micrococcus в 1,3% встречались только при парагриппе. Микроорганизмы, относящиеся к роду Klebsiella встречались чаще при гриппе (12,3% против 2,6%, при p‹0,05). Представители рода Corynebacterium встречались в 3,5% только у больных гриппом.

У пациентов при гриппе по сравнению с парагриппом, происходило снижение частоты обнаружения некоторых представителей микрофлоры носа:

S. intermedius (0% против 5,1%), S. epidermidis (0% против 7,7%), S. capitis (0% против 6,3%), Str. salivarius (0% против 5,1%), также полностью отсутствовали такие виды как Str. suis, Str. bovis, A. viridans, A. viridаs.

Видовой состав микрофлоры носа претерпевал изменения в сторону увеличения бактерий вида S. aureus, как при гриппе, так и при парагриппе по сравнению со здоровыми. Str. pyogenes (5,3% против 0%), K. pneumoniaе (7,0% против 0%), K. oxytoca (5,3% против 0%), Micrococcus spp.

Corynebacterium spp.

*,** Klebsiella spp.

Aerococcus spp.

** Enterococcus spp.

** Moraxella spp.

Streptococcus spp.

Staphylococcus spp.

0,0% 10,0% 20,0% 30,0% 40,0% 50,0% 60,0% 70,0% здоровые парагрипп грипп Рисунок 1. Частота выделения из биоценоза носа микроорганизмов у здоровых и при острых респираторных вирусных инфекциях.

*- достоверность отличий при сравнении показателей микробиоценоза носа здоровых и больных, при p‹0,05;

**- достоверность отличий при сравнении показателей микробиоценоза носа больных гриппом и парагриппом, при p‹0, C. xerosis (3,5% против 0%) встречались исключительно при гриппе.

Похожие данные были получены по изменению видового состава микрофлоры миндалин у исследуемых групп пациентов. При парагриппе, по сравнению с гриппом, чаще встречались представители рода Enterococcus (в 11,7%±3,9% случаев против 6,0±2,4%). Род Micrococcus можно было наблюдать исключительно у больных гриппозной инфекцией. Род Klebsiella преобладал при гриппе (14,7% против 4,4% при р‹0,05).

Видовой состав миндалин также претерпевал изменения в сторону увеличения S. aureus, встречающийся при гриппе в 1,5 раза чаще, чем при парагриппе. Str. pyogenes, K. pneumoniaе высевались со слизистой миндалин только при гриппе.

Микросимбиоценоз слизистой носа здорового человека был представлен ассоциацией микроорганизмов в 73,4% случаев (рис. 2). В микросимбиоценозе слизистой носа преобладали четырехкомпонетные ассоциации микроорганизмов (26,7%), в сравнении с двух- (10%), трех-(13,3%), пяти- (16, %) и шестикомпонентными (6,7 %) ассоциациями микросимбионтов.

Характерным сочетанием видов микросимбионтов в микросимбиоценозе было:

«S. hominis + Str. salivarius + S. hyicus + A. viridians», «A. viridians + Str. salivarius + S. intermedius + S. haemolyticus », «Str. mitis + S. haemolyticus + S. saprophyticus + S. epidermidis».

При парагриппе микрофлора носа у больных в среднем в 62,2% была представлена ассоциацией микроорганизмов. При данной патологи преобладали трехкомпонентные консорциумы бактерий (в 35,5% случаев).

Реже обнаруживались двух, четырех- и пятикомпонентные ассоциации микросимбионтов (соответственно в 22,6 %, 12%, и 3,2% случаев). Видовой состав ассоциаций был представлен преимущественно сочетанием: «S. aureus + S. saprophyticus + S. epidermidis», «S. aureus + Str. suis + S. haemolyticus », «S. aureus + S. capitis + Str. bovis», «S. aureus + S. epidermidis + S. capitis», «S. aureus + S. epidermidis + S. capitis », «S. aureus + E. faecium + A. viridans», «S. hominis + S. intermedius + Str. mitis».

Установлено, что в биоценозе носа больного гриппом ассоциации микроорганизмов встречались реже, чем у здоровых лиц и у пациентов с парагриппом (13,3% случаев). Отмечено снижение численности входящих в состав ассоциации микроорганизмов: чаще (10,3%) обнаруживались сочетания двух видов бактерий, тогда как трехкомпонентных ассоциации 100% Частота встречаемости (%) 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% здоровые парагрипп грипп Рисунок 2. Частота выделения со слизистой оболочки носа микроорганизмов состоящих в ассоциации.

микросимбионтов выявлялись не более чем в 3% случаев. Для ассоциаций микросимбионтов было характерно сочетание видов: «S. aureus + Str. mitis», «S.

aureus + S. hominis», «S. aureus + Str. oralis», «K. рneumoniae + Str. mitis».

Микросимбиоценоз миндалин здорового человека был представлен ассоциацией микроорганизмов 60% случаев. Чаще (в 16,7 % случаев) выявлялись пятикомпонентные ассоциации, несколько реже (в 10 - 13,3 % случаев) двух-, трех- и четырехкомпонентные ассоциации микросимбионтов.

Консорциумы микросимбионтов, состоящие из 6 и более видов микросимбионтов присутствовали не более чем в 6,7% случаев. Характерным для микросимбиоценоза миндалин здоровых лиц было сочетание видов бактерий: «S. hyicus + A. viridians + Str. mitis+ S. hominis + S. haemolyticus», «Str. salivarius + S. haemolyticus + S. hominis + S. intermedius + S. hyicus», «Str. salivarius + S. saprophyticus + S. hominis + S. haemolyticus + Str. mitis ».

При парагриппе микросимбиоценоз миндалин в 60% случаев был представлен ассоциацией микроорганизмов. В сравнении с микробиоценозом здоровых лиц у пациентов при парагриппе происходило снижение количества микросимбионтов, входящих в консорциум. Трехчленные ассоциации были выявлены в 48,3 % случаев, тогда как сочетание двух видов микроорганизмов встречались только в 25,5 %. Характерными ассоциациями микросимбионтов миндалин у пациентов при парагриппе были: «S. aureus + S. epidermidis + Str. salivarius», «S. аureus + Str. suis + S. saprophyticus», «S. аureus + S. epidermidis + Str. bovis», «S. аureus + S. capitis + Str. mutans», «S. saprophyticus + Str. salivarius + Str. oralis», «S. intermedius + Str. mitis + Ent. faecium», «S. aureus + E. faecium + Str. mitis».

Микросимбиоценоз миндалин при гриппе в 22,2% случаев был представлен ассоциацией микроорганизмов. В данном случае, как и в микросимбиоценозе слизистой носа у пациентов при гриппе, преобладали двухчленные ассоциации (в 16,6 % случаев), тогда как сочетание трех видов микросимбионтов было выявлено значительно реже (в 2%). Консорциум микроорганизмов у пациентов при гриппе был представлен видами бактерий:

«S. aureus + S. hyicus», «S. aureus + Str. mitis», «K. pneumoniae + S. haemolyticus».

Анализ распространенности биологических свойств микросимбионтов носа и миндалин исследуемых групп показал, что у микроорганизмов, изолированных со слизистой верхних дыхательных путей от больных с острыми респираторными вирусными инфекциями, чаще чем у микросимбионтов выделенных от здоровых, встречались такие биологические свойства, как гемолитическая (60,0±2,4%, против 27,5±3,4%), лецитовителлазная (30,4±2,3%, против 17,0±2,9%), лизоцимная (10,3±3,5%, против 9,4±2,8%) и антилизоцимная активности (70,1±2,3%, против 12,3±3,5%).

При сравнении микрофлоры носа и миндалин, изолированной от больных гриппом и парагриппом большей частотой встречаемости гемолитической, лецитовителлазной и антилизоцимной активностей обладала микрофлора у больных гриппозной инфекцией (рис. 3). При гриппе микроорганизмы рода Staphylococcus, выделенные со слизистой оболочки носа, чаще чем от здоровых, обладали гемолитической активностью (82,4±5,3% против 26,7±6,7% (p‹0,05), лецитовителлазной активностью (47,1±6,9% против 13,3±5,1% (p‹0,05), лизоцимной активностью (23,5±5,9% против 2,2±2,2% (p‹0,05), антилизоцимной активностью (89,1±4,3% против 8,9±4,3% (p‹0,05).

Микроорганизмы рода Streptococcus, выделенные со слизистой носа, при гриппе чаще, чем от здоровых, обладали гемолитической активностью по сравнению с группой сравнения (64,7±9,7% против 24,1±8,5% (p‹0,05), лецитовителлазной активностью (64,7±9,7% против17,2±7,5% (p‹0,05) и антилизоцимной активностью(70,6±9,3% против 6,9±5,1% (p‹0,05).

Аналогичные данные были получены при изучении биологических свойств микрофлоры миндалин обследуемых лиц.

120% Частота встречаемости (%) *;

** 100% *;

** *;

** *;

** * 80% * *;

** 60% * 40% *;

** 20% 0% ГА ЛЕЦ ЛА АЛА ГА ЛЕЦ ЛА АЛА Staphylococcus spp. Streptococcus spp.

Биологические свойства Здоровые Парагрипп Грипп Рисунок 3. Распространенность факторов патогенности микроорганизмов, выделенных со слизистой оболочки носа.

*- достоверность отличий при сравнении показателей микробиоценоза носа здоровых и больных, при p‹0, **- достоверность отличий при сравнении показателей микробиоценоза Микробная флора слизистой оболочки носа и миндалин больных острыми респираторными вирусными инфекциями чаще, по сравнению с микроорганизмами, изолированные от здоровых лиц, характеризовалась резистентностью к пенициллинам, макролидам, цефалоспаринам, фторхинолонам (рис.4). Штаммы микроорганизмов, выделенные от здоровых лиц, чаще характеризовались чувствительностью к вышеперечисленным антибиотикам.

Полученные данные позволили нам проанализировать микрофлору изолированную у больных с осложненным и неосложненным течением острых респираторных вирусных инфекций. Учитывая, что острые респираторные вирусные инфекции открывают ворота для бактериальных осложнений, изучение микробиоценоза верхних дыхательных путей и его регулирование является перспективным направлением в ликвидации этой проблемы. Мы сопоставили течение острых респираторных вирусных инфекций с видом и биологическими свойствами микрофлоры, выделенной непосредственно со слизистой верхних дыхательных путей до начала лечения. Анализ результатов исследования микросимбиоценоза верхних дыхательных путей у пациентов с ОРВИ показал, что наличие осложнений, преимущественно связано с изменением видового состава микросимбионтов, с высокой частотой встречаемости (в 61,5% случаев) бактерий видов S. aureus и K. pneumoniaе. От пациентов, имеющих осложнения, из верхних дыхательных путей были выделены S. aureus в 34,6% случаев, а K. pneumoniae в 26,9%.

100% 90% * 80% 70% 60% 50% * 40% 30% * * 20% * 10% 0% пенициллины аминогликозиды макролиды цефалоспорины карбопенемы фторхинолоны здоровые больные Рисунок 4. Антибиотикорезистентность микроорганизмов носа у здоровых и при острых респираторных вирусных инфекциях * - достоверность отличий, при p‹0, Поскольку изменение биологических свойств микрофлоры верхних дыхательных путей может играть роль в патогенезе заболеваний (Усвяцов Б.Я., 2011), полученные данные о биологических свойствах микроорганизмов были обработаны при помощи программы «Информативность» посредством многомерного критерия Д.А. Родионова, для решения линейных дискриминантных функций. Это позволило создать математическую модель прогнозирования осложнений при острых респираторных вирусных инфекциях по биологическим свойствам микроорганизмов изолированных со слизистой оболочки носа.

Было выделено 13 информативных факторов, процент вклада которых колебался от 0,07% до 32%. Из них наиболее значимыми были три фактора, суммарный вклад которых составлял 58%. фактор характеризовал устойчивость микроорганизмов к цефалоспоринам, макролидам, карбопенемам и фторхинолонам, он получил название – «фактор антибиотикорезистентности» (32%), фактор включал показатели лецитовителлазной, гемолитической и антилизоцимной активности и был определен как «фактор патогенности бактерий» (вклад фактора 17%), фактор отражал значения показателя микробной обсемененности и антилизоцимной активности микросимбионтов – «фактор физиологических функций микроорганизмов» (9%).

В связи с тем, что все изученные показатели вносили определенный вклад в формирование осложнений, мы использовали их в дальнейшем для построения модели, позволяющей прогнозировать осложнения по биологическим свойствам микросимбионтов, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа. Построенная модель выражается уравнением:

Д = х1а1 + х2а2 +... хnаn + С, где Д – искомый вариант развития заболевания;

х - значение показателя;

а - коэффициент показателя;

С - поправочная константа.

Коэффициенты для каждого свойства и поправочные константы рассчитаны на основании машинного анализа динамики их многомерных средних значений применительно к микроорганизмам, выделенным от больных с разным вариантом развития заболевания и приведены в таблице 2. Модуль наибольшей величины из двух полученных соответствовал обозначенному на данной строке прогнозу заболевания. Для иллюстрации работы модели приводим клинический пример.

Пример 1: Больной Х, диагностирован грипп. Проведено бактериологическое исследование состояние микробиоценоза носа. Выделен штамм бактерий, идентифицированный как вид S. aureus, ПМО 3* КОЕ/тамп., ГА 3мм, ЛецА 2мм, АЛА 5мкг, на антибиотикограмме:

эритромицин 10 мм, цефалоспорин 30 мм, меропенем 34 мм, ципрофлоксацин 34 мм.

Применение математической модели показало следующие результаты по модели течения болезни с осложнением:

Д1 = (57,61*30+3,99*10+108,04*34+55,06*34+-514,216)+(365,38*2+ +154,17*3+220,20*5+ -450,049)+(626,52*3+194,16*5+ -3458,55) = =|7647,11| = 7647, По модели течения болезни без осложнения:

Д2 = (314,5*30+-212,87*10+-15,07*34+92,22*34+-3189,2)+(119,92*2+ +13,65*3+-150,17*5+ -2805,01)+(57,03*3+54,40*5+ -2616,96) = =|1291,2| =1291, Таблица 2. Коэффициенты показателей и поправочные константы для построения моделей прогнозирования осложнений при ОРВИ *Поправочные константы;

А- чувствительность к цефалоспоринам;

В чувствительность к макролидам;

С-чувствительность к карбопенемам;

Х чувствительность к фторхинолонам В результате проведенного расчета максимальная величина уравнения установлена в первой строке (Д1), что позволило прогнозировать у пациента развитие бактериального осложнения. На пятые сутки заболевания у больного аускультативно выявлены крепитирующие хрипы и рентгенологически подтвержден диагноз нижнедолевой правосторонней пневмонии.

Пример 2: Больной А, диагностирован грипп. Проведено бактериологическое исследование состояния микробиоценоза носа. Выделен штамм бактерий, идентифицированный как вид S. aureus, ПМО 3* КОЕ/тамп., ГА 0мм, ЛецА 0мм, АЛА 0мкг, на антибиотикограмме:

эритромицин 10 мм, цефалоспорин 12 мм, меропенем 10 мм, ципрофлоксацин 17 мм.

Применение математической модели показало следующие результаты по модели течения болезни с осложнением:

Д1 = (57,61*12+3,99*10+108,1*10+55,06*17+-514,216)+(365,38*0+ +154,17*0+220,20*0+ -450,049)+(194,16*0+626,52*2+ -3458,55) = = |-422,55| = 422, По модели течения болезни без осложнения:

Д2 = (314,5*12+-212,87*10+-15,07*10+92,22*17+-3189,2)+(119,92*0+ +13,65*0+-150,17*0+ -2805,01)+(57,03*0+54,40*2+ -2616,96) = = |-5321,03|= 5321, В результате проведенного расчета максимальная величина уравнения установлена на второй строке (Д2), что позволило исключить у пациента риск развития бактериальных осложнений. При динамическом наблюдении отмечалась положительная динамика, осложнений не зафиксировано. На сутки больной выписан из стационара.

Математическая модель апробирована на 33 пациентах с диагнозом грипп. У 18 больных при поступлении математический расчет по формуле показал риск развития осложнений (бронхита, синусита, пневмонии).

Динамическое наблюдение с применением лабораторных и инструментальных методов исследования выявило осложненное течение гриппа у 17 больных.

Таким образом, при проверке математической модели она оказалась верна у 94±5,5 % пациентов.

На заключительном этапе работы был изучен ИРС 19 (Эбботт Хелскеа САС, Франция) - иммуностимулирующий препарат полученный на основе бактериальных лизатов и представляющий собой респираторный спрей содержащий микробную взвесь антигенов. Известно, что ИРС 19 способен оказывать влияние на специфический и неспецифический иммунитет человека, при местной иммунизации сорбированные антигены препарата стимулируют в собственной пластинке слизистой оболочке выработку антител, секреторного усиливают фагоцитоз, осуществляемый альвеолярными IgA (sIgA), макрофагами, способствует увеличению содержания лизоцима, комплемента, опсонинов, пропердина и эндогенного интерферона. (Волгин Р.В., 2005). В литературе не отражено влияние препарата ИРС 19 на биологические свойства микроорганизмов, изолированных из микробиоценоза верхних дыхательных путей. В связи с этим нами было изучено воздействие ИРС 19 на ростовые, вирулентные (гемолитическая активность) и персистентные свойства (антилизоцимную активность и биопленкообразование) микроорганизмов, изолированных со слизистой верхних дыхательных путей при ОРВИ.

Анализ полученных данных позволил установить, что результат действия препарата ИРС 19 зависел от его дозы и вида бактерий. Приведенные результаты эксперимента по влиянию дозы препарата на удельную скорость роста K. pneumoniae показаны на рисунке 4, из которого видно, что при дозе 0,025 мл препарата численность исследуемых микроорганизмов находилась в пределах физиологических колебаний. Выраженный подавляющий эффект ИРС19 отмечался при культивировании микроорганизмов с 0,1 мл препарата, отмечено угнетение средней скорости роста бактерий до 0,1, ч-1, в сравнении с контролем 0,15, ч-1. При этом наблюдался дозозависимый эффект препарата - с увеличением дозы отмечено усиление ингибирующего эффекта ИРС на ростовые свойства микроорганизмов. В дозе 0,2 мл прирост микроорганизмов составил 0, ч-1.,таким образом минимальная подавляющая концентрация составила 0,2 мл для K. pneumoniae.

Аналогичные данные были получены при исследовании влияния ИРС на ростовые свойства S. aureus.

При изучении влияния препарата на факторы вирулентности и персистенции исследуемых микроорганизмов установлено, что ИРС 19 не изменял гемолитическую активность (ГА) культур K. pneumoniae и S. aureus.

Средние значения ГА составляли у K. pneumoniae 40,6±0,4 %, а после инкубации с ИРС 19 41,8±0,4 %, средние значения ГА у S. aureus была 39,3±0,4 %, после соинкубации с препаратом 38,3±0,3 %.

Рисунок 4 - Влияние препарата ИРС 19 на рост K. pneumoniae При изучении влияния препарата ИРС 19 на биопленкообразование (БПО) микроорганизмов было установлено, что препарат снижал БПО у K. pneumoniaе, в среднем значения БПО клебсиелл составили 0,75±0,02 ЕД, а после соинкубирования с препаратом - 0,38±0,03 ЕД. Аналогичные результаты получены при воздействии препарата на БПО S. aureus, в среднем БПО стафилококков снижалось с 1,49±0,03ЕД до 1,22±0,05ЕД (р0,05).

Сходная направленность воздействия была выявлена при исследовании антилизоцимной активности бактерий. Средние значения АЛА клебсиелл составляли 0,7±0,02 мкг\мл*OD, а после соинкубирования с препаратом 0,3±0,03 мкг\мл*OD. У культур S. aureus способность ингибировать лизоцим была в среднем 0,7±0,06 мкг\мл*OD,а после соинкубирования с препаратом 0,5±0,03 мкг\мл*OD.

Для сравнения полученных результатов кроме основной группы ( человека) мы наблюдали группу сравнения (74 человека) с аналогичной патологией, но без использования ИРС 19. При повторном микробиологическом исследовании пациентов получавших препарат на 5 - сутки S. aureus и K. pneumoniae не выделялись (против 20,8±4,2% группы сравнения), развитие осложнений отмечено у 4,2±4,1% (против 20,8±5,2% группы сравнения). Длительность лечения составила 4,1±0,04 койко-дня (против 5,1±0,04 койко-дня в группе пациентов не получавших ИРС19).

Таким образом, отмечена элиминация S. aureus и K. pneumoniae при повторном исследовании микрофлоры верхних дыхательных путей, снижение частоты осложнений со стороны дыхательной системы.

Подводя итог, проведенным исследованиям следует выделить три основных момента:

При острых респираторных вирусных инфекциях микросимбиоценоз верхних отделов дыхательных путей претерпевал изменения в сторону снижения численности микроорганизмов, увеличения количества штаммов характеризующихся наличием факторов вирулентности, персистенции и антибиотикорезистентности;

Анализ результатов исследования микросимбиоценоза больных ОРВИ позволил выявить информативные факторы определяющие развитие осложнений, на основе которых была построена математическая модель прогнозирования осложнений;

Применение препарата ИРС19, снижающего частоту развития осложнений у пациентов с ОРВИ за счет элиминации патогенов из биотопа, обусловлено подавлением ростовых характеристик, антилизоцимной активности, биопленкообразования штаммов.

ВЫВОДЫ:

1. Микросимбиоценоз носа и миндалин при острых респираторных вирусных инфекциях характеризовался снижением численности видов микросимбионтов и увеличением выделения микроорганизмов S. aureus, K. pneumoniae обладающих высоким патогенно-персистентным патенциалом при осложнениях.

2. У здоровых лиц в микробиоценозе преобладали четырех- и пятикомпонентные ассоциации, при парагриппе двух- и трехкомпонентные ассоциации, а при гриппе доминировали микроорганизмы изолированные в монокультуре и двухкомпонентные ассоциациии.

3. Применение «факторного анализа» на основе информативных показателей биологических характеристик бактерий микрофлоры, провоцирующей осложненное течение ОРВИ у пациентов, позволило выявить три ведущих фактора – «антибиотикорезистентности» (32%), «патогенности бактерий» (17%) и «физиологических функций микроорганизмов» (9%) вклад которых составил 58% 4. Использование автоматизированной системы программ «Дискриминантный анализ» позволило разработать диагностическую модель прогнозирования бактериальных осложнений при ОРВИ, имеющего эффективность 94%.

Препарат ИРС 19 подавлял персистентный потенциал K. pneumoniae и 5.

S. aureus, угнетая их рост, антилизоцимную активность и биоппленко образование. Использование препарата ИРС 19 в лечении острых респираторных вирусных инфекций сопровождалось элиминацией K. pneumoniae и S. aureus и снижением количества постгриппозных осложнений.

Список публикаций:

1. Лискова Е.В. Клиника гриппа в современный период / Е.В. Лискова // Медицинский альманах, 2011. №4. С.110- 2. Микрофлора дыхательных путей при гриппе, острых респираторных заболеваниях и их осложнениях / А.С. Паньков, О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Е.В. Лискова // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2011. №2. С.42-45.

3. Лискова Е.В. Эффективность иммуномодулирующей терапии в лечении и профилактике осложнений при ОРВИ / Е.В. Лискова // Вестнок Оренбургского Государственного Университета, 2011.№16(135). С. 297-299.

4. Прогнозирование осложнений при острых респираторных вирусных ин фекциях и их коррекция/ Е.В. Лискова, Н.Б. Перунова, Е.В. Иванова, В.А.

Леонов // Жизнь без опасностей. Здоровье. Профилактика. Долголетие, 2012.

№4. С.62-67.

5. Лискова Е.В. Микрофлора верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях/ Е.В. Лискова // Информационный архив, 2009. Т3. №4. С.110-111.

6. Лискова Е.В. // Анализ биологических свойств микроорганизмов верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях / Е.В.

Лискова, В.Г. Мещеряков // Сборник тезисов по Материалам III Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. Москва 28-30 марта, 2011. С.212.

Список сокращений:

АЛА – антилизоцимная активность ГА – гемолитическая активность КОЕ – колониеобразующие единицы ЛА – лизоцимная активность ЛецА – лецитовителлазная активность ПМО – показатель микробной обсемененности ОРВИ – острая респираторная вирусная инфекция ЛИСКОВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА Характеристика микрофлоры верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows Подписано в печать «_» 2012 г.

Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная.

Бумага офсетная. Гарнитура Times.

Тираж 100 экз.



 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.