авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 |

Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Михайлова Елена Алексеевна Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин 03.02.03 – микробиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

Москва – 2013

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Миронов Андрей Юрьевич доктор медицинских наук, профессор Харсеева Галина Георгиевна

Официальные оппоненты:

Червинец Вячеслав Михайлович Доктор медицинских наук, профессор ВБОУ ВПО «Тверская медицинская академия», зав. кафедрой микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии Митрохин Сергей Дмитриевич Доктор медицинских наук, профессор ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора, главный научный сотрудник лаборатории биологии бифидобактерий Игнатов Сергей Георгиевич Доктор биологических наук, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, зав. лабораторией нанобиотехнологии отдела иммунобиохимии патогенных микроорганизмов

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России

Защита состоится «20» сентября 2013 г. в 13 ч. 00 мин. на заседании диссертационного совета Д 350.002.01 при ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск, конференс-зал зд. № 1), тел.: 8(4967)36-00-03, факс: 8(4967) 36-00- e-mail: info@obolensk.org

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (142279, Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск, зд. № 32).

Автореферат разослан «» августа 2013 г., автореферат и текст объявления размещены на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук Надежда Константиновна Фурсова

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы По социологическим прогнозам в предстоящие 50 лет население России может сократиться вдвое (Материалы заседания Экспертного совета Совета Федерации «Мужское здоровье как демографический фактор», 8 июня 2007 г.).

Воспалительные заболевания урогенитального тракта микробной этиологии являются распространёнными у мужчин (Семёнов А. В., 2010). Это в полной мере относится к бактериальным уретритам и простатитам (Божедомов В. А. с соавт., 2004;

Diemer T et al., 2008;

Wagenlehner F. M. et al., 2008). Этиологическими агентами бактериальных заболеваний урогенитального тракта являются как специфические возбудители, например N. gonorrhoeae, так и условно-патогенные микроорганизмы урогенитального биотопа, вызывающие неспецифические воспаления (Кузьмин М. Д., 2004;

Черкасов С. В, 2011).

В настоящее время неспецифические уретриты и простатиты занимают от до 50% в структуре всех инфекционных воспалительных процессов мочеполовой системы у мужчин (Денисов И. Н. с соавт., 2001;

Долгушин И. И., Гизингер О.А., 2011;

Horner P. J., 2001;

Schaeffer A. J. еt al., 2003). Эти заболевания имеют тенденцию к хроническому рецидивирующему течению и приводят к болевому синдрому, дизурии, сексуальным расстройствам и нарушению репродуктивной функции, что, ввиду повышающейся мужской смертности в репродуктивном возрасте, ведёт к углублению демографических проблем (Белов В. Б. с соавт., 2008, Рожавский Л. А., 2008;

Lutz W., 2006).

Отмечающаяся в настоящее время тенденция развития длительно текущих, малосимптомных форм урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин, в большой степени зависит от свойств микроорганизмов, являющихся этиологическими агентами заболевания (Батыршина С. В., Симбирцев А. С., Юнусова Е. И., 2006). Бактерии располагают целым арсеналом средств для сохранения в организме хозяина, в том числе, группой факторов, призванных нейтрализовать эффекторы врожденного и адаптивного иммунного ответа.

Большинство видов микроорганизмов, в том числе условно-патогенных, поставлены перед необходимостью противостоять системе аинтиинфекционной резистентности хозяина и потому обладают секретируемыми факторами нейтрализации механизмов гуморального и клеточного иммунитета.

Развитие инфекционного процесса определяется иммунореактивностью организма.

При хроническом осложненном течении воспалительного процесса нередко регистрируются значимые изменения в гуморальном и клеточном звеньях иммунитета (Зиганшин О. В., Долгушин И. И., 2007;

Семёнов А. В., 2010;

Гизингер О.А. с соавт., 2012).

Микроорганизмы при урогенитальных инфекциях повреждают эпителиальные клетки, при разрушении которых происходит выброс цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, макрофагального колониестимулирующего фактора, фактора некроза опухоли и др.), взаимодействующих с иммуннокомпетентными клетками.

Характер иммунного ответа человека на микроорганизм определяет количество и спектр продуцируемых цитокинов (Александрова Ю. Н., 2006;

Железникова Г. Ф., 2009).

Компрометированные механизмы антибактериального иммунитета приводят к распространению и хронизации воспалительного процесса, что, в свою очередь, ведёт к формированию осложнений, в том числе - бесплодия.

Иммуноопосредованный характер мужского бесплодия при бактериальных уретритах и простатитах является дискуссионным вопросом. Не разработана оптимальная схема выявления факторов риска формирования инфертильности у мужчин с урогенитальными заболеваниями. Не имеется комплексного анализа механизмов сохранения и регулировки иммунного гомеостаза у больных с воспалительными болезнями уретры и простаты. Дисбиотические и иммунные изменения урогенитального биотопа могут являться важным ориентиром в прогнозе течения, полноценности излеченности и реабилитации, а также могут быть основанием для существенной коррекции лечения (Кошкин С. В., 2007;

Смирнова О. В. 2007;

Железникова Г. Ф., 2009). Несмотря на описанные в литературе многочисленные исследования (Кузьмин М.Д., Михайлова Е.А., 1991;

Бухарин О.В. с соавт., 1998;

Воронина Л.Г., 1998;

Сингур О.А., 2003;

Штиль О.О., 2010), посвященные изучению механизмов формирования урогенитальных инфекций, полученные сведения носят дискретный характер, так как касаются либо одной нозоформы, либо только одной из составляющих инфекционного процесса и, поэтому, не дают интегрального представления об изучаемой проблеме.

Это диктует необходимость проведения комплексного исследования, включающего суммарную оценку свойств этиологических агентов и показателей иммунитета для поиска новых эффективных и доступных алгоритмов прогностического и диагностического обследования пациентов с урогенитальными заболеваниями микробной этиологии.

Цель исследования – оценка биологических свойств микробиоты при развитии хронических урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин для определения их диагностической и прогностической ценности.

Задачи исследования 1. Определить видовой и количественный состав микрофлоры репродуктивного тракта здоровых мужчин и мужчин с различными по этиологии формами генитальной инфекции.

2. Провести сравнительный анализ свойств микрофлоры и состояния иммунитета при неспецифических и гонококковых поражениях мочеполовых органов у мужчин.

3. Оценить пенетрантность и экспрессию способности урогенитальной микрофлоры при воспалительных заболеваниях у мужчин инактивировать факторы местной антимикробной защиты.

4. Изучить особенности системного и местного иммунитета при неспецифических урогенитальных заболеваниях микробной этиологии и разных клинических формах гонококковой инфекции у мужчин.

5. Провести анализ способности урогенитальной микрофлоры инактивировать факторы системы антиинфекционной резистентности и показателей иммунитета при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта у мужчин.

6. Оценить связь качества спермы, биологических свойств микрофлоры и факторов секреторного иммунитета при неспецифических и гонококковых урогенитальных заболеваниях.

7. Выявить информативные диагностические и прогностические параметры для длительно текущих и осложнённых урогенитальных заболеваний микробной этиологии у мужчин.

Научная новизна. Впервые дана комплексная оценка специфического и неспецифического воспалительных процессов мочеполовой системы мужчин, которая учитывает: характеристику видового состава, в том числе анаэробной микрофлоры, и иммунонейтрализующих свойств микрофлоры, изменение системного и местного иммунитета, а также качество спермы, при гонококковых и неспецифических урогенитальных воспалительных заболеваниях. Определена корреляционная зависимость между уровнем лизоцима в эякуляте и подвижностью сперматозоидов. Разработан новый способ диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте (А. С. СССР № 1601576). Оценено влияние лизоцима на подвижность сперматозоидов, что послужило основанием для разработки нового способа лечения семейного бесплодия (А. С. СССР № 1671308). Разработан новый метод дифференциальной диагностики малосимптомной гонококковой инфекции с различными объемами поражения (локализованная и с системными проявлениями), основанный на определении иммунологических показателей эякулята – sIgА и ЛФ (патент РФ № 2400754). Изучена способность патогена и сопутствующей микрофлоры инактивировать эффекторы мукозального иммунитета – лизоцим и комплемент. Определены условия развития хронически протекающих клинических вариантов гонореи, установлены их диагностические границы. На основе этих данных разработан способ диагностики длительно протекающей урогенитальной гонореи (патент на изобретение № 2332671 от 27.05.2008 г.).

На основе анализа связи качества спермы и факторов секреторного иммунитета при неспецифических и гонококковых урогенитальных заболеваниях разработан способ прогнозирования риска развития репродуктивных нарушений при урогенитальных воспалительных заболеваниях (принято решение от 03.06. о выдаче патента РФ по заявке № 2012128391).

Практическая значимость. Получены новые данные, расширяющие представления о патогенетических механизмах взаимодействия симбиотических микроорганизмов и организма в реализации колонизационной резистентности биотопов мочеполового тракта мужчин. Полученные результаты позволили дать оценку биологической значимости микрофлоры с учётом её вирулентных свойств и факторов врождённого иммунитета в формировании хронической урогенитальной патологии и инфертильности у мужчин. Установлена возможность детекции уровня лизоцима как диагностического теста при бесплодии, а также применения лизоцима в качестве патогенетического фактора при лечении семейного бесплодия.

Выявленные информативные микробиологические и иммунологические показатели позволяют рекомендовать их для использования в прикладных целях, для оцеки силы воспалительной реакции и адекватности принимаемых терапевтических мер при урогенитальной гонорее. Разработанные способы диагностики и прогнозирования могут быть включены в алгоритм наблюдения больных с длительно текущими урогенитальными заболеваниями микробной этиологии.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, тема «Биологические свойства микросимбионтов при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии у мужчин», номер гос. регистрации 01201274420.

Внедрение в практику. Методики внедрены в работу ГБУЗ «Московский научно-практический Центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения города Москвы», ГБУЗ «ООКВД» (г.Оренбург), а также в учебный процесс на кафедре дерматовенерологии ГБОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Министерства Здравоохранения Российской Федерации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Усиление персистентного потенциала урогенитальной микрофлоры и дисбаланс системных и локальных механизмов антибактериальной защиты – биологическая основа формирования хронических урогенитальных заболеваний различной этиологии у мужчин.

2. Условно-патогенная микрофлора урогенитального тракта мужчин может быть самостоятельным этиологическим агентом при уретритах и простатитах, а также выступает в роли синергидного симбионта, усиливая вирулентный потенциал возбудителя при урогенитальной гонорее.

3. Низкое содержание sIgA с одновременно высоким уровнем лактоферрина и выраженным персистентным потенциалом выделенной микрофлоры являются диагностическими показателями различных форм урогенитальной инфекции.

4. Цитокиновый профиль и уровень лизоцима являются диагностическими критериями инфертильности спермы и могут определять пути её коррекции.

Апробация диссертации. Результаты работы были представлены и обсуждены на заседаниях Оренбургского Областного отделения Российского научного общества Иммунологов и Аллергологов, проходивших в г. Оренбурге в 2003-2007 гг., в 2009-2011 гг.;

на Межрегиональной конференции дерматовенерологов в Казани «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (2005);

на пятой и шестой Всероссийских конференциях «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006, 2009);

на заседаниях Оренбургского Областного отделения РОДВиК в г. Оренбурге в 2003-2013 гг.;

на четвертой Региональной конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006);

на пятой Всероссийской научно практической конференции «Терапия социально значимых заболеваний в дерматовенерологии» (Москва, 2006);

на четвертом Всероссийском конгрессе по медицинской микологии в Москве (2006);

на седьмом Конгреcсе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2007) и Объединенном иммунологическом форуме в Санкт-Петербурге (2008);

десятом Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009 г.);

9-той-12-той всероссийских научно практических конференциях врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2008 2011 гг). Также результаты работы представлялись на пятой конференции иммунологов Урала «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической аллергологии и иммунологии» в г. Оренбурге (2006) и на девятой Российской конференции иммунологов Урала, посвященной 90-летию профессора Л.Я. Эберта (Челябинск, 2011).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют пунктам 2 и 3 паспорта специальности 03.02.03 – «микробиология».

Личный вклад. Материал диссертации собран, обработан и проанализирован автором. Вклад автора является определяющим в обсуждении результатов исследования в научных публикациях и докладах.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 45 работ, в том числе 21 статья в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, 1 монография, 1 информационное письмо, 1 методические рекомендации для врачей, слушателей факультета последипломного образования, студентов медицинских ВУЗов. Получено 4 патента РФ на изобретения, а также принято решение от 03.06.2013 о выдаче патента РФ по заявке № 2012128391.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 268 страницах и содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов, 4 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 127 отечественных и 96 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 28 таблицами и 33 рисунками.

Содержание работы Материалы и методы исследования Исследовано 1589 штаммов аэробных и облигатно-анаэробных микроорганизмов, в том числе - гонококков и грибов, выделенных из эякулята здоровых мужчин и больных с урогенитальной инфекцией.

Разобщение микроорганизмов проводилось путем секторного посева в селективные питательные среды, а затем осуществляли идентификацию выделенных штаммов. Анаэробы изолировали в анаэростатах с использованием питательных сред Becton Dickinson (USA), посев осуществлялся в среду: Шедлер агар с 5 % бараньей кровью и антибиотиками (аминогликозиды). Общепринятыми методами проводили идентификацию бактерий до уровня рода и вида, оценивая морфологические, тинкториальные, культуральные, сахаролитические и антигенные свойства. Для исследования биохимического профиля пользовались тест-системами LACHEMA (Чехия): "ENTEROtest" (1 и 2), "STREPTOtest", "NEFERMtest", "STAPHYtest" и "ANAEROtest". Определение в образцах грибов рода кандида проводили с помощью микроскопического и культурального исследования. Исследуемыми параметрами у выделенных чистых культур (Берджи, 1997) были частота высевания (%) и количество клеток – показатель микробной обсемененности (ПМО, КОЕ/мл) культур, пенетрантность и экспрессия биологических свойств микрофлоры, в том числе их способность нейтрализовать эффекторы системы антиинфекционной резистентности.

Гемолиз эритроцитов учитывали на кровяном агаре. Липолитическую активность определяли на агаре с Твином-80, ДНК-азную активность – на агаризованных средах DNASETESTAGAR (BBL, США). Факторы персистенции – ЛА, АЛА, АКА, антикарнозиновую активность (АКрА) определяли по методикам О. В. Бухарина с соавторами (1999).

Микроорганизмы выделены от 441 мужчины репродуктивного возраста (18-40 лет), проходивших обследование и, при необходимости, лечение в Оренбургском областном кожно-венерологическом диспансере, а также в филиале № 6 ФГКУ «354 ВКГ» Минобороны России (г. Оренбург).

Выделены группы:

Группа «а» – 81 фертильный мужчина, не имеющий признаков воспалительных процессов в урогенитальном тракте и с нормальными показателями спермограммы (группа здоровых мужчин). В эту группу также включены доноры, эякулят которых использован для искусственной инсеминации.

Группа «б» – 107 человек, страдающих малосимптомными хроническими гонококковыми воспалительными заболеваниями уретры (гонорея локализованная – ГЛОК).

Группа «в» – 79 человек, страдающих малосимптомными хроническими гонококковыми воспалительными заболеваниями предстательной железы и уретры (гонорея с системными проявлениями – ГСИСТ).

Группа «г» – 88 человек, страдающих хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями уретры.

Группа «д» – 86 человек, страдающих хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями предстательной железы.

Для отбора мужчин в группу пациентов с урогенитальными микробными заболеваниями были использованы следующие критерии – репродуктивный возраст, наличие у больных жалоб, свидетельствующих о воспалительных поражениях мочеполовых путей. Обязательным условием для работы с микрофлорой, изолированной из исследуемого материала этой группы больных, было не только клиническое и микроскопическое подтверждение врачом диагноза неспецифического бактериального уретрита, простатита или гонококковой инфекции (приказ МЗ РФ № 415 от 20 августа 2003 года), но и полноценное бактериологическое исследование с выделением чистых культур.

В качестве критериев исключения из исследуемой группы были использованы такие клинико-анамнестические и лабораторные параметры, как наличие гемоинфекций (ВИЧ, гепатитов B и C), других, кроме гонореи, венерических заболеваний (сифилис, хламидийная и трихомонадная инфекции) как в виде моно-, так и микст-инфекции. Не участвовали в исследовании также больные с вирусными поражениями половых путей – генитальным герпесом и др.

Пациенты, имевшие жалобы на урогенитальный дискомфорт, при обнаружении у них микоплазм и/или уреаплазм в диагностически значимом титре исключались из группы для изучения.

Мужчины в группу сравнения отбирались по нижеследующим критериям.

Учитывались анамнестические данные – отсутствие в анамнезе ранее перенесенных ИПППП, неспецифических воспалительных заболеваний, выраженных соматических патологий. Вошедшие в группу здоровых находились в репродуктивном возрасте, были фертильны, в течение года не переносили инфекционных заболеваний и не употребляли антибиотических препаратов.

У обследуемых всех групп определяли показатели системного и мукозального иммунитета. В число исследуемых показателей общего иммунитета вошли: субпопуляции лимфоцитов, идентифицированных с помощью моноклональных антител («Сорбент», Москва), содержание иммуноглобулинов (IgА, IgМ, IgG) по Mancini G. et al. (1965). При помощи реакции преципитации (Haskova et al., 1978) выявляли концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Были изучены секреторный IgА (sIgА) и лактоферрин (ЛакФ) с помощью ИФА («Вектор-Бест», Новосибирск). Клеточные факторы антимикробной защиты определяли с включением фагоцитарного показателя (ФП), фагоцитарного индекса (ФИ), теста восстановления нитросинего тетразолия – (NST-тест) по методикам А.И. Карпищенко (1999).

Изучение показателей мукозального иммунитета (ЛФ, общего IgA, sIgA, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10) в эякуляте проводили методом ИФА («Вектор-Бест», Новосибирск;

«Цитокин», С-Пб) с регистрацией результатов на фотометре «Multiskan» (Labsystems, Финляндия). Лизоцим в эякуляте определяли по скорости лизиса М. luteus (Бухарин О. В. с соавт., 1990).

Материалы, полученные в результате экспериментальной работы, были обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ STATISTIKA PLUS 2/2, MICROSOFT EXSEL 2007 с использованием выборочного материала, метода группировок. Доверительные интервалы для средних величин вычисляли с заданными уровнями достоверности 0,05 и 0,01. Для определения достоверности различий между анализируемыми выборками вычисляли среднюю арифметическую ряда (М) и стандартную ошибку средней арифметической (m), среднее арифметическое отклонение (s), вычисляли критерий значимости (t) Стьюдента. Взаимосвязь между исследуемыми признаками анализировали с использованием программы «корреляционный анализ», при этом достоверность определенных связей оценивали при достижении коэффициентом (r) пороговых величин, соответствующих размерам анализируемой выборки и заданной значимости достоверности. Для определения силы связи изученных биологических характеристик микрофлоры и противоинфекционных механизмов хозяина проводился многофакторный анализ (Лакин Г. Ф., 1990).

Результаты и обсуждение Из спермы здоровых мужчин (группа «а») более чем в половине (59,3%) случаев высевались штаммы рода Micrococcus (рисунок 1), а у трети (31,7%) мужчин представители рода Streptococcus (Streptococcus agalactiae, Streptococcus sanguis), Corynebacterium spp. – у 74,0%, у 8,9% – энтерококки (Enterococcus faeciun, Enterococcus faecalis).

Частота встречаемости (%) Группы обследуемых Рисунок 1 - Содержание таксонов микрофлоры в сперме обследуемых групп «а», «б» и «в».

Коагулазоотрицательные стафилококки выделялись в 97,0% случаев. КОС представлены видами: Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus capitis, Staphylococcus haemolyticus. Энтеробактерии (Еnterobacter coli, Citrobacter freundii, Еnterobacter cloacae) изолировались у 4,7% обследуемых.

Анаэробные и микроаэрофильные бактерии (Fusobacterium nucleatum, Bacteroides dictasonis, Eggerthella lenta) изолировали в 16,0% случаев. ПМО стафилококков была 103 КОЕ/мл, микрококков – 102 КОЕ/мл. Стрептококки всех видов, все виды энтерококков и энтеробактерий не превышали порядка 10 КОЕ/мл.

Обсемененность эякулята, при этом, в среднем не превышала 10 КОЕ/мл для аэробов и 10 КОЕ/мл для анаэробов (рисунки 2, 3). У 8,0% здоровых мужчин выявлены грибы рода Candida, их ПМО составлял 10 КОЕ/мл (рисунки 8, 4). Из одного образца материала в среднем высевалось 3,7±0,6 видов микроорганизмов.

lg(ПМО), lg(КОЕ/мл) 4, 3, 2, 1, 0, аб в абв абв абв абв микрококк стрепт. энтерококк стаф. энтеробак.

Рисунок 2 - ПМО аэробами эякулята мужчин групп «а», «б» и «в».

Стрепт. – стрептококки;

Стаф. – стафилококки (КОС и КПС);

Энтеробак. – энтеробактерии lg(ПМО), lg(КОЕ/мл) 2, 1, 0, а б в Рисунок 3 – Обсемененность спермы анаэробной флорой у мужчин групп здоровых «а» и больных «б», «в».

Что касается микробной флоры исследуемой ниши больных с гонореей (группа «б»), то КОС выделялись только в трети случаев (29,8%). КПС обнаружено не было, так же, как и в первой группе. Виды были те же, что и у здоровых S. haemolyticus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Микрококки и коринебактерии в эякуляте больных этой группы не обнаруживались, а представители другого рода кокков - стрептококки выделялись у 8,1% лиц, то есть в значительно меньшем проценте случаев, чем у здоровых, и были представлены S аgalactiaе, а у 15,30% обследуемых выделялись Enterococcus (E. faecalis).

В группе с ГЛОК, род Staphylococcus имел более низкий ПМО – 102КОЕ/мл, нежели у здоровых, ПМО других высеваемых родов не был более 10 КОЕ/мл. В этой группе из одного биотопа выделяли в среднем 1,7±0,5 видов микроорганизмов.

Кандида находили у 8,0% мужчин с ГЛОК, с обсемененностью 102 КОЕ/мл (рисунок 4).

lg(ПМО), lg(КОЕ/мл) 2, 1, 0, а б в Рисунок 4 - Обсемененность спермы грибами рода кандида у мужчин группы здоровых «а», больных групп «б» и «в».

В группе с гонококковым уретритом частота роста анаэробов обнаруживалась в 11%, а у больных с ГСИСТ – в 54,6% случаев. Количественная характеристика микробной обсемененности спермы анаэробами также отличалась у представителей описываемых групп. Динамика ее изменений от здоровых к больным с местными и системными поражениями была следующей: 102 КОЕ/мл -›101КОЕ/мл-›103КОЕ/мл.

В пуле анаэробов, выделяемых от больных с гонококковым уретритом, свои позиции сохранили бактероиды, процент которых даже достиг величины 40,9%.

Другие представители анаэробных палочек – фузобактерии тоже увеличили свое представительство до 34,2% в материале, взятом от больных. У этих же больных изменился спектр анаэробных видов. Были высеяны в 14,9% случаев актиномицеты (Actinomyces israelii) и у 9,1% - пропионибактерии (Propionibacterium granulosum).

При ГСИСТ (группа «в») стафилококки высевались в подавляющем большинстве случаев – 90,9%. Микрококки также, как и при уретрите этой этиологии, высеять не удалось. У трети обследуемых (31,8%) содержались в сперме условно патогенные стрептококки (S.agalactiae), у 12,7% обследуемых впервые высеялся S. рyogenes (рисунок 3), у четверти больных (22,2%), как и у обследуемых других групп, урогенитальная микрофлора в своем составе содержала энтерококки) – E. faecium и E. faecalis. Так же, как и в сперме обследуемых группы «а», у больных группы «в» были обнаружены энтеробактерии, но в большем проценте (65,9%) и в большем таксономическом разнообразии (E. cloacae, E. coli, K. pneumoniaе, M. morgani, P. vulgaris). Стафилококки в этой группе больных высевались в значительно большем количестве, их ПМО достиг 105 КОЕ/мл. В высоком титре также высевались энтеробактерии – 104КОЕ/мл. Из одного образца материала в среднем высевалось 3,7±0,6 видов микроорганизмов. Частота выявления кандида в эякуляте мужчин с ГСИСТ была больше - (в 78,2 % случаев), чем при ГЛОК и ПМО достигал 103 КОЕ/мл (рисунок 4).

Сперма пациентов с осложненной гонореей содержала большое количество таксонов анаэробов, вместе с этим, о чем уже говорилось, численность их в единице объема эякулята возросла. Микробный пейзаж аназробов стал более разнообразным. Изменилась и доля представительства каждого рода в биоценозе.

Доминирующие в ранее описанных группах бактероиды снизили процент своего присутствия в сообществе до 5,8%.

Состав микрофлоры и частота её выделения от больных с неспецифическими уретритами (группа «г») представлена на рисунке 5. Стафилококки выделялись в 68,8% случаев, причём в 6,7% случаев появились КПС, стрептококки – в 15,4% случаев. Выделялись также коринебактерии (49,8%), микрококки (24,3%), энтерококки (22,4%) и энтеробактерии (20,4%). В среднем, от одного больного из данного биотопа выделялось 3,1±0,3 вида микроорганизмов. Интенсивность микробной обсеменённости исследуемых биотопов была выше таковой у здоровых мужчин и достигала у стафилококков 104 КОЕ/мл, у стрептококков – 103 КОЕ/мл, у 103 КОЕ/мл, коринебактерий и микрококков обсемененность была а у энтеробактерий - 104КОЕ/мл.

Общий спектр видов микроорганизмов, выделенных от мужчин с неспецифическими уретритами, оказался более широким, чем у здоровых. При неспецифических уретритах (группа «г») S. epidermidis выделялся у 25,9% больных, S. aureus – у 6,7%, S. haemolyticus – 8,9%, S. hominis – 10,8%, S.saprophyticus – 8,9%, E. faecium – 2,8%, E. faecalis – 4,7%, S. sanguius – 3,8%, С. genitalium – 8,5%, С. pseudogenitalium – 1,9%, Candida spp. – 2,0%, C. xerosis – 2,7%, E. cloaceae – 4,4%, E. coli – 8,2%.

При бактериологическом исследовании материала от мужчин с простатитами (группа «д») из всех образцов эякулята были выделены микроорганизмы различных таксонов. Стафилококки были выделены у 61,7% обследованных мужчин этой группы, коринебактерии - у 42,1 %. Частота встречаемости стрептококков и микрококков составляла 20,3% и 20,8% случаев соответственно. В эякуляте больных с неспецифическими простатитами определялись энтерококки у 41,5% и энтеробактерии у 33,9% больных.

энтерококки стрептококки микрококки коринебактерии КПС стафилококки энтеробактерии 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% Рисунок 5 – Частота встречаемости (%) аэробных микроорганизмов различных групп в микробиоценозе уретры у больных группы «г».

В среднем от одного больного в этой группе изолировали 3,0±1,4 видов.

Изучение степени обсемененности спермы больных группы «д» показало, что ПМО для различных видов встречающихся микроорганизмов варьировал в границах 103-105 КОЕ/мл, не достигая в большинстве случаев критического уровня в 105 КОЕ/мл.

(таблица 1). Средние значения ПМО для энтеробактерий были 104-105 КОЕ/мл., а для стафилококков, энтерококков, микрококков и стрептококков этот параметр составлял 103–104, КОЕ/мл.

При неспецифическом простатите спектр выделяемой аэробной флоры имел следующие особенности: отмечался рост коагулазоположительных стафилококков у 6,7% из общего пула штаммов, коагулазонеганетивные стафилококки встречались с разной частотой, а, именно, S. haemolyticus - 28,8%;

S. epidermidis - 27,7%;

S.

hominis – 25,3%. Среди коринебактерий с одинаковой частотой (31,0% штаммов) высевались C.genitalium и C. equi, кроме того встречались виды C. хerosis и C. seminale в 17% и 12% случаев соответственно, а C. pseudogenitalium обнаруживались в 9% от выделенных коринебактерий. Представителями рода Streptococcus в сперме пациентов с неспецифическим поражением простаты были S. sanguis и S. agalactiae, которые составляли до 90% всех штаммов стрептококков.

Остальные стрептококки принадлежали к виду S. salivarius.

Таблица 1 - Показатель микробной обсеменённости (ПМО, КОЕ/мл) различных групп микроорганизмов, выделенных из эякулята мужчин группы «д».

Группы микроорганизмов ПМО, КОЕ/мл 103 – Коагулазоотрицательные стафилококки 102 – Коагулазоположительные стафилококки 103 – Микрококки 103 – Коринебактерии 103 – Энтерококки 103 – Условно-патогенные стрептококки 104 – Кишечные палочки 103 – Цитробактер 102 – Морганеллы 104 – Энтеробактер Среди энтерококков доминировали Е. faecalis – 73,3% штаммов, Е.faecium составляли 26,7% штаммов. Семейство Enterobacteriaceae было представлено в подавляющем большинстве его родоначальницей E.coli, встречавшейся в 87,6%, тогда как оставшаяся доля была представлена Enterobacter spp., Citrobacter spp., Klebsiella spp., Morganella mirgans.

Анаэробы эякулята мужчин с бактериальными неспецифическими уретритами (группа «г») и простатитами (группа «д») представлены Bacteroides distasonis (11,4% и 8,4% соответственно), Eggerthella lenta (9,6% и 9,3%), Fusobacterium nucleatum (15,2% и 14,2% соответственно) (рисунок 6). Так же редко высевались и Propionibacterium granulosum в обеих группах (11,2% – в группе «г» и 9,9% – в группе «д»). Actinomyces israelii удалось высеять лишь в 8,4% случаев только от больных с простатитом. Из материала всех обследуемых в группах «г» и «д» в довольно большом проценте случаев высевались Eubacterium contortum (18,8% и 14,9% соответственно) и Peptococcus niger (15,1% и 15,8% соответственно). Также как у здоровых и больных с гонококковой инфекцией с системными проявлениями, в эякуляте у пациентов с неспецифическими воспалениями обнаружены Peptostreptococcus anaerobius в 18,7% случаев при уретритах и в 19,1% случаев при простатитах.

д г Рисунок 6 – Видовой состав анаэробной микрофлоры в эякуляте мужчин групп «г» и «д» Из материала, взятого от больных с неспецифическими уретритами и простатитами, также как и от обследуемых других групп, высевались грибы рода Candida. Уровень обсеменённости грибами и частота их встречаемости представлены на рисунках 7 и 8.

ПМО грибов рода Candida в эякуляте больных с уретритами и простатитами равен 103 КОЕ/мл (рисунок 7), высеваемость составила 68% и 71% соответственно (рисунок 8).

Рисунок 7 – Обсемененность спермы грибами рода кандида у здоровых обследуемых «а» и пациентов групп «г» и «д».

80% 60% 40% 20% 0% а б в г д Рисунок 8 – Пенетрантность грибов рода кандида в сперме здоровых обследуемых «а», пациентов групп «б», «в», «г» и «д» Микроорганизмы, изолированные от здоровых (группа «а»), проявляли антилизоцимную активность – в 22,1% случаев, гемолитическую – в 22,4%, лизоцимную – в 41,1%, ДНК-азную – в 27,7%, твиназную – в 31,0%, и антикомплементарную активность – в 22,7% (рисунок 9). Уровень АЛА не превышал 0,6±0,1 мкг/мл ОП, АКА – 3,9±1,0 антиЛЕК.

Ассоцианты гонококка при ГЛОК (группа «б») обладали способностью продуцировать гемолизины (24,2% штаммов), деградировать мурамидазу на уровне 1,4 мг/мл ОП (у 54,9% штаммов), комплемент – 5,3±1,1 антиЛЕК (у 27,8% штаммов). Лизоцимная активность выявлена у 32,1% культур, твиназная – зарегистрирована у 43,6% культур, а ДНК-азная – у 23,0%.

80 % групп а "а" груп п а "б" групп а "в" ГЕМ ЛА АЛА АК А ДНК -азн ая Тви н азн ая Рисунок 9 – Встречаемость вирулентных признаков у микроорганизмов, выделенных из спермы здоровых «а» и больных групп «б» и «в».

Примечание: ЛА – лизоцимная активность;

АКА – антикомплементарная активность;

ДНК-азная – ДНК-азная активность;

АЛА – антилизоцимная активность;

ГЕМ – гемолитическая активность.

Урогенитальная микрофлора мужчин с ГСИСТ (группа «в») обладала, в среднем, АЛА на уровне – 2,1±0,2 мкг/мл ОП (78,0% штаммов), АКА – 8,2±1,2 антиЛЕК (43,4% штаммов), а также гемолитической активностью в 42, 8% случаев, лизоцимной – 38,9%, ДНК-азной – 30,4% и липолитической активностью в 40,6%.

Выделяемые кандида продуцировали гемолизины в группе «а» в 29,9% случаев.

Кандида из исследуемого материала от пациентов группы «б» проявляли данный признак в 31,2% случаев, в группе «в» эта активность у них обнаружена в 35,0% случаев. Частота выявления ДНК-азной активности у грибов рода кандида в разных группах обследованных достоверно не отличалась и составила для группы «а» 6,1%, для группы «б» – 5,9% и для группы «в» – 6,3%. Твиназная активность выявлена в группе «а» у 75,3% штаммов грибов, в группе «б» – у 81,8%, в группе «в» – у 77,9%. Различия в частоте встречаемости этого признака у грибов всех трёх групп – незначительные.

Мурамидазную активность в группе «а» проявляли 18,7% штаммов кандида.

Частота проявления ЛА в группах «б» и «в» составляла соответственно 47,98% и 18,7% от числа штаммов кандида. Способность инактивировать мурамидазу грибами рода Candida, выделенными из эякулята здоровых мужчин, выявлена у 67,9% штаммов (0,91±0,04 мкг/мл ОП);

больных с ГЛОК – у 62,4% (1,00±0,08 мкг/мл ОП);

с ГСИСТ – у 75,0% (1,34±0,12 мкг/мл ОП). В группе здоровых у кандида АКА встречалась у 82,3% штаммов на уровне (2,11±0,40) *106 антиЛЕК;

в группе с ГЛОК этот признак составлял (1,12±0,29) *106 антиЛЕК у 80,1% штаммов;

группе ГСИСТ грибы рода Кандида обладали АКА у 92,0% штаммов на уровне (1,72±0,44) *106антиЛЕК.

АКрА выявлена у 80,0% аэробных кокков, выделенных от пациентов разных групп.

Её средний уровень – 0,8±0,1 мг/мл достоверно не отличался у микроорганизмов, выделенных от здоровых и больных.

При уретрите (группа «г») способностью к продукции гемолизинов обладали 75,5% стафилококков, 88,4% стрептококков, 31,3% коринебактерий, 60% энтеробактерий. У лактобактерий и микрококков гемолитическая активность не регистрировалась. Комплекс персистентных свойств (АЛА и АКА) обнаружен у 100% энтеробактерий, 100% микрококков, 82,3% стафилококков, 47,23% коринебактерий. Уретральные штаммы стрептококков, выделенные у этой группы больных, определяемыми факторами персистенции обладали в 100% случаев.

Выраженность исследуемых признаков была различной у различных микроорганизмов.

У энтеробактерий выраженность антилизоцимного признака в среднем проявлялась на уровне 3,1±0,6 мкг/мл (p0,05), микрококки и стафилококки инактивировали лизоцим в концентрациях 1,8±0,3 мкг/мл и 3,1±0,4 мкг/мл (p0,05) соответственно (рисунок 10). Антилизоцимная активность коринебактерий и стрептококков была невысокой, в среднем 1,3±0,5 мкг/мл и 0,35±0,09 мкг/мл соответственно.

Рисунок 10 - Антилизоцимная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных группы «г».

Антикомплементарная активность регистрировалась у 69% штаммов стафилококков, выраженность признака (6,7±0,9) *106 антиЛЕК (p0,05) (рисунок 11).

У всех энтеробактерий отмечалась антикомплементарная активность выше средней – (10,8±0,4) *106 антиЛЕК (p0,05).

Рисунок 11 - Антикомплементарная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных уретритом группы «г» У микрококков и коринебактерий значения этого признака составили (6,3±0,7) *106 антиЛЕК и (7,0±1,1) *106 антиЛЕК соответственно. Стрептококки имели не высокие значения АКА – (1,17±0,20) *106 антиЛЕК.

При оценке персистентного потенциала изолятов выявлено, что отсутствие персистентных признаков наблюдалось лишь у 11,8% штаммов коринебактерий, а у большинства выделенных штаммов микроорганизмов независимо от их видовой принадлежности регистрировалась способность к инактивации лизоцима, комплемента или двух субстратов сразу. При этом комплексом персистентных характеристик обладало большинство изолятов (рисунок 12).

кандида  энтерококки стрептококки АЛА+АКА микрококки  коринебактерии  стафилококки  0%  20%  40% 60% 80% 100% энтеробактерии Рисунок 12 - Доля штаммов микроорганизмов с различным набором персистентных признаков, выделенных из эякулята больных группы «д».

Изучение выраженности антилизоцимного признака у выделенных микроорганизмов показало, что большинство штаммов стафилококков и энтеробактерий обладали средними и высокими значениями АЛА ( 2 мкг/мл) (рисунок 13).

Средние значения АЛА составили для стафилококков и энтеробактерий 2,7±0,8 и 3,5±0,9 мкг/мл соответственно. Микрококки и коринебактерии инактивировали лизоцим в концентрациях 1,3±0,7 и 0,8±0,9 мкг/мл соответственно, а стрептококки - в концентрации 1,3±0,6 мкг/мл (р0,01).

Рисунок 13 - Антилизоцимная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных группы «г».

Большинство штаммов бактерий, выделенных из эякулята больных группы «д», обладали способностью снижать активность комплемента в гемолитической системе, при этом почти у всех штаммов регистрировались средние и высокие значения АКА (рисунок 14).

Рисунок 14 - Антикомплементарная активность микроорганизмов, выделенных из эякулята больных группы «д».

АКА обладали 76,4±3,8% выделенных стафилококков при среднем уровне * признака (7,8±1,2) антиЛЕК (р0,05). Экзометаболиты энтеробактерий ингибировали активность комплемента в пределах (16,8±2,1) *106 антиЛЕК. Средние значения АКА у стрептококков составляли (3,7±2,5) *106 антиЛЕК (p0,01), а у микрококков - (11,6±3,3) *106 антиЛЕК (p0,05).

Обобщая, можно отметить что в сперме больных неспецифическими простатитами наблюдаются изменения видового состава микрофлоры, характеризующиеся появлением энтеробактерий с высоким персистентным потенциалом. Указанные изменения видового состава микрофлоры эякулята сопровождаются усилением вирулентных и персистентных свойств симбионтной сапрофитной микрофлоры, что позволяет сделать вывод о роли персистирующей микрофлоры в формировании хронического процесса.

В ходе проведенного исследования оценивались вирулентные свойства и самого инфекта – N. gonorrhoeae, уже известного некоторыми своими способностями инактивировать защитные механизмы хозяина (Ахунова Н.Р., Воронина Л.Г., 1999). Определение персистентных свойств гонококков выявило, что способность к инактивации карнозина отмечалась у 30 % всех выявленных изолятов от больных с ГЛОК. При этом частота карнозиннейтрализующих штаммов в группе пациентов с ГСИСТ была выше. Экспрессия антикарнозиновой активности у штаммов нейссерий от пациентов с разным течением гонореи была неодинаковой.

Рисунок 15 - Выраженность биологических свойств гонококков, выделенных от больных групп «б» и «в».

1) – достоверные различия (р0,05), 2) – достоверные различия (р0,001).

У мужчин с осложненным гонококковым процессом штаммы обладали более высокой АКрА (р0,05) (рисунок 15).

Представлялось информативным оценить и другие свойства этого патогена.

Оценивались следующие параметры – способность инактивировать мурамидазу, лактоферрин, а также способность выделять протеолитические ферменты, деградирующие Ig А, его общий и секреторный варианты. Можно отметить, что изоляты возбудителя, ассоциированные с микроорганизмами-синергистами при урогенитальном поражении с системным процессом, обладали, как правило, большим набором персистентных качеств, в отличие от штаммов, выделенных от больных с локализованным процессом. Доля высоковирулентных штаммов при этих формах инфекции составила 57,4% и 36,7% соответственно. Выраженность изучаемых иммунонейтрализующих свойств (АИгА, АКрА, АЛфА, АЛА, АКА) также имела возрастающую динамику параллельно прогрессии воспаления.  Полученные данные свидетельстуют о доминировании в сперме здоровых мужчин грампозитивных кокков с низким уровнем вирулентного и персистентного потенциала, что совпадает с данными других исследователей (Иванов Ю. Б., 1998;

Кузьмин М. Д., 2002).

Поскольку частым ассоциантом в микробиоценозе мочеполовых путей больных с ГСИСТ являются грибы рода Candida, оценено их возможное влияние на факторы персистенции Neisseria gonorrhoeae. Изучено влияние внеклеточных факторов клинических изолятов грибов рода Кандида на антилизоцимную, антикарнозиновую и антикомплементарную активности штаммов гонококков.

Установлено, что внеклеточные факторы грибов рода кандида в значительном проценте случаев повышают персистентные свойства Neisseria gonorhoeae (антилизоцимную и антикомплементарную активность), увеличивая способность возбудителя удерживаться в организме. Грибы рода Кандида также обладают АЛА и АКА, истощая факторы защиты хозяина. Были обнаружены факторы риска развития длительного протекания гонококковой инфекции и выявлены их информативные границы. Если в ассоциации с гонококком высеваются грибы рода Candida в титре не менее 102 КОЕ/мл, при проявлении одновременно антилизоцимной активности не менее 1,3 мкг/мл на единицу оптической плотности и антикомплементарной активности не менее 1,5*106 антилитических единиц комплемента прогнозируют длительное течение урогенитальной инфекции (патент РФ № 2332671).

Следует отметить, что обнаруженная смена видового состава аэробной и анаэробной составляющих при дисбиозах, вызванных как специфическими так и неспецифическими условно-патогенными микробными агентами, является не случайной, а обусловленной селективным увеличением экспрессии антагонистического потенциала микробов-ассоциантов с целью их адаптации к меняющимся условиям среды обитания и сохранения в микробиоценозе.

Таким образом, внедрение возбудителя в существующий биоценоз следует оценивать не с позиции автономной бактерии, вступающей в противоборство с макроорганизмом, а с точки зрения ассоциативного симбиоза целой микробной популяции, представляющей собой единое целое, тесно связанной со средой обитания – макроорганизмом.

При изучении показателей периферической крови у больных с микробными заболеваниями урогенитального тракта выявлено, что при локализованной гонорее отмечается (по сравнению со здоровыми) достоверное снижение относительного количества сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов и увеличение моноцитов (таблица 2).

Обнаружено снижение ФИ и метаболической активности нейтрофильных фагов (стимулированный зимозаном NST-тест). Экспрессия количественных изменений иммунных показателей при ГСИСТ значительно выше по сравнению с ГЛОК.

Выявлено (группа «в») заметное уменьшение количественных значений ФИ, функционального резерва лейкоцитов в NSTsp и NSTst тесте, что согласуется с данными О.А. Сингур (2003), П.В. Пинегина (2009), показавшими наличие дефектов фагоцитарно-клеточной защиты у больных с длительно текущей инфекцией.

При неспецифическом поражении уретры (группа «г») отмечались умеренная лимфопения, достоверное снижение зрелых форм лейкоцитов. Фагоцитарная активность лейкоцитов характеризовалась усилением метаболической активности нейтрофилов в NSTsp на фоне достоверного снижения значений фагоцитарного индекса и фагоцитарного показателя. Значения стимулированного NST-теста, которые были меньше, чем у здоровых мужчин, обусловливают достоверное ослабление функционального резерва нейтрофилов. Эозинофильная составляющая гранулоцитарного звена оставалась интактной.

Таблица 2 – Лейкоцитарные показатели и данные о продукции кислородных радикалов у здоровых и пациентов с урогенитальными микробными заболеваниями (М ± m) Нейтрофильные сегментоядерные Доля лимфоцитов от лейкоцитов Нейтрофильные палочкоядерные Эозинофильные гранулоциты, % Доля моноцитов от лейкоцитов Фагоцитарный показатель, % Общее число лимфоцитов, Фагоцитарный индекс, ед.

Общее число лейкоцитов Функциональный резерв (NST st - NST sp), ед.

гранулоциты, % гранулоциты, % крови, % NST sp, % NST st, % Параметр крови, % 103 /мкл 103 /мкл Группа 6,28 ± 34,90 ± 2,23 ± 1,96 ± 57,10 3,21 ± 2,61± 58,90 3,71 ± 6,50 ± 38,10 27,90 ± здоровых 0,17 0,59 0,05 0,21 ± 0,46 0,31 0,22 ± 1,07 0,09 0,28 ± 3,83 2, мужчин (25 чел.) Пациенты 6,06 ± 48,10 ± 2,49 ± 1,91 ± 44,2 ± 5,18 ± 2,92 ± 21,30 3,22 ± 14,9 ± 26,10 12,90 ± 1,741) 1,681) 0,34) 0,081) 0,2211) 0,621) с ГЛОК 0,13 0,09 0,30 0,32 ± ± 1,901) 1,681) (25 чел.) Пациенты 5,01 ± 46,10 ± 2,84 ± 2,28 ± 46,7 ± 2,96 ± 2,21 ± 50,20 2,92 ± 7,02 ± 11,90 8,26 ± 0,20 1) 2) 1,391) 0,031) 1,391) 0,382) 0,021) 0,152) 0,391) 2) с ГСИСТ 0,34 0,30 ± ± 1,331) 2) 0,681) (25 чел.) 2) Больные 6,05 ± 32,3 ± 2,18 ± 2,01 ± 44,30 3,13 ± 2,38 ± 52,2 ± 3,23 ± 14,2 ± 26,10 28,30 ± 0,611) 2,261) 0,091) 0,311) 1,251) с неспеци- 0,16 0,07 0,35 ± 0,32 0,20 ± 1,661) 1,741) фическим уретритом (24 чел.) Больные с 6,08 ± 35,8 ± 2,23 ± 1,89 ± 44,90 3,16 ± 2,27 ± 50,5 ± 3,20 ± 8,4 ± 28,30 14,1 ± 0,181)2) 0,191)2) 0,051) 2) 2,191) 0,081) 0,211)2) 0,801) 2) неспеци- 0,31 ± 0,34 0,20 ± 1,171) 1,251) фическим простати том (21 чел.) Примечание: здесь и в табл. 2, 1) - р0,05 для отличий между показателями больных и параметрами у здоровых мужчин;

2) - р0,05 для отличий параметров у пациентов с ГЛОК и ГСИСТ Изменения гуморального звена иммунитета при ГЛОК, по сравнению с показателями у здоровых лиц, характеризовались значительным увеличением уровня ЛФ и существенным снижением уровня IgA и IgG (таблица 3), что можно рассматривать как последствие подавляющего влияния нейссерий на иммунный ответ (Pantelic M. et al., 2005).

Таблица 3 – Субпопуляции лимфоцитов, иммуноглобулины и гуморальные факторы врожденного иммунитета у больных с урогенитальными микробными заболеваниями (М ± m) иммуноглобулины Иммуноглобулин Иммуноглобулин Иммуноглобулин СD19+, 103/мкл СD3+, 103/мкл СD4+, 103/мкл СD8+, 103/мкл Секреторные ЛакФ, нг/мл СD19+, % Параметр СD8+, % СD4+, % СD3+, % ы M, г/л, мкг/мл ы A, г/л ы G, г/л Группа 61,90 1,50 43,01 0,94 25,40 0,58 13,80 0,30 1,89 ± 1,41 1,41 13,10 здоровых ± ± ± ± ± ± ± ± 0,02 ± ± ± ± мужчин 0,68 0,06 0,68 0,03 0,36 0,03 0,45 0,01 0,05 0,03 0,39 (25 чел.) Пациенты 40,80 1,09 31,10 0,33 19,3 0,22 13,10 0,32 1,58 3,43 1,49 8,26 с ГЛОК ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 0,051) 1,421) 0,041) 0,781) 0,021) 0,081) 0,141) 0,341) 741) (25 чел.) 1,19 0,76 0,01 0, 1) Пациенты 43,10 1,03 29,10 0,36 20,90 0,21 14,60 0,37 0,93 2,81 1,81 8,61 с ГСИСТ ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 0,871) 0,591) 0,011) 0,061) 0,051) 0,111) 0,021) 0,041) 71 1) (25 чел.) 0,03 0,98 0,56 0, 1) 2) 2) 2) 2) Больные 48,0 1,23 33,3 0,39 20,3 0,21 13,9 0,37 1,64 2,40 1,54 9,32 с ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 1,361) 0,061) 1,631) 0,031) 1,181) 0,031) 0,091) 0,141) 0,431) неспеци- 0,051 0,56 0,09 1) фическим уретрито м (24 чел.) Больные с 47,0 1,20 31,5 0,37 22,6 0,31 14,7 0,31 1,37 2,38 1,69 8,96 неспециф ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 1,341) 0,041) 0,661) 0,021) 0,191) 0,071) 2) 0,031) 0,051) ическим 0,033 0,64 0,033 0,11 2) 1)2) 2) простатит ом (21 чел.) У больных с распространённым процессом изменения показателей гуморального иммунитета имели направленность, подобную локализованным формам гонореи и выражались в достоверном снижении уровня IgA, sIgA, IgG и увеличение содержания IgМ, ЦИК и ЛФ.

Изменения клеточного состава периферической крови при локализованной гонококковой инфекции, по сравнению со здоровыми, характеризовались снижением числа зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) за счёт хелперно-индукторных (CD4+) и цитотоксических (СD8+) лимфоцитов (табл. 3).

Нарушения клеточного звена иммунитета при системных проявлениях гонореи выражались в уменьшении количества иммунорегуляторных Т-лимфоцитов с хелперной функцией, цитотоксических (СD8+) клеток.

Изменения иммунного статуса при гонококковой инфекции можно рассматривать как вторичную иммунную недостаточность с преимущественным угнетением клеточно-опосредованного звена, что согласуется с данными Г. В. Порядина и соавт. (2008), D. H. Walker et al. (2000).

Проведённое исследование популяционного и субпопуляционного состава клеток периферической крови (таблица 3) у больных с малосимптомным неспецифическим бактериальным уретритом показало, что по отношению к здоровым лицам, наибольшего внимания заслуживают снижение общего числа Т-лимфоцитов за счёт СD4 и СD8 популяций наряду с ослаблением фагоцитарной активности лейкоцитов, оцениваемой по фагоцитарному индексу, и снижение функционального резерва лейкоцитов за счёт стимулированной продукции кислородных радикалов. Вместе с изменением клеточных иммунологических показателей, при неспецифическом уретрите отмечалось значительное снижение уровня сывороточных IgG и мономерного IgА, при повышенном содержании sIgA.

У больных с распространением неспецифического воспалительного процесса на ткани простаты (группа «д») выявлены гуморальные нарушения в иммунном статусе, сходные с изменениями при неспецифическом микробном уретрите, но более выраженными по уровню количественных значений (таблица 3), а также изменения клеточного состава крови и показателей фагоцитоза.

При исследовании мукозального иммунитета установлено, что обе формы неспецифического микробного воспаления урогенитальных органов сопровождаются достоверно более высокими концентрациями железо связывающего антиинфекционного белка лактоферрина и общего иммуноглобулина А, депрессией уровня мурамидазы, а развитие неспецифического микробного простатита характеризуется также снижением в эякуляте sIgA. (таблица 4).

Выявленное повышение ЛФ является провоцированной реакцией на воспаление, развивающееся на слизистой генитального тракта (Flanagan, J.L., 2009).

Таблица 4 – Уровни факторов мукозального иммунитета и цитокинов в сперме больных урогенитальными микробными заболеваниями Обследуемые больные больные больные с гонококковой больные с локализован Показатель здоровые инфекцией с с уретритами ной гонококко лица с простатитами системными вой инфекцией (n=36 чел.) (n = 30 чел.) проявлениями (n = 44 чел.) (n = 39 чел.) (n = 31 чел.) Лизоцим, 10,3 ± 2,8* 3,69 ± 0,84 * 3,82 ± 0,14* 3,72 ± 0,04* 6,0,2 ± 0, мкг/мл Лактоферрин, 6311 ± 48* 7142 ± 57* 6202 ± 29* 6112 ± 22* 5571 ± нг/мл 0,251 ± 0,021* 0,240 ± 0,005* 0,216 ± 0,011* IgA, мкг/мл 0,182 ± 0,003 0,179 ± 0, 4,01 ± 0,52* sIgA, мкг/мл 4,81 ± 0,65 6,61± 1,99 3,08 ± 0,26 4,63 ± 0, 37,9 ± 7,0* 97,2 ± 14,6* 22,4 ± 8,9* 35,2 ± 4,8* ИЛ-1, пг/мл 14,1 ± 2, 311 ± 28,1* ИЛ-6, пг/мл 33,1 ± 7,8 37,9 ±2,8 33,1 ± 5,6 32,1 ± 4, 3424 ± 248* 4106 ± 326* 3342 ± 242* ИЛ-8, пг/мл 2710 ± 112 2823 ± 53,1 ± 10,3* 58,9 ± 9,8* 168 ± 10,0* ИЛ-10, пг/мл 132 ± 28,8 138 ± 11, *- р 0,05 отличия с показателями группы здоровых ;

- р 0,05 отличия в параметрах у больных с ГЛОК и ГСИСТ и больных с неспецифическими уретритами микробной этиологии и простатитами микробной этиологии Согласно полученным данным локализованный гонококковый процесс сопряжен с повышением содержания лизоцима, лактоферрина и иммуноглобулина sIgA. Гонококковая инфекция с системными признаками процесса отличается дефицитом уровня мурамидазы и sIgA и еще большим увеличение концентраций общего иммуноглобулина А и лактоферрина.

Так же как при уретральном поражении, при неспецифической инфекции с захватом простаты отмечался рост всех показателей, кроме ИЛ-6. При этом не выявлено отличий в содержании данного фактора у больных с разным объемом неспецифического урогенитального поражения.

По отношению к уровню, определяемому у здоровых мужчин группы сравнения, отклонения в содержании IFN-  и всего изучаемого спектра интерлейкинов были однонаправленными. Гонорея с системными проявлениями оказалась сопряжена с повышением, сравнительно с контрольным уровнем, содержания ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8, при этом наибольшие концентрации были выявлены для ИЛ-1 (в 6,5 раз), и ИЛ-6 (в 10 раз).

Концентрации ИЛ-10 у больных с системным гонококковым поражением были достоверно более низкими, по сравнению с показателями группы здоровых.

При сравнении изменений в цитокиновом статусе больных с системной и локализованной гонореей определены достоверные отличия только для интерлейкинов ИЛ-1 и ИЛ-6, содержание которых было гораздо больше повышено у больных с гонококковым поражением с системными проявлениями.

Исследование содержания IFN- показало, что в группе здоровых мужчин его уровень составил 7,2±0,4 пг/мл (таблица 5).

Таблица 5 - Содержание IFN- в эякуляте мужчин Обследуемые больные с больные с гонокок больные локализованной ковой инфекцией с здоровые больные с Показатель с простати гонококковой системными лица уретритами тами инфекцией проявлениями (n = 14 чел.) (n = 18 чел.) (n = 21 чел.) (n = 18 чел.) (n = 16 чел.) 3,1 ± 0,4* 3,4 ± 0,5* 12,3 ± 0,4* IFN-, пг/мл 7,2 ± 0,4 7,9 ± 0, У здоровых мужчин уровень IFN- в сперме был равен, в среднем, 7,2±0,4 пг/мл.У всех пациентов с гонококковым поражением отмечено достоверно более низкое содержание IFN-, чем в контрольной группе здоровых мужчин. У мужчин с уретритами не отмечено достоверных отличий в концентрации этого фактора, вместе с тем было уставнолено достовероное повышение уровня IFN- в эякуляте больных с неспецифическими простатитами.

При корреляционном анализе между персистентными свойствами гонококка и показателями местного иммунитета обнаружили, что при инфекции с поражением гонококком только уретры существуют значимые положительные связи между уровнем анти IgA активности нейссерий и уровнем IgA. При этом как при ГЛОК, так и при ГСИСТ выявлены положительные связи между АЛфА штаммов гонококков и уровнем ЛФ в спермальной жидкости (для ГСИСТ r=0,89, р0,05).

При этом, нами была прослежена еще одна, вновь возникшая при ГСИСТ (по сравнению со связями при ГЛОК), позитивная связь АЛфА с А(sIgA)A (r=0,85, р0,05). Это отражает более частое выявление у пациентов с распространенной гонореей штаммов гонококков с «пакетом» факторов, нейтразующих сразу несколько эффекторов местного иммунитета.

Как правило, штаммы N.gonorrhoeae, которые были изолированы от пациентов с асимптомным течением инфекции, обладали протеазами для расщепления IgA, имели АЛФА, АЛА, АКрА и АКА. Вполне закономерным был тот факт, что штаммы проявлявшие эти активности с высокой экспрессией, изолировались от мужчин с гонококковыми простатитами и другими осложненными клиническими вариантами течения гонореи. Это указывает на связь между силой иммунонейтрализующих способностей в отношении системы антиинфекционной резистентоности и потенциалом нейссерий для более успешного (распространенного) захвата различных отделов мочеполовой системы, поскольку истощение и инактивация местных факторов врожденного иммунитета способствуют быстрой и беспрепятственной гонококковой интервенции.

Суммарное действие факторов патогенности инфекта при гонорее супрессирует продукцию IgA, особенно sIgA, который синтезируется локальными плазматическими клетками слизистых оболочек и представляет собой один из основных барьеров естественной устойчивости. Доказательством тому служит отсутствие увеличения концентрации sIgA (в отличие от ГЛОК) в сперме мужчин, у которых малосимптомное гонококковое поражение сопровождается захватом тканей простаты. Видимо, именно при снижении секреторго варианта иммуноглобулина А в мукозе урогенитального тракта и создаются предпосылки к широкому распространению гонококка.

В этих условиях, возможно, в действие вступает ЛФ, уровень которого возрастает у мужчин с системной гонореей, вследствие чего идет селективный отбор N.gonorrhoeaе-продуцентов с высоким уровнем АЛфА, поскольку этот признак имеет большое значение как фактор вирулентности (Валышев А. В., Валышева И. В., 2006).

При изучении местного иммунитета у больных с разными клиническими формами гонореи, разработан способ дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при её малосимптомном течении, основанный на определении иммунологических показателей эякулята – sIgА и ЛФ. При уровне sIgА 2,51 мкг/мл и менее и одновременном уровне ЛФ 6965 нг/мл и более диагностируют ГСИСТ, а при отсутствии указанного условия диагностируют ГЛОК. Апробация предложенного способа диференциальной диагностики малосимптомной гонореи проводилась на клинической выборке больных.

При оценке фертильности спермы у больных с урогенитальными воспалительными процессами, осложненными бесплодием, установлено, что персистирующая микрофлора эякулята, вызывая лизоцимдефицитное состояние, способствует мужской инфертильности. Разработан способ диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте обследуемых и способ лечения мужского бесплодия с использованием коррекции уровня мурамидазы.

Фертильность спермы зависит также от уровня в биологической жидкости интерлейкина 1 бета (ИЛ-1) и интерферона гамма (IFN-), поэтому они опреде лены как информативные критерии формирования инфертильности. Это позволило предложить способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений (принято решение от 03.06.2013 о выдаче патента РФ по заявке № 2012128391).

Новизной разработанного способа является то, что раннее прогнозирование достигается за счет одномоментной оценки содержания в биологической жидкости ИЛ-1 и IFN-. При содержании ИЛ-1 больше 38,8±3,8 пг/мл и одновременном содержании IFN- больше 8,1±0,5 пг/мл прогнозируют формирование репродуктивных нарушений.  Результат, достигаемый применением данного способа, выражается в раннем выявлении мужчин, относящихся к группе риска по формированию вторичного, инфекционно обусловленного, бесплодия при отсутствии выраженных клинических симптомов воспаления. С его помощью возможно прогнозирование нарушений репродуктивной функции, а не констатация уже развившегося бесплодия, при этом оценивается не бактерицидный фактор, а регуляторы (ИЛ-1 и IFN-) развития воспалительного процесса, когда ещё эффективно принятие превентивных мер по обеспечению возможности успешной реализации репродуктивной функции. Так же предложенный способ обеспечивает возможность скринингового обследования большого количества пациентов, позволяет предпринять мероприятия по предупреждению развития осложнений, запущенных форм заболевания и, следовательно, улучшить качество и своевременность лечения, уменьшив материальные затраты на терапию.  Оценивая полученные результаты в целом, можно отметить, что изучение урогенитальной инфекции показало, что только инфектологический, то есть комплексный, подход позволяет учитывать вклад всех участников процесса в его развитие и при этом условии может быть использован для решения задач прикладной медицинской микробиологии. Инфектологический подход, во-первых, позволил не просто описать спектр выделеных из изучаемого биотопа микроорганизмов, подсчитать их количественное представительство, оценить проявление и выраженность их биологических свойств, в том числе, направленных на подавление системы антиинфекционной защиты, но и выявить превалирующие в биоценозе виды микроорганизмов и их характеристики, позволяющие данному таксону вносить определяющий вклад в формирование распространенной специфической и неспецифической инфекции.

Указанный подход базируется на выявлении устойчивых связей между микросимбионтами и между микроорганизмами и макроорганизмом, а именно, эффекторами защиты хозяина, что позволило, применяя эту методологию, предложить выявленные связи как ключевые позиции, которые могут служить для диагностики и адекватной терапии урогенитальных микробных заболеваний.

Выводы 1. Нарушения микроэкологии репродуктивного тракта мужчин с неспецифическими уретритами и простатитами носят сходный характер и отличаются степенью выраженности;

в отличие от здоровых, у них увеличено видовое разнообразие и обсеменённость бактериями и грибами, отличающимися выраженной способностью к деградации факторов мукозального иммунитета, что свидетельствует о формировании урогенитального дисбиоза.

2. При локализованной гонорее по сравнению со здоровыми уменьшается ПМО и изменяется видовой спектр аэробов, увеличивается ПМО грибов. Микрофлора эякулята мужчин с системными проявлениями гонореи отличается видовым разнообразием аэробов и, особенно, анаэробов, повышением уровня бактериоспермии до 105 КОЕ/мл, а кандидаспермии - до 103 КОЕ/мл.

Длительное течение гонореи сопровождается диагностически значимым увеличением в эякуляте дрожжевых грибов рода кандида со способностью нейтрализовывать мурамидазу и комплемент.

3. При неспецифических уретропростатитах у бесплодных мужчин концентрация лизоцима в эякуляте в 6 раз меньше, чем у здоровых. Персистирующая микрофлора эякулята, вызывая лизоцимдефицитное состояние, способствует мужской инфертильности.

4. При неспецифических уретритах и простатитах, как и при гонорее снижалось число CD3+ клеток за счёт CD8+ и CD4+ лимфоцитов, продукция IgA, IgG, однако, уровень лактоферрина не повышался. При простатитах, по сравнению с уретритами, отмечалось достоверно более выраженное уменьшение фагоцитарного индекса, функционального резерва лейкоцитов в спонтанном и стимулированном NST-тесте и содержания IgA. У больных с уретритом отмечался достоверно более высокий уровень IgМ и sIgA в периферической крови.

5. У больных гонореей снижено число CD3+ клеток за счёт CD8+ и CD4+ лимфоцитов, фагоцитарный индекс, функциональный резерв нейтрофилов за счёт ослабления метаболической активности, продукция IgA, IgG, но повышен уровнь sIgA и лактоферрина. При гонорее с системными проявлениями указанные изменения более выражены.

6. При неспецифических уретритах и простатитах снижено содержание в эякуляте лизоцима, увеличен уровень провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и IFN-. Простатит, в том числе осложненный бесплодием, характеризуется нарастанием в эякуляте концентрации лактоферрина и IgA на фоне достоверно пониженного уровня sIgA. Разработан способ оценки риска нарушений фертильности у мужчин на основе параметров местного иммунитета и цитокинового профиля.

7. При гонококковом уретрите в эякуляте увеличен уровень лактоферрина, при нормальной концентрации IgA и sIgA;

умеренно повышено содержание цитокинов (ИЛ-1 и ИЛ-8) на фоне сниженного уровня ИЛ-10, IFN-. В эякуляте пациентов с распространенной инфекцией, в сравнении с больными локализованной гонореей и здоровыми, достоверно увеличен уровень лактоферрина, IgA, ИЛ-6, ИЛ-1, снижена концентрация sIgA.

Практические рекомендации 1. Для диагностики гонореи с системными проявлениями необходимо определение уровня бактериоспермии 105 КОЕ/мл и более и микоспермии 103 КОЕ/мл и более.

2. Для диагностики хронического течения гонореи определяют диагностически значимый титр в эякуляте дрожжевых грибов рода кандида с высокой способностью нейтрализовывать мурамидазу и комплемент.

3. Для постановки диагноза «бесплодие» у мужчин определяют уровнь лизоцима в эякуляте обследуемых, который при неспецифических уретропростатитах у бесплодных мужчин в эякуляте в 6 раз меньше, чем у здоровых.

4. Для лечения семейного бесплодия используется стимулирующий эффект на подвижность сперматозоидов лизоцима в концентрации 5-15 мкг/мл.

5. Для оценки риска нарушений фертильности у мужчин определяют параметры местного иммунитета и цитокинового профиля (ИЛ-1 и IFN-). О неспецифических уретритах и простатитах свидетельствует снижение содержания в эякуляте лизоцима, увеличение уровней ИЛ-1, ИЛ-8, ИЛ-10 и IFN-. Простатит, в том числе осложненный бесплодием, характеризуется нарастанием в эякуляте концентрации лактоферрина и IgA на фоне достоверно пониженного уровня sIgA.

6. Для дифференциальной диагностики гонококкового уретрита и простатита определяют уровнь sIgA и концентрацию лактоферрина в эякуляте. При гонококковом уретрите в эякуляте увеличен уровень лактоферрина, при нормальной концентрации IgA и sIgA;

повышен уровень ИЛ-1 и ИЛ-8 на фоне снижения уровней ИЛ-10 и IFN-. В эякуляте мужчин с гонореей с системными проявлениями как по отношению к здоровым, так и по отношению к больным локализованной гонореей, достоверно увеличен уровень лактоферрина, IgA, ИЛ-6, ИЛ-1, снижена концентрация sIgA.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в реферируемых журналах 1. Михайлова Е. А. Диагностика мужского бесплодия по уровню лизоцима в сперме /Кузьмин М. Д., Михайлова Е. А.// Лабораторное дело. – 1991 - № 7 – С.41- 2. Михайлова Е.А. Роль персистирующей микрофлоры в формировании патоспермии, статья / О.В.Бухарин, М.Д.Кузьмин, Е.А.Михайлова, Ю.Б.Иванов // Урология и нефрология - 1998. - №2, С. 48- 3. Михайлова Е.А. Влияние лекарственных растений на персистентные свойства микроорганизмов / А.В.Тарасевич, Б.Я.Усвяцов, Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, С.В.Фомичева // Антибиотики и химиотерапия – 2003 - № 5. – С.53-56.

4. Михайлова Е.А. Влияние радиоволновой гипертермии на микрофлору предстательной железы при лечении простатита, осложненного бесплодием / О.В.Бухарин, М.Д.Кузьмин, Ю.Б.Иванов, Е.А.Михайлова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии – 2001 - № 4. – С.95-97.

5. Михайлова Е.А. Патогенетическое значение микрофлоры эякулята в формировании гонококковой инфекции / Е.К.Кузнецова, О.О. Михайлова, Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова, Л.Н.Генелес // Вестник ОГУ - 2005.- С.55-57.

6. Михайлова Е.А. Антилизоцимная активность микроорганизмов в ассоциации грибов с гонококками / О.О.Михайлова, Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова // Проблемы медицинской микологии. – 2006. – т. 2., № 2.– С. 76-77.

7. Михайлова Е.А. Характеристика ассоциативной микрофлоры эякулята мужчин с гонококковой инфекцией / Е.К.Кузнецова, Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 4. –– С. 89-92.

8. Михайлова Е.А. Факторы защиты Neisseria gonorrhoea от эффекторов иммунной системы человека / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Б.Перунова, Е.К.Кузнецова, О.О.Михайлова, А.И.Смолягин // Российский аллергологический журнал. – 2007 - № 3 – С. 286.

9. Михайлова Е.А. Состояние локальной антимикробной защиты слизистых оболочек половых путей у мужчин больных гонореей / О.О.Михайлова, Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, // Российский иммунологический журнал Russian Journal of Immunology. – 2008. – т. 2 (11), № 2-3, С. 10. Михайлова Е.А. Клинико-микробиологические особенности течения инфекции, обусловленной Neisseria gonorrhoea / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Ю.Ф.Шерман // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - № 6 с. 94-98.

11. Михайлова Е.А. Оценка реактивных и репаративных изменений слизистой оболочки шейки матки при ее эктопии под воздействием Neisseria gonorrhoea / Л.Г.Воронина, Е.А.Михайлова, Ю.Ф.Шерман, Н.Н.Шевлюк // Морфология. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии– 2008.– т. 134, № 5 - С.255-256.

12. Михайлова Е.А. Характеристика биологических свойств Neisseria gonorrhoea и местного иммунитета при урогенитальной гонококковой / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, И.Н.Чайникова, А.И.Смолягин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.

- 2009. - № 4 - С.103-106.

13. Михайлова Е.А. Оценка иммунного статуса у больных с различными формами гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, О.О.Штиль, Л.Г.Воронина, О.А.Темников, А.И.Смолягин // Российский аллергологический журнал. – 2010 - № 1. – С. 220-221.

14. Михайлова Е.А. Использование способности гонококка инактивировать факторы врожденного иммунитета слизистых оболочек для иммунодиагностики локализованной гонококковой инфекции и гонореи с системными проявлениями / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.А.Первушина, Ю.Ф.Шерман // Аллергология и иммунология. – 2011.– т. 12, №1. –– С. 93.

15. Михайлова Е.А. Микроэкологические и иммунологические аспекты формиро-вания нарушений репродуктивной функции / Е.А.Михайлова, Н.П.Сетко, Л.Г.Воронина, О.О.Штиль, Л.Н.Генелес // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2011.

- т. 13, №1(7).– С. 1760-1763.

16. Михайлова Е.А. Цитокины в эякуляте больных с различными формами гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, О.А.Темников // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. – №2/1, (35), С.174-175.

17. Михайлова Е.А. Иммунологические и патогистологические изменения слизистых оболочек при длительно текущих урогенитальных заболеваниях микробной этиологии / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Н.Н.Шевлюк, Л.А.Первушина, О.О.Жеребятьева, Ю.Ф.Шерман, Г.О.Махалова // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2011. – № 2– С. 31-33.

18. Михайлова Е.А. Роль гонококковой инфекции и ее ассоциированных форм с другими инфекциями, передаваемыми преимущественно половым путем, в развитии клинико морфологических изменений шейки матки / Е.А.Михайлова, Ю.Ф.Шерман, Л.Г.Воронина, Н.Н.Шевлюк, О.О.Штиль // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012. - № 1– С. 34-37.

19. Михайлова Е.А. Факторы риска нарушений фертильности мужчин на урбанизированной территории / Е.А.Михайлова, Н.П.Сетко, О.О.Штиль, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, А.И.Смолягин // Гигиена и Санитария. - 2012. – т. 5, № 3. – С. 29-31.

20. Михайлова Е.А. Факторы защиты в локальном иммунном ответе при урогенитальных бактериальных заболеваниях / Е.А.Михайлова, О.О.Жеребятьева, Л.Г.Воронина, Г.О.Махалова, Е.В.Попова, В.Ю.Махалов // Аллергология и иммунология. – 2012. –т. 12, №1.– С.93.

21. Миронов А. Ю., Харсеева Г. Г., Михайлова Е. А., Жеребятьева О. О. Диагностически значимые характеристики урогенитальной микрофлоры при определении длительности течения гонореи // Клиническая лабораторная диагностика. – 2012. - № 9. – С. 84-85.

Монографии и методические публикации 22. Инфектологические аспекты урогенитальных микробных заболеваний/ /Михайлова Е.А., Воронина Л.Г., Сетко Н.П., Миронов А.Ю., Харсеева Г.Г., Жеребятьева О.О. - Оренбург.

ГБОУ ВПО ОрГМа МЗ РФ, 2012, 184 с.

23. Диагностика и лечение урогенитальной бактериальной патологии. // Л.Г. Воронина, Е.А.

Михайлова, Н.П. Сетко, О.О. Жеребятьева, А.Ю. Миронов, Г.Г. Харсеева/ Методические рекомендации - Оренбург, 2012. – 48 с.

24. Способ прогнозирования хронического течения урогенитальной гонококковой инфекции // Е.К.

Кузнецова, Л.Г. Воронина, Е.А. Михайлова, В.П. Карянов, О.О. Михайлова, Л.В Нестеренко. / Информационно-методическое письмо. - Оренбург. – 2006 – 20 с.

Патенты 25. Способ диагностики мужского бесплодия // М.Д.Кузьмин, А.П.Луда, О.В.Бухарин, Е.А.Михайлова /Авторское свидетельство СССР на изобретение №16О1576. - 1990.

26. Способ искусственной инсеминации//М.Д.Кузьмин, А.П.Луда, О.В.Бухарин, Михайлова Е.А.

/Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1671308 - 1992.

27. Способ прогнозирования хронического течения урогенитальной гонококковой инфекции//Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Н.Б.Перунова О.О.Штиль /Патент РФ на изобретение № 2332671 от 27 мая 2008 г. – МПК G01N 33/53, C12Q 1/06. – Бюл. № 24. – 8 с.

28. Способ дифференциальной диагностики различных форм гонококковой инфекции при ее малосимптомном течении// Е.А.Михайлова, И.Н.Чайникова, Л.Г.Воронина, А.И.Смолягин, О.О.Штиль, Ю.Ф.Шерман, Г.О.Михайлова / Патент РФ на изобретение № 2400754 от сентября 2010 г.

29. Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений // Михайлова Е.А., Сетко Н.П., Жеребятьева О.О., Воронина Л.Г., Махалова Г.О., Первушина Л.А., Миронов А.Ю., Константинова О.Д., Харсеева Г.Г., Махалов В.Ю., Пострелко М.Д / Решение от 03.06.2013 о выдаче патента по заявке № 2012128391.

Публикации в других изданиях 30. Михайлова Е.А. Иммунологические параметры оценки риска развития длительного текущих урогенитальных заболеваний микробной этиологии / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, Г.О.Махалова, Л.А.Первушина, О.О.Штиль // Информационный Архив - 2011. – Т. 5, № 2-3. – С. 31-33.

31. Михайлова Е.А. Влияние микрофлоры эякулята на плодовитость у мужчин, тезизы доклада / Е.А.Михайлова, М.Д.Кузьмин // Тезисы докладов к IV Всесоюзному съезду урологов /-М.-1990.

С. 32. Михайлова Е.А. Антииммуноглобулиновая активность бактерий и ее диагностическая ценность, статья // Е.А.Михайлова, А.П.Луда, М.И.Бигеев // Персистенция бактерий:

Сб.научн.тр. / под ред. О.В.Бухарина / - Куйбышев, 1990. - с. 107- 33. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства анаэробной микрофлоры урогенитального тракта у мужчин с хроническим простатитом / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Н.Б.Перунова // Тезисы V Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии». – 2-3 октября 2003 г. – Москва. – С.30.

34. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства бактериальной флоры репродуктивного тракта мужчин с гонококковой инфекцией / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, А.В.Валышев, Н.Б.Перунова, Е.К.Кузнецова // Сборник трудов V научно практической конференции «терапия социально-значимых заболеваний в дерматовенерологии». Москва, 2005. – С.247-248.

35. Михайлова Е.А. Состав и биологические свойства факультативно-анаэробной микрофлоры урогенитального тракта мужчин при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Тезисы научных работ IX Всероссийского съезда дерматовенерологов. Том II., Москва, 2005.-С.70.

36. Михайлова Е.А. Характеристика микробиоценоза урогенитального тракта мужчин при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Сборник трудов VI научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа» Актуальные вопросы военной и практической медицины» Оренбург, 2005, Т 2 – С.682-684.

37. Михайлова Е.А. Характеристика микрофлоры эякулята здоровых мужчин и с хроническими негонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова // Сборник тезисов межрегиональной конференции дерматовенерологов, посвященная 1000-летию г.Казани» Актуальные вопросы дерматовенерологов» Казань, 2005. С.116-117.

38. Михайлова Е.А. Бактериально-грибковые ассоциации в микробиоценозе урогенитального тракта мужчин с неспецифическими и гонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, А.В.Валышев, Н.Б.Перунова, Е.К.Кузнецова // V научно-практическая конференция. Терапия социально значимых заболеваний в дерматовенерологии. Новые лекарственные препараты и средства в дерматовенерологии и косметологии. – М. – 2005. – С.

70-71.

39. Михайлова Е.А. Видовой состав и биологические свойства грибковой флоры при гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, О.О.Михайлова // IV Всероссийский конгресс по медицинской микологии. – Москва. – Т. VIII. – 2006. – С. 35-36.

40. Михайлова Е.А. К вопросу о микробиоценозе урогенитального тракта мужчин с неспецифическими и гонококковыми уретритами / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Н.М.Карпова, Е.К.Кузнецова, Л.В.Нестеренко // Журнал «Вестник последипломного медицинского образования». – Москва. - № 1, 2006. – С. 25-26.

41. Михайлова Е.А. Межмикробные взаимодействия Neisseria gonorheae и сопутствующей анаэробной микрофлоры / Е.А.Михайлова, Н.Б.Перунова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова // Сборник трудов VII научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины». Оренбург. – 2006. – т.2. – С.672 673.

42. Михайлова Е.А. Характеристика антикарнозиновой активности Neisseria gonorheae, выделенных от больных со свежей и хронической гонококковой инфекцией / Е.А.Михайлова, О.О.Михайлова, Л.Г.Воронина, Е.К.Кузнецова, Э.А.Чуенко // Тезисы начных работ X Всероссийской конференции дерматовенерологов «Организация оказания дерматовенерологической помощи в современных условиях» 23-24 ноября 2006 г. с. 12.

43. Михайлова Е.А. Биологические свойства гонококка / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, В.П.Карянов, О.О.Михайлова, Е.К.Кузнецова, Т.В.Нестерова // VII Всероссийская научно практическая конференция «Социально значимые заболевания в дерматовенерологии.

Диагностика, терапия, профилактика». Сборник тезисов. – 6-7 сентября 2007. – Москва – С.

67-68.

44. Михайлова Е.А. Особенности микрофлоры эякулята мужчин при различных формах гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, В.П.Карянов, Е.К.Кузнецова // II Всероссийский конгресс дерматовенерологов. Тезисы научных работ. – 25- сентября 2007. – СПб. – С. 139.

45. Михайлова Е.А. Изучение гистологических препаратов слизистой оболочки и пенетрантности факторов защиты гонококков от эффекторов местного иммунитета при локализованной гонококковой инфекции / Е.А.Михайлова, Л.Г.Воронина, О.О.Михайлова, Н.Н.Шевлюк, Л.А.Первушина, Ю.Ф.Шерман, И.Д.Панченко, И.А.Ичкинеев // Материлы научно-практической конференции акушеро-гинекологов и анестезиологов-реаниматологов.

Актуальные вопросы вопрос анестезиолого-реанимационного обеспечения беременных, рожениц и новорожденных. 27-28 марта 2008 года Оренбург // Теоретический и научно практический журнал «Информационный архив (МЕДИЦИНА, БИОЛОГИЯ, ОБРАЗОВАНИЕ)» - Оренбург. – Т. 2, № 1. – 2008. – С. 23-24.



Pages:   || 2 |
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.