авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Клеточный эритродиерез и его особенности в раннем постнатальном онтогенезе у белых крыс

На правах рукописи

ГОЛУБЕВА

Елена Константиновна

КЛЕТОЧНЫЙ ЭРИТРОДИЕРЕЗ

И ЕГО ОСОБЕННОСТИ

В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

У БЕЛЫХ КРЫС

03.03.01 – Физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Москва – 2013

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии государственного бюд жетного образовательного учреждения высшего профессионального образова ния «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здра воохранения Российской Федерации.

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Назаров Сергей Борисович, заведую щий кафедрой нормальной физиологии

Официальные оппоненты:

Дегтярев Виталий Прокофьевич, доктор медицинских наук, профессор, заве дующий кафедрой нормальной физиологии государственного бюджетного об разовательного учреждения высшего профессионального образования «Мос ковский медико-стоматологический университет имени А. И. Евдокимова»

Министерства здравоохранения Российской Федерации;

Каюмова Алия Фаритовна, доктор медицинских наук, профессор, заведую щая кафедрой нормальной физиологии государственного бюджетного образо вательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации;

Козлов Иван Генрихович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии государственного бюджетного образовательного уч реждения высшего профессионального образования «Российский националь ный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова» Ми нистерства здравоохранения Российской Федерации.

Ведущая организация – медицинский факультет государственного бюджетно го образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» Министерства образования и науки Российской Федерации.

Защита состоится « 11 » сентября 2013 года в 13 часов на заседании диссерта ционного совета Д 001.008.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт нормальной физиологии имени П. К. Анохина» РАМН по адресу: 125009, г. Москва, ул. Моховая, д. 11, стр. 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государст венного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт нор мальной физиологии имени П. К. Анохина» РАМН.

Автореферат разослан « 5 » июня 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Кубряк Олег Витальевич ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ Актуальность темы Эритроцитарное равновесие, существующее в норме в организме, достигается благодаря динамической взаимосвязи процессов продук ции и разрушения эритроцитов (Судаков К. В., Захаров Ю. М., 2002).

В реализации механизмов эритродиереза ведущая роль принадлежит клеточному гемолизу (Бриллиант М. Д., 1985) при участии макрофа гов-резидентов органов кроверазрушения. Изучены морфофункцио нальные характеристики эритроцитов, подвергающихся деструкции (Козлова Н. М., Слобожанина Е. И., Черницкий Е. А. 1998;

Sambrano G. R., Terpstra V., Steinberg D., 1997;

Owuor B. O. et al., 2008;

Anong W. A. et al., 2009;

Snchez-Gallego J. I. et al., 2010), реакция макрофа гов на эритроциты с измененными свойствами (Racca A., Biondi C., Cotorruelo C., 1999;

Kay M. M., Goodman J., 2004;

Ensinck A. et al., 2006), описано влияние некоторых веществ на эритрофагоцитоз (Bra tosin D., Mazurier J., Debray H., 1995;

Beppu M. et al., 2001 a, b, c). Од нако физиологическая роль эритродиереза, механизмы и регуляция процесса элиминации эритроцитов во многом остаются неясными.

В настоящее время уделяется большое внимание оксиду азота (NO) как одному из основных факторов регуляции различных физио логических процессов. Оксид азота – биологически активное соеди нение, короткоживущий свободный радикал с высокой проникающей способностью (Журавлева И. А., Мелентьева И. А., Виноградов Н. А., 1997). Источником этого вещества являются азотсодержащие соеди нения, широко распространенные в народном хозяйстве, применяе мые в качестве пищевых добавок, содержащиеся в некоторых лекар ственных препаратах, используемых при лечении заболеваний сер дечно-сосудистой системы (Лупанов В. П., 2006;

Стуров Н. В., Мак симкин Д. А., 2008). Известно влияние оксида азота на течение раз личных физиологических процессов. Доказана его роль в регуляции сердечно-сосудистой, иммунной, нервной, дыхательной и других сис тем организма (Салова Л. М., Плеханова Н. Г. 2006;

Ignarro L. J. et al., 1999;

Gerlach H. et al., 2003;

Kuwai T., Hayashi J., 2006;

Erusalimsky J.

D., Moncada S., 2007). Существует мнение о значении NO как универ сального медиатора физиологических процессов (Wennmalm A., Ben thin G., Peterson A., 1992). Однако вопрос об участии оксида азота в регуляции эритроцитарного равновесия исследован недостаточно.

Данные о значении NO в механизме клеточного эритродиереза не многочисленны и во многом противоречивы (Tsujita R., Shiraishi T., Kakinuma K., 1997;

Ke X. et al., 2001;

Kusmartsev S. A., Danilets M. G., Belskaya N. V., 2003;

Aleksieieva I. M. et al., 2005). Поэтому актуаль ным представляется изучение роли оксида азота в осуществлении межклеточных взаимодействий в процессах деструкции эритроцитов.

Существенные преобразования эритрона в ранний постнатальный период (Назаpов С. Б., Гоpожанин Л. С., 1996;

Новожилов А. В., Ка тюхин Л. Н., 2008) определяются значительными особенностями эри тропоэза и эритродиереза. Транзиторное снижение параметров пери ферической крови, получившее название «ранней анемии» (Halvorsen K., Halvorsen S., 1973), происходит в результате сочетанных измене ний процессов образования и разрушения эритроцитов, одно из кото рых – усиление гемолиза, способствующее разрушению как феталь ных эритроцитов, так и образованных после рождения (Васку рян А. К., Манакова Т. Е., Карташов А. Г., 1993;

Hermle T. et al., 2006). Эритроциты новорожденных более подвержены и спонтанному апоптозу, и спровоцированному оксидативным стрессом (Hermle T. et al., 2006). Возможно, активация эритродиереза обеспечивает элими нацию неполноценных клеток, образованных в предшествующие воз растные периоды (Новожилов А. В., 2009;

Edoh D., Antwi-Bosaiko C., Amuzu D., 2006). При наличии немногочисленных данных о меха низмах изменения интенсивности эритропоэза (Горожанин Л. С., 1996;

Sanengen T. et al., 1987a) состояние, значение и физиологиче ские механизмы гемолиза в раннем постнатальном онтогенезе прак тически не исследованы. Тем не менее, оценка параметров эритрона и его возрастных преобразований невозможна без характеристики эритродиереза.

Формирование физиологических систем потомства во многом за висит от состояния организма матери во время беременности. Пока затели эритрона в системе мать-плод были предметом ряда исследо ваний. Воздействие гипоксии при беременности приводит к развитию эритроцитоза у новорожденных (Bacon B. J. et al., 1984). По другим данным, хроническая внутриутробная гипоксия сопровождается за держкой внутриутробного развития и снижением показателей эри трона новорожденного (Бахмутова Л. А., Штепо М. В., Лапеко С. В., 2006). Дефицитная анемия беременных является фактором риска раз вития перинатальной патологии, в том числе, сопровождается анеми ей у новорожденных (Гущин И. В., 1986). Исследования, проводимые в нашей лаборатории, позволили выявить зависимость процессов эритродиереза плода и новорожденного от функционального состоя ния организма матери во время беременности в условиях измененной двигательной активности (Назаров С. Б., 1995;

Назаров С. Б., Горо жанин Л. С., 1996). Тем не менее, вопрос о зависимости эритродиере за потомства от функционального состояния организма матери во время беременности остается открытым. Учитывая важное физиоло гическое значение оксида азота в регуляции различных физиологиче ских механизмов, для характеристики постнатального становления эритроцитарного равновесия необходимо оценить влияние метаболи тов NO на эритрон растущего организма, что позволит выявить осо бенности его физиологического и повреждающего действия в услови ях незавершенного развития системы крови. Целесообразным являет ся изучение как непосредственного действия оксида азота на эритро диерез растущего организма, так и опосредованного влияния в функ циональной системе мать-плод, что представляет собой важную на учно-практическую задачу, актуальную не только для физиологии, но также для акушерства и педиатрии. Воздействие на материнский ор ганизм экстремальных факторов различной этиологии отражается на развитии потомства и проявляется отдаленными нарушениями в по стнатальный период (Резников А. Г. и др., 2004;

Булыгина В. В. и др., 2006;

Igosheva N. et al., 2004). Прямых доказательств влияния прена тального стресса на эритродиерез в доступной литературе нами не обнаружено. Данные о состоянии эритродиереза потомства матерей, подвергавшихся стрессу во время беременности, позволят более пол но охарактеризовать развитие эритрона в постнатальном периоде, раскрыть некоторые механизмы его адаптации и повреждения.

Цель работы Установить закономерности клеточного эритродиереза у белых крыс и его NO-опосредованной регуляции;

выявить особенности кле точного эритродиереза в раннем постнатальном онтогенезе в зависи мости от состояния организма матери во время беременности и лак тации.

Задачи исследования 1. Дать характеристику клеточного эритродиереза у белых крыс в норме и при некоторых изменениях функционального состояния эри трона (полицитемия, острая кровопотеря).

2. Выявить эффекты оксида азота на процесс клеточного эрит родиереза.

3. Дать морфофункциональную характеристику процессов эрит родиереза в раннем постнатальном онтогенезе крыс.

4. Охарактеризовать влияние острой нитритной интоксикации на состояние клеточного эритродиереза в раннем постнатальном онтоге незе крыс.

5. Выявить особенности эритродиереза потомства крыс, подверг нутых во время беременности и лактации хронической нитритной ин токсикации.

6. Показать особенности эритродиереза потомства крыс, пере несших иммобилизационный стресс во время беременности.

Концепция Клеточный эритродиерез как фактор поддержания эритроцитар ного равновесия в норме и при изменении функционального состоя ния эритрона крыс реализуется при участии NO-опосредованных ме ханизмов. Оксид азота оказывает стимулирующее влияние на эрит рофагоцитоз in vitro в зависимости от концентрации донатора (L-аргинина и нитропруссида натрия), действуя как на макрофаги, так и на эритроциты. В раннем постнатальном онтогенезе гемолиз обес печивает элиминацию эритроцитов с неадекватными морфофункцио нальными свойствами, способствуя становлению эритропоэза. Эрит родиерез у потомства зависит от функционального состояния матери во время беременности и лактации (хронической нитритной интокси кации, иммобилизационного стресса), определяющего особенности адаптации эритрона крысят, наиболее чувствительного к действию адаптогенных факторов в критические периоды развития.

Научная новизна На основании полученных результатов показана физиологическая роль эритродиереза в поддержании эритроцитарного равновесия взрослого и развивающегося организма, подтверждено значение ге молиза как фактора стимуляции эритропоэтической функции красно го костного мозга.

В экспериментах in vitro доказано стимулирующее влияние окси да азота на эритродиерез. Выявлены особенности дозозависимого действия на эритрофагоцитоз L-аргинина и нитропруссида натрия, в малых количествах обладающих выраженным активирующим эффек том без существенного его нарастания при увеличении концентрации.

Показано, что влиянию оксида азота подвержены и эритроциты, и макрофаги. Стимулирующий эффект на макрофаги проявляется лишь увеличением их адгезионных свойств, тогда как взаимодействие про изводных NO с эритроцитами приводит к значительной активации всех стадий процесса фагоцитоза.

Проведено изучение становления эритрона в раннем постнаталь ном онтогенезе крыс с системных позиций. Исследовано состояние периферической крови, процессы эритропоэза и эритродиереза, что позволило выявить особенности эритроцитарного равновесия в дина мике постнатального развития эритрона и показать роль эритродиере за в его формировании: клеточный гемолиз обеспечивает элимина цию неполноценных эритроцитов, одновременно способствуя ста новлению эритропоэтической функции костного мозга.

Выявлены особенности адаптации эритрона к острой нитритной интоксикации в раннем постнатальном онтогенезе, установлены пе риоды наибольшей чувствительности к повреждающему действию производных оксида азота.

Дана комплексная оценка эффектов хронической нитритной ин токсикации на эритрон потомства матерей, получавших нитрит на трия в период беременности и лактации.

Показано, что у крысят, матери которых во время беременности подвергались иммобилизационному стрессу, снижена активность клеточного эритродиереза на фоне общей тенденции к замедлению развития эритрона.

Установлено, что как в норме, так и при действии адаптогенных факторов наиболее уязвимым периодом эритроцитарного системоге неза является 21-й день жизни крысят, когда происходят преобразо вания эритропоэза и эритродиереза, существенно влияющие на фор мирование эритрона и во многом определяющие характер его адапта ции.

Дополнены представления о гематологических критериях стрес са, которые кроме типичных симптомов включают в себя трансфор мацию эритроцитов по эхиноцитарному типу у интактных взрослых крыс, а также лейкопению и снижение показателя гематокрита у бе ременных животных.

Теоретическая и практическая значимость Полученные данные дополняют представления о клеточных ме ханизмах эритродиереза и его физиологическом значении у взрослого и развивающегося организма, позволяют на новом уровне охаракте ризовать развитие эритрона в постнатальном периоде, раскрыть неко торые механизмы его адаптации и повреждения в зависимости от со стояния материнского организма во время беременности и лактации, создать теоретическую основу антенатальной профилактики наруше ний формирования эритрона и их коррекции в постнатальный период.

Реализация результатов исследования Основные результаты исследования используются: в лекционном курсе кафедр нормальной физиологии (Акты внедрения «Возрастные особенности эритродиереза», «Особенности эритродиереза растущего организма, подвергнутого пренатальному стрессу», «Особенности клеточного эритродиереза при острой кровопотере и полицитемии»

от 17 октября 2011г), патофизиологии и иммунологии (Акт внедрения «Влияние нитритной интоксикации на эритрон в ранний постнаталь ный период» от 17 октября 2011г) ГБОУ ВПО «Ивановская государ ственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации;

кафедры физиологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Ивановский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Феде рации (Акт внедрения «Участие оксида азота в регуляции эритродие реза у крыс» от 1 декабря 2011г.);

работе научно-исследовательской лаборатории биохимии и хроматографии НИЦ ГБОУ ВПО «Иванов ская государственная медицинская академия» Министерства здраво охранения и социального развития Российской Федерации (Акт вне дрения «Концентрация нитрит-ионов как показатель суммарного со держания производных оксида азота в ранний постнатальный период у крыс в норме и при хронической нитритной интоксикации» от октября 2011г).

Апробация диссертации Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XVII съезде Всероссийского физиологического общества имени И. П.

Павлова (Ростов-на-Дону, 1998);

3 Всероссийском международном симпозиуме «Физиологические механизмы природных адаптаций»

(Иваново, 1999);

Пироговской межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2000);

XVIII съезде Всерос сийского физиологического общества имени И. П. Павлова (Казань, 2001);

II Российской конференции молодых ученых с международ ным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической ме дицины» (Москва, 2001);

Международной конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященной 75-летию со дня рождения А. М. Уголева (Санкт-Петербург, 2001);

III Всероссий ской конференции с международным участием «Механизмы функ ционирования висцеральных систем», посвященной 175-летию со дня рождения Ф. В. Овсяникова (Санкт-Петербург, 2003);

XIX съезде фи зиологического общества им. И. П. Павлова (Екатеринбург, 2004);

I съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, Дагомыс, 2005);

Международной научной конференции «Актуальные проблемы адаптации организма в норме и патологии» (Ярославль, 2005);

IV научно-практической конференции «Природа и человек.

Антропогенное воздействие на окружающую среду» (Иваново, 2005);

XX съезде Всероссийского физиологического общества имени И. П.

Павлова (Москва, 2007);

4-й Всероссийской конференции «Иммуно логия репродукции» (Пермь, 2010);

XI международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» «Научные и прикладные аспек ты концепции здоровья и здорового образа жизни» (Москва, 2010);

Научно-практической конференции «Актуальные вопросы педиат рии, акушерства и гинекологии» (Тернополь, 2011);

15-й междуна родной научно-практической конференции «Клинические и фунда ментальные аспекты репродуктивных проблем и здоровья женщины»

(Кемерово, 2011);

XVI Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Париж, Франция, 2011).

По теме диссертации опубликовано 37 научных работ.

Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов и списка литературы, включающего 204 русскоязычных источника и 345 источников на иностранных языках. Работа иллюстрирована таблицами и 85 рисунками, изложена на 308 страницах машинопис ного текста.

Положения, выносимые на защиту 1. Эритродиерез имеет важное значение в поддержании эритро цитарного равновесия как у взрослых крыс, так и в раннем постна тальном периоде.

2. В регуляции клеточного эритродиереза участвует оксид азота, способствующий дозозависимой активации эритрофагоцитоза.

3. Эритродиерез потомства в раннем постнатальном онтогенезе крыс зависит от функционального состояния матери в период бере менности и лактации.

4. В ранний постнатальный период наблюдаются особенности ре активности эритрона, связанные с наличием критических периодов его развития.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследования В экспериментах использовано 178 взрослых нелинейных крыс самок массой 180–200г и 573 крысенка 1–28 дней жизни. Для получе ния животных с датированным сроком беременности использовался метод вагинальных мазков (Дыбан А. П. и др., 1975). Животные со держались в условиях вивария с соблюдением основных зоогигиени ческих требований (Западнюк И. П. и др., 1983), получали сбаланси рованный рацион питания, имели свободный доступ к воде. Контроль общего состояния животных осуществлялся по массе тела, концен трации лейкоцитов в периферической крови, лейкоцитарной форму ле.

Исследовался клеточный состав периферической крови. Концен трации эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови опреде лялись стандартными способами в камере Горяева. Для определения концентрации гемоглобина применялся унифицированный гемигло бинцианидный метод с использованием гемоглобинометра ГФЦ-04.

Определение гематокрита производилось микрометодом с использо ванием гепаринизированных капилляров (производство фирмы "Medata АВ", Швеция) и центрифуги МЦГ-8. При подсчете количест ва ретикулоцитов использовался стандартный способ окраски мазков крови бриллианткрезилблау. Лейкоцитарная формула и процент ок сифильных нормоцитов определялись в мазках крови, окрашенных азур-2-эозином по Романовскому. Абсолютное содержание эозино филов подсчитывалось с помощью камеры Горяева (Пиралишви ли И. С., 1962).

Для более детальной характеристики морфофункциональных особенностей циркулирующих эритроцитов производился расчет их морфометрических параметров: среднего содержания гемоглобина в эритроците (ССГЭ), средней концентрации гемоглобина в эритроците (СКГЭ), среднего объема эритроцита (СОЭр) (Любина А. Я. и др., 1984), исследовалась кислотная, глицериновая, осмотическая, пере кисная и механическая резистентность мембраны. Для оценки спо собности эритроцитов противостоять воздействию 0,004Н раствора соляной кислоты (Гительзон И. И., Терсков И. А., 1959), 0,3М рас твора глицерина (Ефименко А. М., Ширяев В. В., Купреенко В. И., 1980), пониженного осмотического давления (Valbonesi M. et al., 1983) при помощи специального устройства, состоящего из термоста тируемой кюветы (в ней поддерживалась температура 24° C), ультра термостата УТ-15, фотоэлектроколориметра ФЭК-56М, регистри рующего потенциометра КСП-4, регистрировалась кинетика разру шения красных клеток крови. Перекисная резистентность исследова лась с использованием тест-набора для определения перекисного ге молиза (НПО "Реакомплекс", Чита). Для оценки механической стой кости эритроцитов использовалось механическое воздействие с при менением магнитной мешалки. Определение степени гемолиза в обо их случаях производилось с помощью фотоэлектроколориметра КФК-4. Как один из критериев оценки структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов исследовалась их поверхностная ци тоархитектоника (Козинец Г. И., Симварт Ю. А., 1984). Условия фик сации эритроцитов для последующего исследования их формы были оптимизированы нами в специальной серии исследований (Миронова А. А. и др., 1994). Подсчет клеток производился с исполь зованием фазово-контрастного светового микроскопа "Люмам-P1" под иммерсией.

Для оценки биохимических свойств мембраны эритроцитов оп ределялось соотношение холестерин/фосфолипиды и уровень пере кисного окисления липидов (ПОЛ). Анализ липидных фракций про изводился по данным тонкослойной хроматографии эритроцитов с использованием пластин с силикагелем (Ростовцев В. Н., Резник Г. Е., 1982). ПОЛ оценивалось по содержанию малонового диальде гида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК). Наличие МДА определяли в реакции с тиобарбитуровой кислотой, ДК – спектрофотометриче ским методом (Ржевская О. Н., Коровина Н. А., 1984). Исследование биохимических свойств мембраны эритроцитов проведено совместно с сотрудниками лаборатории биохимии и хроматографии НИЦ ГБОУ ВПО ИвГМА Минздрава России.

Для оценки клеточных механизмов эритродиереза использована методика исследования клеточного гемолиза in vitro в краткосроч ных культурах макрофагов с аутологичными эритроцитами (Федоро ва М. Ю., Назаров С. Б., 1996;

Mantovani B., 1987). Интенсивность внутриклеточного гемолиза оценивалась по проценту макрофагов, образующих розетки с разным количеством эритроцитов. Для харак теристики завершенного фагоцитоза проводилась бензидиновая реак ция на внутриклеточный гемоглобин (Хейкоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983). В специальной серии экспериментов совместно с Мясоедовой Е. Е. исследовали особенности и механизмы влияния оксида азота на фагоцитоз эритроцитов перитонеальными макрофагами. Исследова ние проводилось в специальных боксах для культур клеток (БП-4 005). 100, 400 и 800 мкмоль/л растворы L-аргинина служили источ никами эндогенного оксида азота (Ignarro J., Buga G. M., Wood K. S., 1987;

Ischiropoulos H. et al., 1992). В качестве донатора экзогенного оксида азота применяли растворы нитропруссида натрия в концен трациях 10, 100, 1000 мкмоль/л (Ванин А. Ф., 2000;

Викторов И. В., 2000;

Осипов А. Н. и др., 2000;

Ignarro J., Buga G. M., Wood K. S., 1987;

Radomski M. W., Palmer R. M., Moncada S., 1990). Для уточне ния локализации эффекта оксида азота осуществляли дифференциро ванное воздействие раствора нитропруссида натрия с концентрацией 100 мкмоль/л на эритроциты и перитонеальные макрофаги, которые затем инкубировали с соответствующими интактными клетками.

Определение содержания нитрат-ионов в биологических жидко стях производилось с помощью метода потенциометрического иссле дования (Скуг Д., Уэст Д., 1979) при использовании ионоселективно го электрода (НИИ химии СПГУ) на иономере ЭВ-74. Концентрацию нитрит-ионов исследовали как суммарный показатель содержания нитратов и нитритов в сыворотке крови с использованием методики восстановления нитрат-ионов и окрашивания реактивом Грисса (Mi randa K. M., Espey M. G., Wink D. A., 2001). Последующее определе ние производилось с помощью спектрофотометра. Исследование со держания метаболитов оксида азота проведено совместно с сотруд никами лаборатории биохимии и хроматографии НИЦ ГБОУ ВПО ИвГМА Минздрава России.

Для создания модели острой постгеморрагической анемии прово дилось кровопускание из подъязычной вены в объеме 2,5% от массы (Ивасивка С. В. и др., 1989). Экспериментальная полицитемия вос производилась двукратным, с интервалом 24 часа, введением 80% суспензии эритроцитов внутрибрюшинно в количестве 2% массы те ла (Байшукурова А. К., 1980). Через сутки после кровопотери и по следней трансфузии эритроцитов оценивали концентрацию эритро цитов, гемоглобина, содержание ретикулоцитов, гематокрит, концен трацию лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, поверхностную цито архитектонику эритроцитов, эритрофагоцитарную активность пери тонеальных и селезеночных макрофагов, концентрацию нитрат-ионов в перитонеальной жидкости, суспензии селезеночных клеток, крови, супернатанте культур перитонеальных и селезеночных макрофагов после культивирования их с аутологичными эритроцитами.

Для воспроизведения острой нитритной интоксикации крысятам 5, 14, 21 и 28 дней жизни подкожно вводили раствор нитрита натрия из расчета 50 мг/кг (Овчинников В. В., 1967;

Гоженко А. И., Дорен ский В. С., Рудина Е. И., 1996;

Реутов В. П. и др., 1997). Через час по сле введения определяли концентрацию эритроцитов, гемоглобина, гематокрит, содержание ретикулоцитов, исследовали поверхностную цитоархитектонику эритроцитов, фагоцитарную активность перито неальных макрофагов, концентрацию нитрат-ионов в гемолизате кро ви.

При создании модели хронической нитритной интоксикации ма тери крысят экспериментальной группы с первого дня беременности и в течение всего периода лактации получали 0,2% раствор нитрита натрия вместо питьевой воды (Roth A. C. et al., 1987). В 5, 14, 21 и дней жизни у крысят исследовали концентрацию эритроцитов, гемо глобина, гематокрит, содержание ретикулоцитов, поверхностную ци тоархитектонику эритроцитов периферической крови, фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов. В сыворотке крови измеря ли содержание нитрит-ионов.

Иммобилизационный стресс моделировался путем ежедневной 2,5-часовой иммобилизации в индивидуальных пластиковых клетках пеналах в течение всей беременности (Серова Л. В., 1988). Для оцен ки реактивности беременных крыс к стрессу в 1-й, 5-й, 10-й, 15-й и 20-й дни беременности у животных опытной и контрольной групп определялись следующие показатели периферической крови: концен трация лейкоцитов, лейкоцитарная формула, концентрация эозино филов, концентрация эритроцитов, концентрация гемоглобина, пока затель гематокрита, содержание ретикулоцитов. Эритрон потомства крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу, исследовался в 1-й, 5-й, 10-й, 21-й и 28-й дни жизни, все показатели сравнивались с аналогичными параметрами крысят контрольной группы и контроль ной группы взрослых животных.

Забор крови у взрослых крыс для исследования состава перифе рической крови и резистентности мембраны эритроцитов к гемолити ческим воздействиям производился из насечки хвоста, в других слу чаях – из подъязычного венозного сплетения. Забор крови у крысят производился из общего кровотока после декапитации. В качестве антикоагулянта использовался C-гепариноид ("Спофа", Чехия). Эвта назия осуществлялась посредством дислокации шейных позвонков.

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием электронных таблиц Excel, Statistica. Рассчитыва лись среднее арифметическое, среднее квадратическое отклонение, ошибка среднего;

достоверность различий между выборками оцени валась при помощи t-критерия Стьюдента (Лакин Г. Ф., 1980). В ряде случаев для выявления достоверности различий использовались не параметрические критерии. Проводился анализ парных коэффициен тов корреляции.

Особенности клеточного эритродиереза у крыс в условиях нарушения эритроцитарного равновесия Острая постгеморрагическая анемия характеризуется значитель ным снижением концентрации эритроцитов, гемоглобина, гематокри та. Увеличивается относительное и абсолютное содержание ретику лоцитов, отрицательно коррелируя с концентрацией гемоглобина и гематокритом. Это обусловлено ускоренным выходом эритроцитар ных клеток из красного костного мозга (Al-Huniti N. H. et al., 2005) и, как правило, сопровождается появлением эритроцитов с измененны ми свойствами, приводя к их ускоренной элиминации, что может усу губить анемию (Chan J. Y. et al., 2001). Выявлено уменьшение СОЭр при неизменном ССГЭ и увеличении СКГЭ, отражающее повышение плотности клетки в результате дегидратации (С. Б. Назаров, Л. С. Го рожанин, 1996), что является одним из признаков старения (Bookchin R. M. et al., 2000). Полицитемия проявляется значительным увеличе нием концентрации эритроцитов, гемоглобина, гематокрита с одно временным выраженным снижением относительного и абсолютного содержания ретикулоцитов.

Острая кровопотеря и полицитемия сопровождаются аналогич ными неспецифическими изменениями лейкоцитарного состава кро ви, характеризующими стресс-реакцию, возникающую при данных функциональных состояниях (Горизонтов П. Д., Белоусова О. И., Фе дотова М. И., 1983). В том и в другом случае наблюдаются относи тельные нейтрофилез и лимфоцитопения. При острой кровопотере также уменьшается процент эозинофилов. Изменения поверхностной цитоархитектоники тоже имеют неспецифический характер. Так, при кровопотере возрастает содержание обратимо деформированных эритроцитов с гребнем на фоне повышения индекса обратимости (ИО). При полицитемии значительно уменьшается процент дискоци тов, увеличивается содержание эритроцитов с множественными вы ростами из группы обратимо деформированных и ИО. Эхиноцитар ная трансформация эритроцитов является наиболее частым морфоло гическим признаком старения (Bessis M., Lessin L. S., 1970). Однона правленные изменения формы эритроцитов могут отражать особен ности проявления общего адаптационного синдрома со стороны сис темы крови. С другой стороны, могут быть следствием ускоренного эритропоэза при постгеморрагической анемии или являться резуль татом повреждающего действия производных оксида азота.

Полученные данные демонстрируют существенные различия эритрофагоцитарной активности перитонеальных и селезеночных макрофагов и могут свидетельствовать о неодинаковом функцио нальном значении NO в их активации (рис. 1).

% * * * 30 * 20 * * 1 2 3 4 5 6 7 Параметры эритрофагоцитоза перитонеальные макрофаги селезеночные макрофаги Рис. 1. Эритрофагоцитарная активность перитонеальных и селе зеночных макрофагов у крыс Примечание: по оси абсцисс – макрофаги, не образующие розеток (1), образующие розетки 1-го (2), 2-го (3), 3-го (4), 4-го (5) типа, нефаго цитирующие макрофаги (6), макрофаги с фагосомами (7), макрофаги с включениями (8);

* – статистически значимые различия (p 0,05).

Активность селезеночных макрофагов у интактных крыс выше, чем перитонеальных, что находит отражение в достоверно меньшем количестве селезеночных макрофагов, не образующих розеток, боль шем содержании макрофагов, образующих розеткоподобные струк туры с 3-мя и более эритроцитами, а также меньшем проценте мак рофагов, не участвующих в эндоцитозе, и большей доле макрофагов с фагосомами.

Постгеморрагическая анемия сопровождается устранением ука занных различий вследствие некоторого повышения способности пе ритонеальных макрофагов к адгезии и эндоцитозу, а также тенденции к уменьшению активности селезеночных макрофагов. Это подтвер ждается наличием отрицательной корреляционной связи между со держанием перитонеальных макрофагов с включениями гемоглобина в цитоплазме и показателями красной крови (концентрацией гемо глобина, гематокритом). Концентрация эритроцитов прямо коррели рует с количеством не образующих розеток селезеночных макрофа гов и обратно – с содержанием селезеночных макрофагов с включе ниями, что свидетельствует о значении эритропении в механизме поддержания активности клеточного эритродиереза. Прямая корреля ционная зависимость процента перитонеальных макрофагов с вклю чениями от относительного содержания ретикулоцитов подтверждает предположение о появлении неполноценных клеток, способствую щих увеличению активности клеточного гемолиза.

Через сутки после острой кровопотери уменьшается концентра ция нитрат-ионов в исследуемых жидкостях, отрицательно коррели руя с показателями фагоцитарной активности перитонеальных и селе зеночных макрофагов. Это, возможно, связано с истощением NO продуцирующих систем. Прямые корреляционные связи концентра ции эритроцитов и содержания нитратов в крови, супернатанте куль тур перитонеальных и селезеночных макрофагов с аутологичными эритроцитами позволяют предположить уменьшение концентрации нитратов вследствие снижения количества эритроцитов, в норме обеспечивающих депонирование и транспорт метаболитов оксида азота (Dejam A. et al., 2005;

Rifkind J. M. et al., 2009).

При полицитемии фагоцитарная активность селезеночных мак рофагов снижается, что проявляется уменьшением процента розеток 1-го типа и макрофагов с фагосомами. Активность перитонеальных макрофагов не изменяется. Вероятно, их розеткообразующая способ ность поддерживается увеличением содержания обратимо трансфор мированных эритроцитов, о чем можно судить на основании прямой корреляционной связи процента розеток 2-го и 3-го типа с индексом трансформации (ИТ) и индексом обратимой трансформации (ИОТ).

Различия фагоцитарной способности перитонеальных и селезеночных макрофагов при полицитемии отсутствуют. Уменьшение эритрофа гоцитарной активности селезеночных макрофагов, имеющих большое значение в реализации механизмов клеточного эритродиереза в цело стном организме, по-видимому, отражает общую тенденцию к сни жению интенсивности гемолиза при полицитемии. Это подтверждает мнение о ведущей роли эритродиереза как фактора дополнительной стимуляции эритропоэтической активности красного костного мозга и относительно меньшем участии этого процесса в восстановлении эритроцитарного равновесия при полицитемии. Полицитемия сопро вождается значительным увеличением концентрации нитрат-ионов в исследуемых жидкостях, что, возможно, обусловлено антигенной стимуляцией макрофагов чужеродными эритроцитами (Moncada S., Palmer R. M. J., Higgs E. A., 1991). Это подтверждается обратной кор реляционной взаимосвязью между концентрацией нитратов в крови и процентом селезеночных макрофагов, не содержащих фрагментов гемоглобина. Нельзя исключить, что увеличение количества оксида азота может отражать развитие тканевой гипоксии в результате кри тического возрастания вязкости крови при полицитемии.

Влияние оксида азота на клеточный эритродиерез in vitro L-аргинин, эндогенный предшественник оксида азота, вызывает дозозависимый стимулирующий эффект. Выраженность эффекта воз растает при увеличении концентрации вещества, что отражается в ос новном на розеткообразующей способности макрофагов. Так, 100 мкмоль/л раствор способствует активации как начальных, так и заключительных этапов фагоцитоза. Это проявляется уменьшением процента розетконеобразующих макрофагов, увеличением количест ва розеток с 1-го типа, снижением количества макрофагов без бензи дин-позитивного материала, увеличением доли макрофагов с фагосо мами и гемоглобиновыми включениями. L-аргинин в концентрации 400 мкмоль/л вызывает более выраженное уменьшение количества макрофагов, не образующих розеток. Общее количество адгезирую щих макрофагов увеличивается вдвое, тогда как в предыдущем слу чае увеличение составляет 1,6 раза по сравнению с контролем. По вышение концентрации L-аргинина в культуральной среде (800 мкмоль/л) приводит к дальнейшему увеличению степени адгезии эритроцитов макрофагами. Количество розеток 1-го, 2-го и 3-го типа достоверно превышает эффект L-аргинина в концентрации 100 мкмоль/л. Увеличивается по сравнению с контролем количество розеткоподобных структур не только 1-го, но и 2-го типа. В то же время используемые концентрации L-аргинина практически не влия ют на способность макрофагов адгезироваться к стеклу.

Использование нитропруссида натрия как экзогенного донатора оксида азота также выявило его стимулирующее действие на эритро фагоцитоз. Раствор в минимальной концентрации вызывает актива цию как адгезии, так и эндоцитоза (увеличение количества розеток 1-го типа, количества макрофагов с фагосомами и гемоглобиновыми включениями). Наблюдаемое снижение числа розеток 2-го и 4-го ти па может быть связано с активацией внутриклеточной фазы фагоци тоза, поскольку макрофаги в стадии эндоцитоза при данном способе окраски воспринимаются как неактивные клетки. Однако более высо кие концентрации вещества стимулируют только начальные этапы фагоцитоза. Выраженность эффекта нарастает с увеличением концен трации. Процентное содержание макрофагов, образующих розетко подобные структуры с аутологичными эритроцитами, при использо вании растворов нитропруссида натрия в концентрациях 100 и 1000 мкмоль/л возрастает по сравнению с контролем в 1,5 и 1,7 раза соответственно. Тем не менее, показатели завершенного фагоцитоза не отличаются от контроля и снижены в сравнении с результатами для концентрации 10 мкмоль/л.

Нитропруссид натрия (100 мкмоль/л) специфически влияет как на макрофаги, так и на эритроциты. Инкубация макрофагов с нитро пруссидом натрия приводит к активации в основном начальных эта пов эритрофагоцитоза: повышается способность макрофагов адгези роваться к стеклу и образовывать розеткоподобные структуры с 1-2-мя аутологичными эритроцитами. Инкубация макрофагов в сре де, содержащей оксид азота, повышает их рецепторную чувствитель ность за счет увеличения уровня циклогуанозинмонофосфата (цГМФ) (Bromberg Y., Pick E., 1980). Показатели более поздних этапов фаго цитоза существенно не изменяются, хотя процент макрофагов, не со держащих бензидин-позитивного материала, уменьшается в сравне нии с контролем. Значительная активация адгезии и эндоцитоза про исходит в результате влияния NO на эритроциты. Эффект обработки нитропруссидом натрия эритроцитов проявляется уменьшением ко личества розетконеобразующих макрофагов, увеличением процента розеток 1-го типа. Все характеристики внутриклеточного этапа сви детельствуют о выраженном повышении активности завершающих стадий фагоцитоза. Вероятно, оксид азота вызывает изменение мем браны эритроцита (Tsujita R., Shiraishi T., Kakinuma K., 1997), являясь индуктором перекисного окисления липидов (Wink D. A., Mitchell J.

B., 1998). Это сопровождается увеличением фагоцитарной активно сти макрофагов (Mantovani B., 1987;

Racca A., Biondi C., Cotorruelo C., 1999).

Характеристика эритродиереза в раннем постнатальном онтогенезе крыс Эритрон интактных новорожденных крысят характеризуется низ кими значениями концентрации эритроцитов (рис. 2), гемоглобина, гематокрита на фоне повышенного содержания ретикулоцитов и ок сифильных нормоцитов, что, наряду с двукратным увеличением СОЭр, является следствием высокой активности эритропоэза в прена тальный период (Mohandas N. et al., 1980;

Новожилов А. В., 2009).

Т/л * * * 3 * * Взр. 1 5 10 21 Возраст (дни) Рис. 2. Концентрация эритроцитов в раннем постнатальном онто генезе крыс Примечание (здесь и на рис. 3–6): * – статистически значимые разли чия с показателем взрослых крыс (Взр.) Кислотная, осмотическая, механическая и перекисная резистент ность эритроцитов однодневных животных превышает параметры взрослых крыс, что, вероятно, связано с увеличением удельного веса молодых клеток в периферической крови. Тем не менее, доля диско цитов снижена (рис. 3), а процент обратимо деформированных эрит роцитов повышен. Количество предгемолитических форм коррелиру ет с содержанием в крови оксифильных нормоцитов.

% 80 * 70 * * Взр. 1 5 10 21 Возраст (дни) Рис. 3. Содержание дискоцитов в раннем постнатальном онтоге незе крыс Высокая концентрация продуктов ПОЛ, отражающая напряже ние липидного метаболизма, прямо корреляционно взаимосвязана с соотношением холестерин/фосфолипиды, что свидетельствует о дес табилизации эритроцитарной мембраны. Выявленные особенности сопровождаются активацией эритродиереза: количество розеток 1-го типа превышает показатель взрослых животных (рис. 4).

Концентрация эритроцитов до 10-го дня жизни практически не изменяется, тогда как происходит уменьшение содержания ретикуло цитов и оксифильных нормоцитов. У 5-дневных крысят высокая ре зистентность эритроцитарной мембраны к растворам соляной кисло ты, глицерина, пониженному осмотическому давлению. Увеличение интенсивности перекисного гемолиза, прямо коррелирующей с кон центрацией ретикулоцитов, свидетельствует о недостаточной антиок сидантной активности незрелых эритроцитов. К 5-му дню жизни про исходит некоторое повышение процента дискоцитов, снижение со держания обратимо деформированных эритроцитов и увеличение концентрации предгемолитических форм. Активность клеточного гемолиза также возрастает, о чем можно судить по увеличению ко личества перитонеальных макрофагов, формирующих розеткоподоб ные структуры с аутологичными эритроцитами.

% 35 * * Взр. 1 5 10 21 Возраст (дни) Рис. 4. Количество макрофагов, образующих розетки 1-го типа в раннем постнатальном онтогенезе крыс В 10 дней жизни концентрация ретикулоцитов достигает своего минимального значения, соответствуя показателю взрослых живот ных. Содержание в крови оксифильных нормоцитов продолжает снижаться. СОЭр и СКГЭ превышают параметры взрослых крыс.

ССГЭ максимально для исследуемого возрастного периода, положи тельно коррелирует с содержанием в крови дискоцитов, отрицатель но – с концентрацией необратимо деформированных эритроцитов, которая, в свою очередь, отрицательно взаимосвязана со СОЭр. Со держание обратимо деформированных клеток имеет тенденцию к снижению, не отличается от показателя взрослых крыс и прямо кор релирует с концентрацией ретикулоцитов. Возможно, молодые эрит роциты в большей степени склонны к обратимой трансформации.

У 10-дневных животных кислотная и осмотическая резистентность повышена, как и в предшествующей возрастной группе. Однако про цент перекисного гемолиза превышает уровень крысят 5-го дня жиз ни, а содержание продуктов ПОЛ максимально, вероятно, вследствие недостаточной эффективности антиоксидантных систем эритроцитов.

В то же время, интенсивность клеточного эритродиереза низкая, о чем свидетельствует увеличение количества нефагоцитирующих мак рофагов и минимальное для исследуемых возрастных групп содержа ние макрофагов с включениями (рис. 5), что может быть связано с улучшением качественного состава популяции эритроцитов.

% * Взр. 1 5 10 21 Возраст (дни) Рис. 5. Количество макрофагов с включениями в раннем постна тальном онтогенезе крыс В постнатальном развитии эритрона белых крыс 21-й день жизни является одним из критических периодов (Назаpов С. Б., Гоpожанин Л. С., 1996). К 21-дневному возрасту происходит нараста ние концентрации эритроцитов и ретикулоцитов, отражая повышение активности эритропоэза, обусловленное качественно новым уровнем регуляции в связи с увеличением выработки эритропоэтина в почках (Peschle C. et al., 1975;

Fricol W., Barone-Varelas J., Barone T., 1982).

На фоне повышенной гемолитической резистентности практически ко всем применяемым воздействиям у 21-дневных крысят выявлена минимальная устойчивость эритроцитарной мембраны к перекисному гемолизу с одновременным снижением содержания продуктов ПОЛ.

Процент дискоцитов и обратимо деформированных эритроцитов не отличается от показателей взрослых животных при повышенном со держании необратимо деформированных клеток. Это сопровождается активацией клеточного гемолиза, о чем свидетельствует увеличение количества макрофагов с гемоглобиновыми включениями.

В 28 дней жизни концентрация эритроцитов, гемоглобина и гема токрит интактных крысят так и не достигают показателей взрослых животных на фоне увеличения содержания ретикулоцитов. Снижают ся показатели кислотной, глицериновой, осмотической и механиче ской резистентности эритроцитов, приближаясь к уровню взрослых животных. Процент перекисного гемолиза по-прежнему повышен, прямо коррелируя с концентрацией эритроцитов и отрицательно – с содержанием ретикулоцитов. Количество продуктов ПОЛ продол жает уменьшаться. Процент дискоцитов снижается, а количество об ратимо деформированных эритроцитов возрастает по сравнению с 21-м днем жизни, не отличаясь при этом от показателей взрослых животных. Отмечается снижение общего количества розеткообра зующих макрофагов, увеличение процента нефагоцитирующих мак рофагов, уменьшение количества макрофагов с фагосомами и вклю чениями, свидетельствуя о снижении активности клеточных меха низмов эритродиереза.

Влияние нитритной интоксикации на эритрон в раннем постнатальном онтогенезе крыс Однократное введение нитрита натрия в дозе 50 мг/кг крысятам исследуемого возрастного периода не приводит к летальному исходу.

В 5-дневном возрасте острая нитритная интоксикация проявляется уменьшением гематокрита (рис. 6), прямо коррелирующим с процен том оксифильных нормоцитов, и снижением относительного содер жания ретикулоцитов. Концентрация нитрат-ионов в гемолизате по вышена. У экспериментальных крысят этой возрастной группы про цент дискоцитов существенно больше контрольного показателя, от рицательно коррелирует с содержанием оксифильных нормоцитов и необратимо деформированных клеток, а ИТ и ИОТ снижены. Воз можно, поддержание концентрации эритроцитов обеспечивается вы ходом их из депо. На фоне меньшей численности клеток предшественников эритроцитов снижается способность макрофагов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами in vitro (рис.7).

% * * * 5 14 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 6. Влияние острой нитритной интоксикации на гематокрит в раннем постнатальном онтогенезе крыс Примечание (здесь и далее): * – статистически значимые различия.

% * 20 * 5 14 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 7. Влияние острой нитритной интоксикации на количество макрофагов, образующих розетки 1-го типа, в раннем постнатальном онтогенезе крыс Это может быть обусловлено как уменьшением количества повреж денных клеток, так и дисфункцией фагоцитов в условиях высокого содержания оксида азота. Выявленное уменьшение процента нейтро филов, возможно, связано с миграцией лейкоцитов в гипоксически поврежденные ткани (Цой Е. М., Коваленко Р. И., Кузьмин Д. А., 2008).

В 14-дневном возрасте острая нитритная интоксикация сопровож дается увеличением концентрации эритроцитов, содержания гемогло бина и показателя гематокрита на фоне большего поступления в крово ток оксифильных нормоцитов и значительного повышения абсолютного содержания ретикулоцитов. В условиях ускоренного выхода из красного костного мозга незрелых форм эритроцитов увеличивается интенсив ность клеточного эритродиереза, что проявляется уменьшением коли чества макрофагов, не образующих розеток, и повышением процента розеток 1-го типа. Наличие положительной корреляционной взаимосвя зи содержания гемоглобина с процентом стоматоцитов, а также обрат ной взаимозависимости между количеством эритроцитов с гребнем и процентом неадгезирующих макрофагов подтверждает активацию ге молиза в связи появлением клеток с измененными морфофункциональ ными свойствами. Вместе с тем продукты гемолиза способствуют под держанию уровня эритропоэза.

В результате инъекции нитрита натрия у 21-дневных крысят снижается гематокрит при одновременном увеличении СОЭр. Про слеживается отрицательная корреляционная связь показателя гема токрита с относительным содержанием ретикулоцитов, процентом макрофагов 1-го типа и с гемоглобиновыми включениями в цито плазме, что указывает на тенденцию к активации как эритропоэза, так и эритродиереза. Этот возраст у крыс наряду с 5 днем жизни является одним из критических периодов становления эритрона, когда он наи более подвержен неблагоприятным влияниям. Наблюдаются лейко пения, возможно, связанная с миграцией лейкоцитов в ткани, и отно сительная эозинофилия, вероятно, являющаяся маркером аллергенно го действия метаболитов NO или продуктов гипоксического повреж дения тканей. В 28 дней введение нитрита натрия не вызывает изме нений эритрона, вероятно, благодаря достаточной зрелости адаптив ных механизмов. Повышается содержание эозинофилов, процент лимфоцитов падает.

Изменения исследуемых показателей у потомства матерей, под вергнутых хронической нитритной интоксикации в период беремен ности и лактации, в отличие от острого эффекта нитрита натрия име ют в основном адаптивный характер и способствуют ограничению действия производных оксида азота на эритрон. В 5-дневном возрасте отмечается высокая эритропоэтическая активность. Это проявляется увеличением количества ретикулоцитов и оксифильных нормоцитов, показатели относительного содержания которых прямо коррелируют.

Одновременно имеет место активация гемолиза: существенное уве личение процента розеток 4-го типа (рис. 8). Концентрация эритроци тов превышает показатель крысят с острой интоксикацией (рис. 9).

Значительное увеличение количества дискоцитов, более выраженное, чем при острой интоксикации, снижение процента обратимо транс формированных клеток, ИТ, ИОТ, ИНОТ (индекса необратимой трансформации) в целом свидетельствует о сбалансированности эритроцитарного равновесия с некоторым преобладанием регенера тивного компонента. Относительные нейтропения, эозинопения, мо ноцитопения могут быть следствием цитостатического эффекта мета болитов NO на уровне красного костного мозга или миграции фаго цитов в ткани (Цой Е. М., 2009).

Благодаря высокой интенсивности эритропоэза, выражающейся в повышенном относительном содержании ретикулоцитов, прямо коррелирующем с их концентрацией, к 14-му дню жизни у крысят опытной группы гематокрит превышает контрольное значение, поло жительно коррелируя с концентрацией эритроцитов.

% * 5 14 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 8. Влияние хронической нитритной интоксикации на коли чество макрофагов, образующих розетки 4-го типа Т/л * * 5 14 21 Возраст (дни) острая интоксикация хроническая интоксикация Рис. 9. Влияние острой и хронической нитритной интоксикации на концентрацию эритроцитов в раннем постнатальном онтогенезе крыс Содержание дискоцитов повышено как по сравнению с нормой, так и с показателем, характеризующим острую интоксикацию, а про цент обратимо деформированных эритроцитов и дегенеративных форм – уменьшен. Концентрации эритроцитов и гемоглобина при хронической нитритной интоксикации ниже, чем при острой, а со держание ретикулоцитов выше (рис. 10). Отмечается увеличение СОЭр при одновременном снижении СКГЭ и неизменном ССГЭ, возможно, вследствие выхода в кровоток макроретикулоцитов с не достаточной степенью гемоглобинизации. В отличие от острой ин токсикации отсутствует увеличение фагоцитарной способности пери тонеальных макрофагов. Это может быть обусловлено более благо приятным качественным составом эритроцитов или нарушением функциональной активности макрофагов. Тем не менее, наличие от рицательной корреляционной связи СОЭр с количеством макрофагов без фрагментов гемоглобина и положительных с процентом эритро цитов с 1 выростом и количеством предгемолитических форм в виде спущенного мяча дает основание предполагать возможную инициа цию гемолиза, направленную на элиминацию эритроцитов с неадек ватными морфофункциональными свойствами. В лейкоцитарной формуле кроме относительной нейтропении и эозинопении выявляет ся лимфоцитоз, являющийся признаком интоксикации.

‰ * 250 * 5 14 21 Возраст (дни) острая интоксикация хроническая интоксикация Рис.10. Влияние острой и хронической нитритной интоксикации на содержание ретикулоцитов в раннем постнатальном онтогенезе крыс Неблагоприятное влияние хронического оксидативного стресса проявляется декомпенсацией адаптационно-приспособительных ре акций, связанной с прохождением эритрона через критический пери од развития. В 21-дневном возрасте, как и при острой интоксикации, гематокрит ниже контрольного значения. Но концентрация ретикуло цитов при хронической интоксикации значительно больше. Содержа ние дискоцитов по-прежнему превышает контрольный показатель на фоне меньшего процента эритроцитов с гребнем, прямо коррели рующего с численностью розеток 3-го и 4-го типа, а также общим ко личеством необратимо деформированных эритроцитов. Концентра ция нитритов в сыворотке крови значительно повышена по сравне нию с контрольным значением. Хроническая интоксикация, как и в предыдущих возрастных группах, проявляется относительной ней тропенией, моноцитопенией и увеличением процента лимфоцитов.

У 28-дневных крысят уже не отмечается негативных изменений эритрона. Поверхностная цитоархитектоника эритроцитов характери зуется особенностями, аналогичными описанным для крысят млад шего возраста: существенно повышен процент дискоцитов за счет уменьшения количества обратимо деформированных клеток, которое меньше как по отношению к контрольному показателю, так и к ана логичному показателю крысят с острой нитритной интоксикацией.

Изменения морфофункциональных свойств эритроцитов можно рас ценивать как проявление долговременной адаптации эритрона. В лей коцитарной формуле сохраняются такие признаки интоксикации как нейтропения и лимфоцитоз.

Особенности эритродиереза в раннем постнатальном онтогенезе крыс как результат формирования эритрона в функциональной системе мать-плод, подвергнутой иммобилизационному стрессу Постиммобилизационное снижение концентрации лимфоцитов и эозинофилов в периферической крови беременных крыс практически во все сроки исследования свидетельствует о стресс-реакции. При на личии в лейкоцитарной формуле абсолютный нейтрофилез отсутст вует в связи с развитием лейкопении и снижением гематокрита. В 5-й день беременности отмечается снижение чувствительности к стрессу (постиммобилизационные изменения концентрации лимфоцитов, эо зинофилов, лейкоцитов и гематокрита не достоверны). Уменьшение специфических показателей в более поздние сроки можно рассматри вать как результат вторичного снижения резистентности, характерное для стадии истощения общего адаптационного синдрома. Это под тверждается тенденцией к уменьшению концентрации лимфоцитов и эозинофилов. Независимо от иммобилизации во второй половине бе ременности снижаются концентрация гемоглобина и гематокрит. У экспериментальных крыс достоверный характер носит и фоновое уменьшение содержания эритроцитов. Отмеченные показатели не опускаются ниже контрольных значений группы взрослых животных и описанных в литературе нормативов красной крови интактных бе лых крыс (Музуров И. В., Власов В. И., Лукачев Н. В., 1989).

У потомства крыс, подвергнутых серии иммобилизаций, при ро ждении снижена масса тела, что отражает влияние пренатального стресса на развитие плода. Содержание гемоглобина (рис. 11) и гема токрит повышены по сравнению с интактными крысятами. Более вы ражен ретикулоцитоз. Концентрация эритроцитов не отличается от контроля, а оксифильных нормоцитов несколько снижена.

г/л * * 140 * 1 5 10 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 11. Влияние пренатального стресса на концентрацию гемо глобина в раннем постнатальном онтогенезе крыс Устойчивость мембраны эритроцитов однодневных крысят к большинству гемолитических факторов соответствует контролю, ки слотная резистентность снижена. Уменьшение процента деформиро ванных эритроцитов, более низкая интенсивность клеточного гемоли за (больший процент макрофагов, не образующих розеток) могут свидетельствовать об улучшении качественного состава популяции эритроцитов (рис. 12).

Концентрация эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, гема токрит снижаются к 5-дневному возрасту при относительно стабиль ном содержании оксифильных нормоцитов. Глицериновая и осмоти ческая резистентность эритроцитов не изменяются, тогда как в кон троле наблюдается их увеличение. Концентрация дискоцитов по прежнему повышена (рис. 13). Снижено содержание МДА в эритро цитах, свидетельствуя о меньшей активности ПОЛ. Интенсивность клеточного гемолиза ниже контрольной (меньше количество макро фагов, образующих розетки).

% * * 1 5 10 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 12. Влияние пренатального стресса на количество макрофа гов, не образующих розеток, в раннем постнатальном онтогенезе крыс % 100 * * * 1 5 10 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 13. Влияние пренатального стресса на содержание дискоци тов в раннем постнатальном онтогенезе крыс В 10 дней жизни концентрация эритроцитов больше средневозра стной (рис. 14). Содержание дискоцитов уменьшается по сравнению с 5-м днем. Концентрация ретикулоцитов повышена вследствие сниже ния контрольного показателя. Относительное содержание ретикуло цитов возрастает, также превышая контроль, а концентрация окси фильных нормоцитов значительно уменьшается.

Т/л * * 1 5 10 21 Возраст (дни) контроль опыт Рис. 14. Влияние пренатального стресса на концентрацию эрит роцитов в раннем постнатальном онтогенезе крыс У 10-дневных крысят по сравнению со средневозрастными пара метрами снижены кислотная резистентность эритроцитов и время 50% (t50) осмотического гемолиза. Интегральный показатель эритро граммы (ИП) и t50 глицеринового гемолиза не отличаются от контро ля, но меньше, чем у взрослых крыс, тогда как параметры интактных крысят соответствуют уровню взрослых. Содержание МДА в эритро цитах возрастает в меньшей степени, чем в контроле. Содержание ДК уменьшается. Меньший уровень перекисного окисления липидов мо жет быть обусловлен большей активностью антиоксидантных фер ментов, что связано с циркуляцией в крови более зрелых клеток. На личие прямой корреляционной взаимосвязи концентрации МДА с со отношением холестерин/фосфолипиды, а также отрицательной связи с интегральным показателем осмотической резистентности эритроци тов свидетельствует о более стабильном состоянии липидного мета болизма красных клеток крови опытных животных.

21-й день жизни экспериментальных крысят характеризуется меньшим увеличением концентрации эритроцитов по сравнению с контролем. Абсолютное содержание ретикулоцитов не отличается от предыдущего срока исследования, тогда как у интактных крысят оно вновь возрастает, что приводит к исчезновению достоверных разли чий. Относительное содержание ретикулоцитов достоверно больше контрольного значения, как и предшествующей возрастной группе.

СОЭр уменьшается, однако превышает средневозрастной показатель.

Эритроциты менее устойчивы в растворах соляной кислоты, глице рина, к осмотическому и перекисному гемолизу. По сравнению с предыдущим исследуемым сроком снижается только перекисная ре зистентность, но содержание продуктов ПОЛ в эритроцитах практи чески не изменяется, не отличаясь от контроля. Содержание дискоци тов возрастает параллельно уменьшению процента необратимо де формированных (предгемолитических) форм. Количество обратимо деформированных клеток не изменяется.

Большинство исследуемых показателей 28-дневных крысят, под вергнутых пренатальному стрессу, соответствует возрастным нормам за исключением меньшей концентрации гемоглобина, более низкой СКГЭ, укорочения t50 глицеринового гемолиза, повышенного процен та перекисного гемолиза, увеличенной концентрации дискоцитов, меньшего содержания обратимо деформированных эритроцитов. По вышение процента дискоцитов сопровождается снижением интен сивности ПОЛ, отрицательно коррелируя с содержанием МДА в мембране. Концентрация ДК более низкая. Изменения, выявленные у крысят, матери которых во время беременности подвергались иммо билизационному стрессу, отражают формирование системного струк турного следа адаптации, что проявляется большей выраженностью и эффективностью эритропоэза у новорожденных и перестройкой кле точного метаболизма на более поздних этапах раннего постнатально го онтогенеза.

ВЫВОДЫ В реализации клеточного эритродиереза у взрослых интактных 1.

крыс большее значение имеют резидентные макрофаги селезенки по сравнению с перитонеальными, что проявляется более выра женной способностью к адгезии и эндоцитозу в реакции эритро фагоцитоза с аутологичными эритроцитами in vitro. Нарушение эритроцитарного равновесия сопровождается исчезновением раз личий фагоцитарной активности перитонеальных и селезеночных макрофагов за счет некоторого повышения роли перитонеальных при кровопотере и снижения активности селезеночных в услови ях полицитемии, отражающего общую тенденцию к уменьшению интенсивности клеточного гемолиза при этом функциональном состоянии.

В регуляции эритрофагоцитоза участвует оксид азота, влияние 2.

которого зависит от концентрации и источника вещества. Эндо генный донатор NO (L-аргинин) в диапазоне концентраций 100–800 мкмоль/л и экзогенный (нитропруссид натрия) в концен трациях 10–1000 мкмоль/л способствуют увеличению фагоцитар ной активности перитонеальных макрофагов in vitro в зависимо сти от количества в культуральной среде. Минимальные концен трации веществ стимулируют как адгезию, так и эндоцитоз ауто логичных эритроцитов. Дальнейшее увеличение содержания предшественников оксида азота в среде сопровождается преиму щественной активацией начальных стадий реакции (адгезии эритроцитов). Причем увеличение адгезионных свойств макрофа гов в присутствии L-аргинина проявляется лишь при наличии эритроцитов как объекта инициации эритрофагоцитоза и не со провождается повышением способности адгезироваться к стеклу.

Стимулирующее влияние экзогенного оксида азота характеризу 3.

ется действием его и на макрофаги, и на эритроциты. Эффект нитропруссида натрия на перитонеальные макрофаги проявляет ся в основном повышением их адгезионной способности, тогда как обработка этим донатором NO эритроцитов приводит к зна чительной активации как адгезии, так и эндоцитоза, что обуслов лено изменением морфофункциональных свойств эритроцитов, представляющих собой фактор естественной стимуляции эрит рофагоцитоза.

В раннем постнатальном онтогенезе у крыс происходят сложные 4.

преобразования эритрона, проявляющиеся изменением процессов продукции и разрушения эритроцитов и связанными с этим осо бенностями состава красной крови. Увеличение резистентности эритроцитарной мембраны к большинству гемолитических фак торов является следствием высокого содержания молодых клеток с низкой антиоксидантной активностью, о чем свидетельствует высокая интенсивность свободнорадикальных процессов. Актив ность клеточного эритродиереза в ранний постнатальный период возрастает параллельно увеличению интенсивности эритропоэза, обеспечивая элиминацию неполноценных клеток и способствуя становлению эритропоэтической функции костного мозга.

21-й день жизни, один из критических периодов постнатального 5.

онтогенеза у крыс, характеризуется повторным увеличением ин тенсивности эритропоэза с образованием эритроцитов, практиче ски не отличающихся по морфометрическим параметрам от эрит роцитов взрослых животных. Одновременная активация эритро диереза способствует элиминации клеток, образованных в пред шествующие возрастные периоды и не соответствующих по сво им свойствам изменившимся потребностям организма.

Адаптация эритрона к острой нитритной интоксикации в раннем 6.

постнатальном онтогенезе у крыс представляет собой комплекс реакций на действие гипоксического стимула, направленный на обеспечение адекватного состава циркулирующих эритроцитов, что достигается оптимальным соотношением процессов эритро поэза и эритродиереза. Острая нитритная интоксикация по разному проявляется у животных разных возрастных групп. Кры сята 5-го дня жизни наиболее чувствительны к повреждающему действию NO и его производных, что сопровождается более вы раженным снижением содержания ретикулоцитов и показателя гематокрита на фоне возрастной депрессии эритропоэза, а также уменьшением адгезионной способности перитонеальных макро фагов. У 21-дневных животных эффект острой нитритной гипок сии проявляется отсутствием стимуляции эритропоэза и умень шением гематокрита.

При хронической нитритной интоксикации у крысят происходят 7.

адаптивные изменения, способствующие повышению резистент ности организма и ограничению неблагоприятного действия про изводных оксида азота на эритрон, что характеризуется увеличе нием интенсивности эритропоэза и стабильности эритроидных клеток с некоторым отставанием активности эритродиереза. В 21 дневном возрасте отмечается срыв адаптационных возможностей эритрона, проявляющийся низким значением показателя гема токрита.

8. Иммобилизационный стресс матери во время беременности влия ет на характер и темпы формирования эритрона потомства. Кон центрация эритроцитов и гемоглобина у потомства матерей, пе ренесших стресс, нарастает более медленно, чем у интактных животных, что свидетельствует о торможении развития эритрона.

Депрессия эритропоэза приводит к развитию эритропении в 21-й день жизни.

9. Эритроциты крысят, матери которых во время беременности под вергались стрессу, характеризуются пониженной резистентностью к гемолитическим факторам, что наиболее выражено в 21-дневном возрасте. Поддержание численности эритроцитарной популяции потомства матерей, подвергнутых во время беременности стрессу, достигается в основном за счет уменьшения интенсивности кле точного эритродиереза, что, в свою очередь, может иметь неблаго приятное значение в связи с недостаточным стимулирующим эф фектом на эритропоэз, приводя к нарушению его функциональной активности и торможению развития эритрона.

10. Нарушение эритроцитарного равновесия у взрослых крыс при острой кровопотере и полицитемии сопровождается характерны ми для стресс-реакции неспецифическими изменениями лейкоци тарного состава периферической крови и эхиноцитарной транс формацией эритроцитов. Гематологический стресс-синдром у бе ременных крыс наряду с типичными лимфо- и эозинопенией включает в себя лейкопению и уменьшение гематокрита.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Факторы, влияющие на поверхностную цитоархитектонику эрит 1.

роцитов в процессе ее исследования / А. А. Миронова, Е. К. Го лубева, О. А. Пахрова, С. Б. Назаров // Клиника, диагностика и лечение микроциркуляторных нарушений при соматических за болеваниях взрослых и детей: сб. науч. трудов. – Иваново, 1994. – С. 21–25.

Динамика показателей красной крови беременных крыс при им 2.

мобилизационном стрессе / Е. К. Голубева // Вестник Иванов ской медицинской академии. – 1996. – Т. 1, № 2. – С. 97.

Влияние иммобилизационного стресса матери во время беремен 3.

ности на гемолитическую резистентность эритроцитов потомст ва / Е. К. Голубева, Л. С. Горожанин, С. Б. Назаров // Вестник Ивановской медицинской академии. – 1997. –Т. 2, № 1–2. – С. 35– 38.

Участие клеточных механизмов эритродиереза в раннем постна 4.

тальном становлении эритрона в норме и у потомства матерей, подвергнутых во время беременности иммобилизации / Е. К. Го лубева, Л. С. Горожанин, С. Б. Назаров // Вестник Ивановской медицинской академии. – 1997. – Т. 2, № 3. – С. 27–31.

Некоторые особенности биохимического состава эритроцитарной 5.

мембраны потомства матерей, перенесших стресс во время бере менности / Е. К. Голубева, Л. С. Горожанин, Л. Л. Хомякова, Э. С. Акайзин, С. Б. Назаров // Вестник Ивановской медицинской академии. – 1997. – Т. 2, № 4. – С. 143.

Функциональная эритроцитарная система и ее исследование в 6.

онтогенезе / С. Б. Назаров, Л. С. Горожанин, О. А. Пахрова, Е. К. Голубева, Л. А. Полумискова, А. Н. Булыгин, Т. А. Блохи на // Матер. XVII съезда Всероссийского физиологического об щества имени И. П. Павлова. – Ростов-на-Дону, 1998. – С. 156.

Особенности гематологических показателей у беременных крыс 7.

при стрессе / Е. К. Голубева, Л. С. Горожанин, С. Б. Назаров // Вестник Ивановской медицинской академии. – 1998. – Т. 3, № 3. – С. 26–28.

Эритродиерез в раннем постнатальном онтогенезе белых крыс в 8.

норме и у потомства матерей, перенесших стресс во время бере менности / Е. К. Голубева // Медико-биологические, клиниче ские и социальные вопросы здоровья и патологии человека: сб.

науч. трудов. – Иваново, 1999. – С. 21–24.

Влияние уровня двигательной активности во время беременности 9.

на развитие эритрона плода и новорожденного у белых крыс / С. Б. Назаров, Л. С. Горожанин, Е. К. Голубева // Физиологиче ские механизмы природных адаптаций: тез. докл. III Всероссий ского международного симпозиума. – Иваново, 1999. – С. 115– 116.

Эритродиерез в раннем постнатальном онтогенезе белых крыс в 10.

норме и у потомства матерей, перенесших стресс во время бере менности / Е. К. Голубева // Вестник Российского государст венного медицинского университета. – 2000. – № 2 (12). – С. 149.

Физиологическая роль оксида азота в регуляции процесса эрит 11.

рофагоцитоза у белых крыс in vitro / Е. Е. Мясоедова, Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Матер. XVIII съезда Всероссий ского физиологического общества имени И. П. Павлова. – Казань, 2001. – С. 169.

Роль оксида азота в механизме фагоцитоза эритроцитов перито 12.

неальными макрофагами у белых крыс in vitro / Е. К. Голубева, Е. Е. Мясоедова // Матер. II Российской конференции молодых ученых с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». – Москва, 2001. – Т. II. – С. 277.

Оксид азота как стимулятор процесса эритрофагоцитоза у белых 13.

крыс in vitro / Е. К. Голубева, Е. Е. Мясоедова, С. Б. Назаров // Материалы международ. конф. «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященной 75-летию со дня рождения А. М. Уголева. – Санкт-Петербург, 2001. – С. 83–84.

Особенности эритродиереза в раннем постнатальном онтогенезе 14.

потомства белых крыс, перенесших стресс во время беременно сти / Е. К. Голубева, Л. С. Горожанин, С. Б. Назаров // Материа лы международ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения А. М. Уголева. – Санкт-Петербург, 2001. – С. 83.

15. Влияние оксида азота на эритрофагоцитоз у белых крыс in vitro / Е. Е. Мясоедова, Е. К. Голубева, О. А. Пахрова, М. В. Пророко ва // Здравоохранение Башкортостана. – 2001. – № 8. – С. 46–48.

16. Влияние нитропруссида натрия на процесс фагоцитоза эритроци тов перитонеальными макрофагами у белых крыс / Е. Е. Мясо едова, Е. К. Голубева, М. В. Пророкова, С. Б. Назаров // Россий ский физиол. журнал им. И. М. Сеченова. – 2002. – Т. 88, № 1. – С. 32–37.

17. Влияние острой кровопотери на состояние клеточного эритро диереза у крыс / Е. К. Голубева, М. В. Казак, С. Б. Назаров // Ма териалы III Всероссийской конференции с международ. участием «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвя щенной 175-летию со дня рождения Ф. В. Овсянникова. – Санкт Петербург, 2003. – С. 74–75.

18. Оксид азота – регулятор внутриклеточных механизмов эритро диереза / Е. К. Голубева, Е. Е. Мясоедова, С. Б. Назаров, М. В. Пророкова // Российский физиол. журнал им. И. М. Се ченова. – 2004. – Т. 90, № 8. – С. 144–145.

19. Характеристика клеточных механизмов эритродиереза после ост рой кровопотери у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Рос сийский физиол. журнал им. И. М. Сеченова. – 2004. – Т. 90, № 8. – С. 135.

20. Влияние острой кровопотери на состояние клеточных механиз мов эритродиереза у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров, М. В.

Казак // Российский физиол. журнал им. И. М. Сеченова. – 2004. – Т. 90, № 9. – С. 1151–1155.

21. Оксид азота как один из факторов регуляции клеточного эритро диереза / С. Б. Назаров, Е. К. Голубева, Е. Е. Мясоедова, А. С.

Иванова, М. В. Пророкова // Научные труды I Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека». – Сочи, Дагомыс, 2005. – Т. 1. – С. 92.

22. Характеристика клеточных механизмов эритродиереза при поли цитемии у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Материалы ме ждународной научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Савелия Соломоновича Полтырева «Актуальные проблемы адаптации организма в норме и патоло гии». – Ярославль, 2005. – С. 15–16.

23. Состояние клеточных механизмов эритродиереза при острой ги поксии у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Природа и чело век: Материалы IV научно-практической конференции «Природа и человек. Антропогенное воздействие на окружающую среду». – Иваново, 2005. – С. 84–86.

24. Влияние полицитемии на состояние клеточных механизмов эри тородиереза и продукцию оксида азота у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Российский физиол. журнал им. И. М. Сечено ва. – 2007. – Т. 93, № 3. – С. 283–288.

25. Влияние оксида азота на активность клеточного эритродиереза / Е. К. Голубева, А. С. Иванова, Е. Е. Мясоедова, О. А. Пахрова, С. Б. Назаров // Матер. XX съезда Всероссийского физиологиче ского общества имени И. П. Павлова. – Москва, 2007. – С. 296.

26. Эритрофагоцитоз в раннем постнатальном онтогенезе у крыс в норме и после перенесенного пренатального стресса / Е. К. Го лубева, С. Б. Назаров // Российский иммунологический жур нал. – 2010. – Т. 4 (13), № 4. – С. 383.

27. Особенности формирования эритрона в условиях хронической перинаталной нитритной интоксикации у крыс / Е. К. Голубева // Матер. XI международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» Научные и прикладные аспекты здоровья и здорового образа жизни». – Москва, 2010. – С. 564–565.

28. Влияние острой нитритной интоксикации на эритрон в раннем постнатальном онтогенезе у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Наза ров // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. XVIII, № 1. – С. 93–95.

29. Влияние хронической нитритной интоксикации матери на эри трон в раннем постнатальном онтогенезе у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Вестник Ивановской медицинской академии. – 2011. – Т. 16, № 1. – С. 15–19.

30. Влияние пренатального иммобилизационного стресса на показа тели клеточного состава периферической крови в раннем постна тальном онтогенезе у крыс / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Врач-аспирант. – 2011. – № 1.2 (44). – С. 260–265.

31. Гематологические особенности потомства крыс, подвергнутых оксидативному стрессу при беременности и лактации / Е. К. Го лубева, С. Б. Назаров // Мать и дитя в Кузбассе. – 2011. – № 1 (44). – С. 24–29.

32. Особенности постнатального эритроцитарного системогенеза крыс в условиях воздействия неблагоприятных факторов в пери од беременности и лактации / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Актуальнi питання педiатрii, акушерства та гiнекологii. – 2011. – № 2 (8). – С. 198–201.

33. Эритрофагоцитоз у потомства белых крыс, подвергаемых хрони ческой нитритной интоксикации в период беременности и лакта ции / Е. К. Голубева, И. К. Томилова, Е. Л. Алексахина // Аллер гология и иммунология. – 2011. – Т. 12, № 1. – С. 49.

34. Морфофункциональные и биохимические свойства эритроцитов в раннем постнатальном онтогенезе крыс в норме и после прена тального стресса / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров, И. К. Томило ва // Российский физиологический журнал им. И. М. Сечено ва. – 2011. – Т. 97, № 7. – С. 725–732.

35. Физиологические механизмы эритродиереза / Е. К. Голубева // Вестник Ивановской медицинской академии. – 2011. – Т. 16, № 3. – С. 56–61.

36. Возрастные особенности резистентности эритроцитарной мем браны крыс к гемолитическим факторам in vitro / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. XVIII, № 4. – С. 93–95.

37. Постнатальные особенности эритродиереза у крыс как результат стрессорного воздействия на систему мать-плод / Е. К. Голубева, С. Б. Назаров // В мире научных открытий. – 2011. – № 9.1 (21). – С. 315–324.



 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.