авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Сравнительно-возрастные аспекты иммунного статуса низших обезьян (макак резусов и павианов гамадрилов)

На правах рукописи

Матуа Алиса Зауровна

Сравнительно-возрастные аспекты

иммунного статуса низших обезьян

(макак резусов и павианов гамадрилов)

03.03.01-Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2010

2

Работа выполнена в Научно-исследовательском Институте Экспериментальной Патологии и Терапии Академии Наук РА (Сухум, Абхазия).

доктор биологических наук, профессор

Научный руководитель:

Колесникова Наталья Владиславовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Полевщиков Александр Витальевич кандидат биологических наук, доцент Коваленко Римма Ивановна

Ведущая организация: Институт Мозга Человека им. Н.П.Бехтеревой РАН (г. Санкт Петербург).

Защита состоится «11» ноября 2010 г. в 16 часов на заседании Совета Д212.232.10 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, ауд.90.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке им. А.М. Горького Санкт Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан « 20 » сентября 2010 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Н.П. Алексеев

Общая характеристика работы

Актуальность темы: Обезьяны, вследствие большого биологического сходства с человеком, являются адекватной экспериментальной моделью для решения многих задач биологии и патологии человека [Лапин Б.А. и др., 1987]. Поскольку в качестве объекта исследования чаще используют низших обезьян Старого Света (макаки резусы и павианы гамадрилы), хорошо размножающихся в питомниках, знание их нормальных биологических показателей особенно важно. Хорошо изучены параметры нервной, кроветворной, эндокринной и других физиологических систем обезьян [Куксова М.И., 1972;

Гончаров Н.П. и др., 1977;

чего нельзя сказать о показателях иммунной. В литературе Lapin B.A., Cherkovich G.M., 1972], отсутствуют работы, в которых комплексно исследованы параметры врождённого и адаптивного иммунитета низших обезьян. Имеющиеся работы посвящены определению отдельных показателей их иммунной системы. [Восканян Н.А., 1970, 1987;

Маркова Т.П., 1980;

Инджия Л.В. и др., 1987;

Чепнян Е.Р., 1996;

Агрба В.З. и соавт, 2007;

Карал-оглы Д.Д., 2007;

Ahmed-Ansari A. et al., 1989]. Практически отсутствуют и исследования по изучению этих параметров у разных возрастных групп обезьян. Литературные данные, получены разными исследователями с помощью отличающихся методов и тест – систем, что затрудняет их оценку.

Данное исследование, на обезьянах Сухумского питомника, было особенно важным, так как военный конфликт (1992-1993г.г.) отразился на состоянии здоровья обезьян, которые в настоящей работе представляли старшую возрастную группу. Однако, на момент проведения исследований, показатели основных физиологических систем обезьян всех возрастных подгрупп, в том числе и старшей, соответствовали норме [Ардзинба С.К. и соавт., 2000;

Баркая В.С. и соавт., 2008]. В то же время, наряду с изученными параметрами, для полной оценки соматического здоровья обезьян Сухумского питомника, необходимы были и показателями иммунного статуса.

Выше изложенное обуславливает актуальность комплексного и углубленного исследования параметров врожденного и адаптивного иммунитета, с определением иммунологических норм, у макак резусов и павианов гамадрилов разных возрастных групп содержащихся в условиях питомника.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: На основании сравнительной оценки параметров врождённого и адаптивного иммунитета макак резусов (Macaca mulatta) и павианов гамадрилов (Papio hamadryas), установить показатели их возрастной иммунологической нормы.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Исследовать врождённый иммунитет макак резусов и павианов гамадрилов в 1.

разных возрастных группах по параметрам функционирования нейтрофильных гранулоцитов (фагоцитарной и микробицидной функции), количественному содержанию CD16+естественных киллеров, концентрации С3-компонента комплемента и цитокинов в периферической крови (ИЛ-1, ИЛ-6).

Изучить адаптивный иммунитет макак резусов и павианов гамадрилов в 2.

разных группах по параметрам их клеточного (CD3+, CD4+, CD8+Т-лимфоциты, CD20+В-лимфоциты, CD25+ активированные лимфоциты, CD71+лимфоциты, несущие рецептор к трансфферину, HLA-DR+ активированные лимфоциты) и гуморального (концентрация сывороточных иммуноглобулинов IgA,IgM,IgG, а также цитокинов) иммунитета.

Исследовать показатели врожденного и адаптивного иммунитета у макак 3.

резусов и павианов гамадрилов в видовом и возрастном аспекте и определить иммунологические возрастные нормы для животных данных видов.

Провести сравнительную оценку параметров врожденного и адаптивного 4.

иммунитета макак резусов и павианов гамадрилов разного возраста с таковыми у человека соответствующих возрастных групп.

Обосновать целесообразность использования макак резусов и павианов 5.

гамадрилов как адекватной биологической модели для изучения вопросов клинической иммунологии и экстраполяции полученных данных обезьян на человека.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА: Впервые на основании сравнительного комплексного исследования показателей врождённого и адаптивного иммунитета детально охарактеризован иммунный статус клинически здоровых макак резусов и павианов гамадрилов в условиях Сухумского питомника. Впервые установлены возрастные нормы иммунологических показателей для клинически здоровых макак резусов и павианов гамадрилов, содержащихся в условиях питомника. На основании сравнительной оценки возрастных особенностей иммунитета низших обезьян и человека соответствующих возрастных групп обоснована возможность экстраполяции полученных данных на человека, и использования животных данных видов в качестве биологических моделей при изучении вопросов иммунопатологии.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Полученные в работе возрастные иммунологические нормы, позволяют оценить состояние иммунной системы обезьян разных возрастов. Установленное сходство иммунологических параметров человека и обезьян позволяет рекомендовать последних для моделирования иммунопатологических состояний людей, а также для апробации методов их иммунокоррекции и тестирования препаратов иммунотерапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

Иммунный статус обследованных макак резусов и павианов гамадрилов 1.

Сухумского питомника имеет возрастные и видовые особенности, позволяющие сформировать представления о возрастной норме обезьян данных видов.

Параметры врождённого и адаптивного иммунитета клинически здоровых 2.

обезьян, в основном, соответствуют таковым у людей и имеют сходство в характере возрастной динамики.

Обезьяны макаки резусы и павианы гамадрилы могут быть использованы как 3.

биологические модели для изучения иммунопатологических состояний человека и методов их коррекции, а данные о состоянии их иммунного статуса - при отборе обезьян в эксперимент и при формировании семей для воспроизводства.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Установленные иммунологические нормы макак резусов и павианов гамадрилов различного возраста включены в комплекс параметров характеризующих их соматическое здоровье и применяются зоотехническим отделам Сухумского питомника при отборе обезьян в эксперимент и формировании семей для воспроизводства обезьян в условиях питомника. Полученные данные о характере изменений иммунного статуса макак резус и павианов гамадрилов с возрастом, используются в учебном процессе на биологическом факультете Кубанского государственного университета в рамках лекций по общей иммунологии.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Апробация диссертации состоялась 17 декабря 2009 года на Ученом Совете Научно-исследовательского Института Экспериментальной патологии и Терапии Академии наук РА. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на III Международной научно-практической конференции студентов и молодых учёных (Сухум, 2007г);

I Международной научной конференции молодых учёных и студентов «Медико биологические и социальные проблемы современного человека» (Тирасполь, 2007г);

Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах» (Сочи-Адлер, 2007г);

6-ой Всероссийской научно практической конференции «Молекулярная диагностика-2007» (Москва, 2007г), Объединенном иммунологическом форуме-2008 (Санкт-Петербург, 2008г) и на Научной конференции «Вопросы биологии и патологии приматов» (Сухум, 2008г).

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИСЛЕДОВАНИЯ. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 работы - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 148 страницах, состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 225 источников, из которых 107 отечественных и иностранных. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 10 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы исследования Исследования выполнены в лаборатории иммунологии и вирусологии (зав., проф.

Шевцова З.В.) Научно-исследовательского института экспериментальной патологии и терапии Академии наук Абхазии (НИИЭПиТ АНА). Часть материала была обработана в лаборатории ИФА-диагностики при Республиканском центре профилактики и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями (г. Сухум, Республика Абхазия) и в Центральной научно исследовательской лаборатории (ЦНИЛ) при Кубанском Государственном Медицинском Университете (КГМУ, г. Краснодар, РФ).

В работе использованы обезьяны Сухумского питомника: 100 клинически здоровых макак резусов (48 и 52) и 40 павианов гамадрилов (19и 21), отобранных по соответствующим клинико-лабораторным критериям соматического здоровья обезьян.

Макаки резусы: 20 неполовозрелых макак (от 1 до 3лет);

40 молодых половозрелых обезьян (от 4 до 11лет);

20 особей зрелого возраста (от 12 до 19лет) и 20 животных старшего возраста (от 20 до 30лет).

Павианы гамадрилы: 10 неполовозрелых обезьян (от 1 года до 4-х лет);

20 молодых половозрелых павианов (от 5 до 12 лет) и 10 особей старшего возраста (от 20 до 27 лет).

Все обезьяны находились на типовом рационе, разработанном в НИИЭПиТ АНА, включавшим брикетированный корм, сбалансированный по содержанию белков, жиров, углеводов, витаминов, минеральному составу, с добавкой овощей, фруктов и зелени.

Для сравнительной оценки возрастных изменений обезьян и человека было проведено исследование иммунного статуса у 60-ти здоровых жителей Абхазии (35 женщин и 25 мужчин), разделенных в соответствии с группами обезьян на четыре возрастные группы: дети – от 4 до 12 лет (n=10);

молодые – от 18 до 35 лет (n=20);

зрелые – от 40 до 60 лет ( n=20 ) и пожилые – от 74 до 82 лет (n=10 ).

Материалом для иммунологического исследования явилась венозная гепаринизированная кровь и сыворотка. Забор крови осуществляли из локтевой вены в один и тот же временной промежуток – с 9 до 10 часов утра натощак.

Работа с животными осуществлялась с учетом биоэтических норм, по правилам трех R, лежащих в основе конвенции по защите позвоночных животных, использующихся для экспериментальных и других научных целей [European used for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes. Strasburg, 18.III.1986].

Методы исследования Среди лимфоцитов периферической крови, выделенных на градиенте плотности d=1,077г/мл [Фримель Г., 1987] определяли методом иммунофенотипирования содержание CD3+ (Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы/индукторы), CD8+ (Т-цитотоксические), CD20+ (В лимфоциты), CD16+ (естественные киллеры), CD25+ (рецептор к ИЛ-2), CD71+ (рецептор к трансферрину), HLA-DR - лимфоцитов [Новиков Д.К. и соавт., 2000г]. Количественное определение иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM) в сыворотке крови осуществляли методом радиальной иммунодиффузии в геле [Manchini G. et al., 1964].

Оценку фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов (НГ) периферической крови осуществляли в реакции бактериального фагоцитоза с оценкой степени его завершенности [Нестерова И.В. и др. 1996] относительно Staph. aureus (штамм № 209, конц. 1109мк в 1 мл) по проценту активно фагоцитирующих клеток (%ФАН), фагоцитарному числу (ФЧ), фагоцитарному индексу (ФИ), проценту переваривания (%П) и индексу переваривания (ИП).

Оценка кислородзависимой микробицидной системы НГ проводилась с помощью спонтанного и стимулированного (Staph. aureus) НСТ-теста по проценту формазан-позитивных клеток (ФПК), среднему цитохимическому индексу (СЦИ), коэффициенту мобилизации (ФПКстим\ФПКспонт) по принципу Kaplow (1955). Кроме того, по СЦИ оценивали активность миелопероксидазы НГ по Sato (1928) и содержание неферментных катионных белков с помощью лизосомально-катионного теста по Пигаревскому В.М. (1979).

Содержание С3-компонента комплемента в сыворотке крови определяли иммунотурбидиметрическим методом, а содержание цитокинов методом ИФА.

Статистическую обработку материала выполняли с использованием пакета статистических программ STATISTICA, версия 7.0, для каждого исследуемого параметра определяли среднее значение (М), и среднее отклонение (± m). Для сравнения величин использовали параметрический t- критерий Стьюдента и непараметрический критерий Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. Состояние врожденного иммунитета макак резусов разных возрастных групп Исследованиями показано, что общее количество лейкоцитов периферической крови с возрастом достоверно снижалось (Табл. 1). Так, у неполовозрелых макак этот показатель был выше в 1,4 раза, чем у зрелых и в 1,8 раз, чем у старых животных, тогда как у зрелых макак - в 1,2 раза, а у старых - в 1,5 раз ниже, чем у молодых половозрелых особей. У животных старшей группы по сравнению со зрелыми макаками было отмечено снижение лейкоцитов в 1,2 раза.

Процентное содержание НГ имело тенденцию к возрастному повышению, но достоверные отличия имели место только между группой 1 и 4.

Таблица 1.

Клеточные факторы врождённого иммунитета макак резусов разных групп (M±m) Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа n=20 n=40 n=20 n= Показатели (1-3года) (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) 7,84±0,61*# 9,90±0,60* # Лейкоциты 109/л 13,90±0,92 12,20±0, 46,20±3,17 52,80±1,95 53,50±3,23 55,20±2,70* % НГ # 4,22±0,38* # 6,08±0,42 6,23±0,41 5,00±0,31* 10 /л 23,60±1,26# 20,10±1,01# 21,60±1,27 16,10±0,55* % ЕК-клетки + 0,63±0,06* # (CD16 ) 1,38±0,24 0,86±0,07* 0,79±0,11* 10 /л Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

- достоверные отличия группы 4 от группы Абсолютное содержание НГ, наоборот, снижалось пропорционально общему количеству лейкоцитов. При этом достоверные отличия наблюдались при сравнении показателя в 3 и группе с таковым в 1-й и 2-й группе. Процентное содержание естественных киллеров (СD16+лимфоциты) у неполовозрелых особей было в 1,3 раза выше по сравнению с молодыми половозрелыми макаками, с возрастом наблюдалось их увеличение у зрелых и старых особей.

При этом, абсолютное содержание СD16+лимфоцитов у молодых половозрелых макак по сравнению с неполовозрелыми особями было ниже в 1,6 раза, у зрелых - в 1,7 раза, а у старых - в 2,2 раза.

Таблица 2.

Фагоцитарная функция нейтрофильных гранулоцитов макак резусов (M±m) Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа n=20 n=40 n=20 n= Показатели (1-3года) (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) Процент активных фагоцитов 59,90±1,38* # 52,10±1,42 63,20±0,94* 60,60±1,32* (% ФАН), % 4,80±0,34 5,87±0,31* 5,54±0,36 5,68±0,23 * Фагоцитарное число (ФЧ ), у.е 2,46±0,16 2,80±0,12 2,69±0,11 2,69±0, Фагоцитарный индекс (ФИ), у.е 59,30±0,74* # 63,40±1,04# 65,10±1,02 66,20±0, Процент переваривания (%П) 1,62±0,08 # 1,63±0,11 2,26±0,08 * 2,08±0,09 * Индекс переваривния (ИП), у.е.

Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

- достоверные отличия группы 4 от группы 3.

Оценка фагоцитарной функции НГ показала, что %ФАН у молодых половозрелых макак по сравнению с неполовозрелыми животными, был выше на 17,6 %, у зрелых - на 14,1% и у старых - на 13,1% (Табл. 2). Достоверные отличия по %ФАН наблюдались и между молодыми половозрелыми и старыми макаками. Интенсивность поглотительной способности фагоцитов была идентичной во всех сравниваемых группах, тогда как интенсивность переваривания антигена (%П и ИП) имела возрастные отличия. По сравнению со старыми животными, %П был выше в 1-й группе на 9%, во 2-й группе - на 10,5% и в 3-й группе - на 6,5%. Индекс переваривания (ИП) у молодых половозрелых животных был выше на 27%, а у зрелых макак на 22% по сравнению с неполовозрелыми и старыми обезьянами.

Наряду с этим выявлено (Табл. 3), что у неполовозрелых животных в спонтанном НСТ тесте величина СЦИ ниже в 1,2 раза, а %ФПК - в 1,6 раз, чем у молодых половозрелых макак, и в 1,3 раза - по сравнению со зрелыми обезьянами данного вида. У молодых половозрелых макак по сравнению со старыми особями показатели спонтанного НСТ-теста были выше, чем у зрелых и старых обезьян. С возрастом у макак резусов снижается адекватность реагирования оксидазной биоцидности НГ на антигенную нагрузку, а наиболее высокий адекватный ответ имеет место у молодых половозрелых животных.

При оценке активности миелопероксидазы НГ у молодых половозрелых макак было выявлено ее достоверное снижение в 1,2 раза по сравнению с неполовозрелыми макаками, в 1, раза - у зрелых, и в 1,8 раз - у старых обезьян, а у старых животных - активность МП была ниже в 1,5 раза по сравнению с таковой у животных 2-й группы.

Таблица Показатели микробицидной функции нейтрофильных гранулоцитов макак резусов (M±m) Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа n=20 n=40 n=20 n= Показатели (1-3года) (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) 0,11±0,01# 0,120±0,005 0,14±0,01* 0,13±0, СЦИ, у.е НСТ спонтанный 3,05±0,23 # 2,63±0,22 4,15±0,32 * 3,50±0,25 * %ФПК,% 0,21±0,01 # 0,19±0,01 # 0,21±0,01 0,25±0,01 * НСТ СЦИ, у.е 5,65±0,50 # стимулированный 5,05±0,49 7,90±0,54 * 6,55±0, %ФПК,% 1,91±0,09 2,09±0,11 1,95±0,11 1,91±0, Коэффиц. мобилизации (КМ), у.е 0,85±0,08* # 1,54±0,08 1,25±0,10 * 1,05±0,08 * Миелопероксидаза СЦИ, у.е 0,19±0,11* # 0,39±0,07 0,21±0,32 * 0,19±0,11 * Катионные белки СЦИ, у.е Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

- достоверные отличия группы 4 от группы 3.

Содержание катионных белков у молодых половозрелых было в 1,8 раз ниже, а у зрелых и старых животных - в 2 раза ниже по сравнению с данными в младшей группе. У старых особей этот показатель был ниже в 1,1 раз, чем у молодых половозрелых (Табл. 3).

Оценка содержания в сыворотке провоспалительных цитокинов показала, что у молодых половозрелых концентрация ИЛ-1 была ниже в 3,6 раз (0,5±0,04 и 1,8±0,24), а ИЛ-6 в 1,5 раза (3,52±0,18 и 5,2±1,0) по сравнению со старыми особями. При исследовании концентрации С3 компонента комплемента было выявлено, что у неполовозрелых макак этот показатель был выше в 1,3 раза (21,65±0,85), чем у старых (16,07±0,43), а у молодых половозрелых резусов (22,48±0,72) в 1,1 раз - относительно зрелых (19,45±0,95) и в 1,4 раза относительно старых макак.

Таким образом, изучение параметров врождённого иммунитета у макак резусов разного возраста выявило их четкую возрастную динамику: наибольшее количество лейкоцитов периферической крови было определено у неполовозрелых особей, при этом с возрастом их количество постепенно достоверно снижалось. Процентное содержание нейтрофильных гранулоцитов и ЕК - клеток наоборот, с возрастом увеличивалось, а абсолютное - снижалось, достигая самых низких величин у животных старшей группы. Показатели фагоцитарной функции были наиболее высокими у особей молодого половозрелого возраста, самая низкая поглотительная способность НГ - у неполовозрелых макак, а переваривающая - у старых животных. Параметры спонтанного и стимулированного НСТ-теста были наиболее высокими у молодых половозрелых особей, с возрастом снижались, а активность миелопероксидазы и содержание КБ, наиболее высокими были у неполовозрелых макак. Однако если с возрастом активность МП достоверно снижалась, то содержание КБ оставалось неизменным в разных возрастных группах. Концентрация провоспалительных цитокинов ИЛ-1 и ИЛ-6 в сыворотке макак с возрастом достоверно увеличивалась, содержание С3-компонента комплемента снижалось, начиная с группы зрелых особей.

II. Состояние адаптивного иммунитета у макак резусов разного возраста Установлено, что содержание лимфоцитов периферической крови было наиболее высоким у неполовозрелых макак и далее с возрастом снижалось, достигая минимума в группе старых особей, что позволило установить достоверность отличий показателя между 1 и 4 группой животных (Табл. 4). При этом, процентное содержание CD3+ Т-лимфоцитов у неполовозрелых макак резусов было в 1,3 раза ниже, чем у молодых половозрелых особей и в 1,2 раза относительно зрелых макак. У молодых половозрелых макак процент CD3+ клеток был выше в 1,1 раза по сравнению со зрелыми и в 1,4 раза - по сравнению со старыми животными, а у зрелых макак - выше в 1,2 раза, чем у животных 4 группы. Динамика возрастных изменений абсолютного содержания CD3+ Т-лимфоцитов макак имела сходный характер. Процентное содержание CD4+ Т-лимфоцитов у незрелых особей было в 1,2 раза ниже, чем у молодых половозрелых макак;

у зрелых резусов ниже - в 1,1 раза, а у старых - в 1,3 раза, чем у молодых половозрелых животных. В то же время, по сравнению со зрелыми макаками у старых животных процент CD4+ Т-хелперов был ниже в 1,1 раза. Относительное содержание CD8+ Т лимфоцитов во всех возрастных группах было практически одинаковым за исключением групп 2 и 4. Абсолютное содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток было максимальным у макак неполовозрелого возраста и достигало минимального уровня у макак резусов старшей группы.

Между тем отношение CD4+/CD8+ не имело достоверных отличий во всех группах сравнения (Табл. 4.). Максимальное процентное содержание В-лимфоцитов CD20+ в периферической крови наблюдалось у неполовозрелых макак, у молодых половозрелых резусов оно снижалось, умеренно нарастало - у зрелых и сохранялось на данном уровне до старости. В то же время абсолютное содержание CD20 В-лимфоцитов с возрастом равномерно снижалось (Табл. 4).

Процентное содержание лимфоцитов, экспрессирующих активационные молекулы CD25, CD71, HLA-DR у неполовозрелых особей было наиболее высоким, тогда как существенных межгрупповых отличий у молодых половозрелых, зрелых и старых животных обнаружено не было. Наряду с этим, абсолютное количество CD71+ клеток у молодых половозрелых макак было ниже в 2,1 раза, у зрелых - в 2,3 раза и у старых - в 4,1 раза по сравнению с неполовозрелыми резусами. При этом у старых макак этот показатель был почти в 2 раза ниже, чем у молодых половозрелых и зрелых животных. Процентное содержание HLA-DR+ лимфоцитов у молодых половозрелых и зрелых макак было в 1,7 раза, а у старых - в 1,8 раза ниже, чем у неполовозрелых животных (Табл. 4).

Таблица Показатели клеточного иммунитета макак резусов различных возрастных групп (M±m) Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа n=20 n=40 n=20 n= Показатели (1-3года) (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) 46,30±2,93 41,00±1,84 39,20±2,97 37,50±2,87 * Лимфоциты, % 3,03±0,33 * # Лимфоциты,109/л 6,38±0,58 4,96±0,33* 4,16±0,55 * 36,90±1,24# # + 39,50±1,55 51,90±1,15* 46,00±1,84* Т-лимфоциты(CD3 ),% 1,04±0,11 * # Т-лимфоциты (CD3+),109/л 2,52±0,26 2,51±0,16 2,00±0, 23,40±0,93# # + 25,40±0,73 30,30±0,86* 27,00±1, Т-хелперы (CD4 ),% 0,66±0,06 * # 1,13±0,17* # Т-хелперы (CD4+),109/л 1,64±0,17 1,51±0, 19,00±0,86 # Т-цитотоксические (CD8+),% 19,90±0,95 21,30±0,61 20,60±1, 0,50±0,04* # Т-цитотоксические,109/л 1,29±0,15 1,06±0,06 0,86±0,14 * Иммунорегуляторный индекс 1,31±0,05 1,41±0,03 1,36±0,06 1,25±0, (CD4+/ CD8+) 26,80±0,78 * # В-лимфоциты(CD20+),% 31,50±1,97 23,90±0,85 * 26,50±1,16 * 0,75±0,08 * # + 2,06±0,25 1,19±0,08 * 1,07±0,15 * В-лимфоциты(CD20 ),10 /л CD25+-лимфоциты, % 18,70±1,08 11,80±0,53* 12,50±0,72 * 12,60±0,88 * 0,37±0,05 * # + 1,21±0,14 0,62±0,05 * 0,53±0,09 * CD25 -лимфоциты, 10 /л CD71+-лимфоциты, % 17,90±0,86 10,70±0,64* 11,40±0,96 * 11,70±0,99 * 0,28±0,05 * # + 1,14±0,12 0,53±0,04* 0,49±0,08 * CD71 -лимфоциты, 10 /л HLA-DR+-антигены, % 17,50±0,73 10,10±0,53* 10,30±0,77 * 9,43±0,88 * 0,32±0,03 * # + 1,09±0,11 0,51±0,04 * 0,41±0,06 * HLA-DR -антигены, 10 /л Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

- достоверные отличия от группы 2;

# - достоверные отличия группы 4 от группы 3.

Исследование концентрации иммуноглобулинов основных классов в сыворотке крови макак резусов показало, что у неполовозрелых животных концентрация IgМ была в 1,4 раза выше по сравнению с молодыми половозрелыми и зрелыми животными и в 1,6 раза выше, чем у старых макак (Табл. 5). Содержание IgG у неполовозрелых макак было в 1,3 раза, а у молодых половозрелых - в 1,2 раза ниже, чем у особей зрелого и старшего возраста. Концентрация IgА у неполовозрелых животных было в 1,3 раза ниже, чем у зрелых, и в 1,5 раза ниже, чем у старых особей.

Таблица Содержание иммуноглобулинов основных классов в сыворотке крови макак резусов (M±m).

Группа 1 n=20 Группа 2 n=40 Группа 3 n=20 Группа 4 n= Показатели (1-3года) (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) 2,07±0,25 1,43±0,08 * 1,42±0,05 * 1,30±0,09 * IgM, г/л 15,80±1,08*# 15,80±0,76*# 11,80±0,57 12,50±0, IgG, г/л 4,18±0,36 *# 4,58±0,27*# 3,07±0,36 3,36±0, IgA, г/л Примечание: *-достоверные отличия от группы 1;

#- достоверные отличия от группы 2;

Показано, что концентрация ИЛ-2 в сыворотке крови неполовозрелых макак имела внутригрупповые отличия, так у резусов в возрасте 2,5-3 лет имеет место более высокий уровень ИЛ-2 (в 9 раз), чем у более молодых особей (1-2 года). Кроме того, были обнаружены достоверные отличия в содержании ИЛ-2 у макак 2,5-3 лет и у старых животных (Табл. 6).

Оценка концентрации ИЛ-4 выявила, что этот показатель был ниже у макак 2 группы в 2,1 раза, 3 группы - в 1,7 раза и 4 группы - в 1,6 раза, чем у неполовозрелых животных. По сравнению с неполовозрелыми макаками, содержание ИФН- у молодых половозрелых макак было ниже в 3,1 раза и у старых особей - в 7,4 раза. В то же время, у молодых макак этот показатель был в 2,4 раза ниже, чем у зрелых, и в 2,3 раза выше, чем у старых животных.

Наиболее резкие различия в содержании ИФН- были обнаружены при сравнении неполовозрелых и зрелых со старыми особями: у младшей группы данный показатель был выше в 7,4 раза, а у зрелых в 5,7 раз (Табл. 6.) Таблица Концентрация цитокинов в сыворотке крови макак резусов разного возраста (M±m) Группа Группа2 n=40 Группа3 n=20 Группа4 n= Показатели n=9 n=11 (4-11лет) (12-19лет) (20-30лет) (1-2 года) (2,5-3года) 1,00±0,44 9,09±2,47* 4,50±1,88 4,30±1,92 1,00±0,35 ** ИЛ-2,пг/мл 0,53 ± 0,06 0,25±0,02* 0,31±0,03 * 0,32±0,05 * ИЛ-4,пг/мл # 0,47±0,04*# 3,50 ± 0,30 1,11±0,06* 2,70±0,24* ИНФ-,пг/мл Примечание: * - достоверные отличия от группы 1 (от 1 до 2 лет) и ** - достоверные отличия от группы 1 (от 2,5 до 3 лет);

# - достоверные отличия от группы 2;

- достоверные отличия группы 4 от группы 3.

Таким образом, исследование адаптивного иммунитета у макак резусов разного возраста показало, что процентное и абсолютное количество общих лимфоцитов периферической крови было наиболее высоким у неполовозрелых макак, постепенно снижалось и достигало минимальных значений у старых животных. Процентное содержание популяций и субпопуляций Т-клеток (CD3+,CD4+ и CD8+ лимфоциты) было более высоким у молодых половозрелых обезьян, а у старых макак достигало наименьших значений. Достоверных отличий иммунорегуляторного индекса (CD4+/ CD8+) с возрастом не наблюдалось. Процент CD20+ В-лимфоцитов был самым высоким у неполовозрелых животных, снижался у молодых половозрелых макак, а затем с возрастом нарастал. Лимфоциты, несущие маркеры ранней (CD25, CD71) и поздней (HLA-DR) активации, у неполовозрелых макак были более высокими, чем у животных всех остальных групп. Содержание IgМ в крови резусов с возрастом снижалось, а иммуноглобулинов класса IgG и IgА - нарастало. Концентрация ИЛ-2 и ИЛ-4 в сыворотке крови макак достигала наибольших значений в возрасте 2,5-3 года (пубертатный период), а в молодом половозрелом и зрелом возрасте находилось на практически неизменном уровне, достоверно снижаясь к старости. Концентрация ИФН имела своеобразную возрастную динамику: наибольшее содержание данного цитокина наблюдалось у неполовозрелых макак, у молодых половозрелых - она достоверно снижалась, у зрелых особей - вновь нарастала, и достоверно снижалась - у старых животных.

Полученные данные по комплексному исследованию параметров врожденного и адаптивного иммунитета макак резусов позволили охарактеризовать иммунный статус каждой из возрастных групп макак, сопоставив полученные данные с имеющимися в научной литературе.

Молодые половозрелые макаки резусы (4-11лет, n=40). Содержание лейкоцитов, общих лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов у макак этой группы соответствовало норме [Куксова М.И., 1972]. Поглотительная активность НГ, количество ЕК-клеток, абсолютное и относительное содержание популяций и субпопуляций Т- и В- лимфоцитов, также было в пределах возрастной нормы, как и более чем в два раза высокое содержание CD3(+)Т лимфоцитов по сравнению с CD20(+)В-клетками [Восканян Н.А, 1970;

1972;

Ahmed-Ansari А.

и et al., 1989]. Установленная продукция сывороточных иммуноглобулинов, концентрация цитокинов ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФ и экспрессия молекул ранней и поздней активации (CD25, CD71 и HLA-DR-антигены) свидетельствовали об адекватной функциональной активности Т и В-лимфоцитов. Выраженная оксидазная активность НГ и высокая концентрация С компонента комплемента была установлена у особей этого возраста. Таким образом, в группе молодых половозрелых макак резусов была выявлена зрелая иммунная система, в связи с чем, было целесообразным дать характеристику другим возрастным группам макак в сопоставлении с этой.

Макаки резусы зрелого возраста (12-19лет, n=20). У обезьян этой группы абсолютное содержание общих лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов было достоверно ниже, а процент ЕК-клеток выше, чем в группе сравнения. Однако, при хорошей поглотительной способности НГ, их микробицидная активность находилась на более низком уровне, как и концентрации С3-компонента комплемента, чем у молодых половозрелых животных. Процент CD3+ Т-лимфоцитов, аналогично группе сравнения, был в два раза выше, чем CD20+ В- клеток.

Относительное и абсолютное содержание CD3+, CD4+ и CD8+ Т- лимфоцитов было несколько ниже, чем у молодых половозрелых. Относительное количество клеток, несущих маркеры ранней и поздней активации (CD25, CD71 и HLA-DR-антигены), концентрация цитокинов ИЛ-2 и ИЛ-4 соответствовали таковым показателям в группе сравнения, а количество ИНФ и сывороточных иммуноглобулинов класса IgG и IgА было даже выше. В целом, судя по экспрессируемым лимфоцитами маркерам активации, продукции цитокинов и синтезу иммуноглобулинов, можно говорить о достаточной функциональной активности Т- и В клеток. Таким образом, у зрелых обезьян, занимающих промежуточное положение между молодыми половозрелыми и старыми макаками, уже в этом возрасте наблюдалась тенденция к умеренному снижению ряда иммунологических показателей. В целом, иммунный статус этих особей находился в довольно хорошем состоянии.

Старые макаки резусы (20-30лет, n=20). У животных старшей возрастной группы выявлено более низкое содержание лейкоцитов, абсолютное число нейтрофильных гранулоцитов, абсолютное и относительное количество общих лимфоцитов, что соответствует литературным данным [Баркая В.С. и др., 2008]. При этом содержание CD16+ естественных киллеров у старых животных было выше, что, по-видимому, является компенсаторной реакцией на снижение содержание Т-клеток, обладающих цитотоксической CD8-позитивных активностью. Поглотительная активность нейтрофилов была умеренно снижена. Параметры, характеризующие микробицидную активность НГ, были более низкими, в особенности с возрастом снижалась активность оксидазной биоцидности. Концентрация С3 компонента комплемента также была снижена. На фоне низкого содержания ряда показателей врожденного иммунитета, наблюдалась повышенная продукция провоспалительных цитокинов - ИЛ-1 и ИЛ 6. Возрастание провоспалительных цитокинов на фоне общего физиологического снижения иммунитета у старых животных мы связываем со сниженной у них резистентностью к инфекционно-воспалительным заболеваниям, носящим скрытый характер. Абсолютное количество всех популяций и субпопуляций лимфоцитов было более низким в группе старых макак, что связано с пониженным содержанием лейкоцитов и общего числа лимфоцитов периферической крови. При этом относительное содержание CD3+ Т-лимфоцитов, CD4+ Т хелперов и CD8+ Т-цитотоксических было самым низким, а CD20+ В-лимфоцитов - более высоким, по сравнению с молодыми половозрелыми макаками. Количество Т-лимфоцитов незначительно превышало содержание В-клеток. Низкая численность Т-клеток периферической крови, по всей видимости, связана с инволюцией тимуса и сокращением миграции стволовых клеток, процессов характерных и для старых людей [Макинодан Т. и Юнис Э., 1980;

Ярилин А.А., 2003;

Steinmann G.G., 1986]. Относительное содержание активационных молекул достоверно не снижалось, в то время как концентрация ИЛ-2 и ИФН была более низкой, чем у половозрелых особей, что могло привести к ослаблению и функциональной активности Т клеток. Концентрация сывороточных иммуноглобулинов класса IgG и IgА была более высокой, чем в группе сравнения.

Таким образом, намечавшаяся у зрелых особей возрастная тенденция к снижению ряда показателей врожденного и адаптивного иммунитета, стала более выраженной у старых макак, и преимущественно – в отношении микробицидной системы НГ и Т-звена иммунитета, что согласуется с данными, полученными при обследовании людей старшего возраста. [Макинодан Т. и Юнис Э., 1980;

Ярилин А.А., 2003;

Di L.G. et al., 1999;

Ginaldi L. et al., 1999].

Неполовозрелые макаки резусы (1-3года, n=20). У обезьян этой группы наблюдалось более высокое содержание лейкоцитов периферической крови и доли лимфоцитов среди них, при сниженном содержание нейтрофильных гранулоцитов, что согласуется с литературными данными [Куксова М.И., 1972]. Показатели фагоцитарной и микробицидной функции НГ были более низкими, чем в группе с равнения. Микробицидная активность НГ обеспечивалась преимущественно за счет активности миелопероксидазы и содержания неферментных катионных белков. Концентрация С3 компонента комплемента была незначительно ниже относительно молодых половозрелых.

Абсолютное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов у животных данного возраста было более высоким, что объясняется повышенным содержанием лейкоцитов и общего числа лимфоцитов периферической крови. В отличие от половозрелых особей, абсолютное и относительное количество CD3+ Т - клеток незначительно превышало содержание CD20+ В-лимфоцитов. Процент CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов было ниже, чем в группе сравнения. Несмотря на относительно более низкое количественное содержание популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов (CD3+, CD4+ и CD8+), наблюдалась высокая экспрессия молекул ранней и поздней активации (CD25, CD71 и HLA-DR-антиген) на лимфоцитах и высокая продукция ключевых цитокинов - ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФ, что свидетельствует о достаточной функциональной активности этих клеток. Из сывороточных иммуноглобулинов наибольшего уровня достигали иммуноглобулины класса IgМ, что, по видимому, связано с тем, что именно в этом возрасте особи впервые сталкиваются с большинством условно патогенных микроорганизмов.

Таким образом, у неполовозрелых макак резусов в первые годы жизни еще продолжаются процессы формирования иммунной системы, некоторые реакции и врожденного и адаптивного иммунитета развиты еще недостаточно и окончательно формируются к периоду полового созревания, как и у людей детского возраста [А.В. Караулов, 2002;

Лебедев К.А., Понякина И.Д., 2003].

III. Состояние врожденного иммунитета павианов гамадрилов разных возрастных групп Исследованиями установлено более высокое содержание лейкоцитов периферической крови у неполовозрелых павианов гамадрилов (Табл. 7), при этом процентное содержание НГ с возрастом достоверно увеличивалось, а абсолютное содержание этих клеток увеличивалось до возраста молодых половозрелых, тогда как у старых животных вновь снижалось до исходного уровня.

Таблица Количественные показатели клеточных факторов врождённого иммунитета павианов гамадрилов (M±m) Группа 1 n=10 Группа 2 n=20 Группа 3 n= Клетки (1-4года) (5-12лет) (20-27лет) 12,60±1,30 11,70±0,71 9,80±0, 10 /л Лейкоциты 48,30±4,80 60,90±2,72* 62,00±4,30* % Нейтрофильные 109/л гранулоциты 5,84±0,79 7,25±0,63 5,82±0, 18,50±1,50# 16,80±1,38 14,00±0, % ЕК-клетки (CD16+) 109/л 0,94±0,19 0,50±0,06* 0,52±0,11* # Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

- достоверные отличия от группы 2.

Процентное содержание ЕК-клеток было более высоким у павианов старшего возраста и достоверно отличалось от молодых половозрелых особей, а абсолютное их содержание у молодых половозрелых и зрелых павианов было в 1,8 раза ниже, чем у неполовозрелых гамадрилов.

Таблица Характеристика фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов павианов (M±m) Группа 1 n=10 Группа 2 n=20 Группа 3 n= Показатели (1-4года) (5-12лет) (20-27лет) Процент активно фагоцитирующих 51,60±2,60 61,00±1,47* 57,40±0,77* клеток (% ФАН ) 4,52±0,65 4,77±0,33 4,57±0, Фагоцитарное число (ФЧ ) 2,35±0,29 2,74±0,17 2,54±0, Фагоцитарный индекс ( ФИ ) 57,30±2,18# 60,70±2,50 62,60±1, Процент переваривания (%П) 1,49±0,08# 1,50±1,60 2,02±0,09* Индекс переваривания (ИП) # Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

- достоверные отличия от группы 2;

Оценка показателей фагоцитарной активности и переваривающей способности НГ периферической крови павианов продемонстрировала их зависимость от возраста (Табл. 8):

%ФАН у молодых половозрелых павианов был в 1,2 раза, а у старых - в 1,1 раза выше, чем у неполовозрелых. При этом показатели поглотительной способности фагоцитов (ФЧ и ФИ) достоверно не отличались у животных исследуемых возрастных групп, тогда как у старых и у неполовозрелых павианов интенсивность процессов переваривания была снижена по сравнению с молодыми животными. Наряду с этим у старых животных величина СЦИ в спонтанном тесте была в 1,3 раза ниже, чем у молодых половозрелых павианов, а в условиях антигенной нагрузки in vitro %ФПК был снижен в 1,3 раза у неполовозрелых павианов, относительно молодых особей. Более высокий %ФПК у павианов 2 группы отразился на величине КМ, который был наиболее высоким среди всех трех групп. При оценке активности миелопероксидазы (МП) были выявлены достоверные отличия у 1 и 2 группы по отношению к животным 3-й группы. Содержание катионных белков (КБ) достоверно было выше у неполовозрелых особей, чем у половозрелых и старых (Табл. 9).

Определение содержания С3-компонента комплемента показало, что у старых животных этот показатель был ниже в 1,9 раза сравнению с неполовозрелыми особями и в 2,1 раза - по сравнению с молодыми особями.

Таблица Микробицидная активность нейтрофильных гранулоцитов павианов гамадрилов (M±m) Группа 1 n=10 Группа 2 n=20 Группа 3 n= Показатели (1-4года) (5-12лет) (20-27лет) 0,100±0,005# 0,120±0,007 0,130±0, СЦИ НСТ-спонтанный 2,80±0,25 3,35±0,30 2,50±0, %ФПК 0,20±0,01 0,210±0,007 0,18±0, СЦИ НСТ-стимулированный 5,00±0,42 6,60±0,38* 5,50±0, %ФПК 1,84±0,26 2,05±0,19 1,89±0, Коэффиц. мобилизации (КМ) 0,71±0,05 *# 1,32±0,11 1,19±0, Миелопероксидаза (МП) СЦИ, у.е 0,55±0,08 0,30±0,06 * 0,28±0,04 * Катионные белки (КБ) СЦИ, у.е # Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

- достоверные отличия от группы 2.

Таким образом, изучение показателей врождённого иммунитета у павианов гамадрилов выявило наличие возрастных изменений его показателей. Общее количество лейкоцитов и абсолютное содержание НГ крови павианов с возрастом имело тенденцию к снижению, а процентное содержание НГ и ЕК, наоборот, увеличивалось. Поглотительная и переваривающая способность НГ у половозрелых была выше, чем у неполовозрелых и старых. Показатели кислородзависимой микробицидной системы НГ были также более высокими у половозрелых и самыми низкими у старых животных. Содержание МП и КБ было более высоким у неполовозрелых гамадрилов. Концентрация С3-компонента комплемента у неполовозрелых и половозрелых макак существенно не отличалась, а у особей старшей группы имело место достоверное снижение.

IV.Состояние адаптивного иммунитета у павианов гамадрилов разного возраста Исследованиями показано, что относительное и абсолютное содержание лимфоцитов периферической крови было наиболее высоким у неполовозрелых павианов и с возрастом снижалось (Табл. 10).

Таблица Показатели клеточного иммунитета павианов гамадрилов различных групп (M±m) Группа 1 n=10 Группа 2 n=20 Группа 3 n= Показатели (1-4года) (5-12лет) (20-27лет) 42,00±4,30 32,01±2,82 30,60±4, Лимфоциты, % Лимфоциты,109/л 5,44±0,98 3,69±0,36* 3,03±0,52* 40,10±2,17# Т-лимфоциты (CD3+),% 42,30±1,50 45,60±1, Т-лимфоциты (CD3+),109/л 2,29±0,41 1,67±0,17 1,66±0, 22,8±1,15# Т-хелперы (CD4+),% 23,60±1,05 27,30±0,96* Т-хелперы (CD4+),109/л 1,32±0,28 1,02±0,11 0,90±0, Т-цитотоксические (CD8+),% 18,50±1,24 19,40±0,77 17,2±1, Т-цитотоксические (CD8+),109/л 1,02±0,22 0,72±0,86 0,70±0, Иммунорегуляторный индекс 1,27±0,05 1,34±0,05 1,17±0, (CD4+/ CD8+) В-лимфоциты(CD20+),% 24,10±0,90 22,75±0,76 24,70±1, В-лимфоциты(CD20+),109/л 1,29±0,24 0,89±0,09 0,89±0, + 15,30±2,20 13,40±0,94 14,20±1, CD25 -лимфоциты, % + 0,81±0,11 0,49±0,06* 0,57±0, CD25 -лимфоциты, 10 /л CD71+-лимфоциты, % 11,40±1,55 8,85±0,65 8,60±0, + 0,66±0,18 0,35±0,05* 0,33±0, CD71 -лимфоциты, 10 /л HLA-DR+-лимфоциты, % 11,00±1,17 9,55±0,84 8,30±1, + 0,56±0,11 0,34±0,04* 0,29±0, HLA-DR -лимфоциты, 10 /л Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

Процентное содержание CD3+ лимфоцитов у старых и неполовозрелых особей было ниже, чем у молодых половозрелых павианов, за счет уменьшения процента CD4+ лимфоцитов.

Между тем процентное содержание CD8+ лимфоцитов, соотношение CD4+/CD8+ и содержание CD20+ В-лимфоцитов во всех группах не имело достоверных отличий и не зависело от возраста. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих CD25, CD71, HLA-DR, у неполовозрелых павианов гамадрилов было наиболее высоким (Табл. 10).

Таблица Содержание иммуноглобулинов в периферической крови павианов гамадрилов (M±m) Группа 1 (1-4года) Группа 2 (5-12лет) Группа 3 (20-27лет) Показатели 1,80±0,27 1,46±0,07 1,40±0, IgM, г/л 16,20±1,45 18,80±0,99 18,90±1, IgG, г/л 2,80±0,20*# 1,87±0,19 2,04±0, IgA, г/л Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

Таблица Концентрация цитокинов в сыворотке крови павианов гамадрилов (M±m) Группа 1 (1-4года) Группа 2 (5-12лет) Группа 3 (20-27лет) Показатели 1,21±0,24 *# 6,83 ± 0,86 4,05±0,33* ИЛ-2,пг/мл 0,45 ± 0,07 0,22±0,03* 0,20±0,04 * ИЛ-4,пг/мл 0,44±0,03*# 3,04 ± 0,35 0,98±0,09* ИНФ-,пг/мл Примечание: * - достоверные отличия от группы 1;

# - достоверные отличия от группы 2;

Концентрация IgМ была несколько выше у неполовозрелых обезьян, тогда как содержание IgG было стабильным в сравниваемых группах. Содержание сывороточного IgА с возрастом увеличивалось, достигая наиболее высокого уровня у старых животных (Табл. 11).

Оценка концентрации цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4 и ИНФ-) выявила наиболее высокое их содержание у особей 1 группы с последующим снижением их уровня в группе 2 и 3 (Табл. 12).

Таким образом, исследование адаптивного иммунитета павианов гамадрилов показало, что процентное и абсолютное содержание лимфоцитов периферической крови было наиболее высоким у неполовозрелых особей и снижалось, достигая минимального уровня содержания у старых животных. Процентное содержание CD3- и CD4-позитивных Т-лимфоцитов у неполовозрелых и старых павианов было достоверно ниже, чем у половозрелых особей.

Содержание CD8+ Т-лимфоцитов во всех возрастных группах было сопоставимым, а CD20+ В лимфоцитов имело тенденцию к возрастанию с увеличением возраста исследуемых животных.

У неполовозрелых особей было самое высокое содержание лимфоцитов, экспрессирующих активационные молекулы (CD25, CD71, HLA-DR). Концентрация сывороточного IgА достигала наибольших, а уровень цитокинов наименьших значении у старых животных, На основании полученных данных по комплексному исследованию параметров врожденного и адаптивного иммунитета павианов гамадрилов был охарактеризован иммунный статус каждой группы. У павианов, аналогично макакам, у молодых половозрелых обезьян была выявлена более зрелая иммунная система, у неполовозрелых гамадрилов, окончательное формирование реакции врожденного и адаптивного иммунитета происходило к моменту полового созревания, а у особей старшего возраста наблюдались наиболее значимые возрастные изменения, в большей степени связанные с ослаблением микробицидной системы НГ и Т-звена иммунитета. Таким образом, у обезьян обоих видов, были выявлены общие возрастные закономерности, но с менее выраженными у павианов межгрупповыми отличиями.

Полученные нами данные по иммунному статусу людей разного возраста согласуются с имеющимися в современной научной литературе [Лебедев К.А., Понякина И.Д., 2003;

.

Калинина Н.М. и др., 2008;

Хаитов Р.М. и др., 2009]. Следует отметить, что сравнительное исследование показателей врожденного и адаптивного иммунитета макак резусов, павианов гамадрилов и человека позволило обнаружить их сходство не только в количественном отношении, но и в характере возрастной динамики, что позволяет использовать эти виды низших обезьян в качестве адекватной биологической модели при изучений иммунопатологических состояний человека.

ВЫВОДЫ:

1. Комплексное исследование врожденного и адаптивного иммунитета клинически здоровых макак резусов и павианов гамадрилов разного возраста, содержащихся в питомнике, позволило определить их возрастные и видовые иммунологические нормы.

2. При общем сходстве возрастных изменений иммунологических показателей, имели место видовые различия иммунного статуса обследуемых обезьян, свидетельствующие о более высоком его уровне у макак резусов по сравнению с павианами гамадрилами.

3. Особенностью иммунитета неполовозрелых макак резусов(1-3 года) и павианов гамадрилов(1-4 года) является преобладающая роль факторов врожденного иммунитета, о чем свидетельствует хорошая микробицидная функция нейтрофилов - кислороднезависимая (катионные белки) и кислородзависимая (миелопероксидаза), а также высокое содержание С3 компонента комплемента.

4. Окончательное формирование врожденного и адаптивного иммунитета обезьян обоих видов происходит к периоду полового созревания: к 3-4 м годам у макак резусов и к 4-5-ти годам – у павианов гамадрилов.

5. По сравнению с молодыми половозрелыми обезьянами (4-11 лет), у особей зрелого возраста (12-19 лет) наблюдалось умеренное снижение оксидазной биоцидности НГ, количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций.

6. У особей старшей возрастной группы (20-30 лет) имело место физиологическое снижение параметров врожденного и наиболее выражено – адаптивного иммунитета с преимущественным угнетением Т-клеточного звена.

7. Показатели врождённого и адаптивного иммунитета клинически здоровых обезьян различного возраста сходны с таковыми у человека и имеют аналогичную возрастную динамику, что позволяет использовать обезьян (предпочтительнее – макак резусов) в качестве биологической модели для воспроизведения иммунопатологических состояний человека и апробации новых методов иммунокоррекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Шевцова З.В., Матуа А.З. Характеристика показателей неспецифического 1.

иммунитета у макак резусов Сухумского питомника //Медико-биологические и социальные проблемы современного человека. Матер. 1 межд. конф. мол. учён. и студ. Тирасполь 2007. - С.47-49.

Матуа А.З., Шевцова З.В. Показатели специфического и неспецифического 2.

иммунитета у макак резусов в сравнительно – возрастном аспекте //Кубанский Научный Медицинский Вестник. - 2007. - №1. - С. 98-101.

Матуа А.З., Шевцова З.В., Баркая В.С., Конджария И.Г., Елистратова Ж.В., 3.

Чалукян С.А. Характеристика показателей иммунного статуса у макак резусов в сравнительно-возрастом аспекте //Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах. Матер. Междунар. науч. конференции. Сочи-Адлер. 2007. - С.164-169.

Матуа А.З., Шевцова З. В., Бигвава Х. А. Показатели адаптивного иммунитета 4.

у макак резусов разных возрастных групп //Молекулярная диагностика-2007. Сб. трудов 6 ой Всерос. научно-практич. конференции. Москва. - 2007. - С.38-39.

Матуа А.З., Шевцова З. В., Баркая В.С., Палба С.Л., Елистратова Ж.В.

5.

Иммунный статус приматов в сравнительном аспекте //Росс.иммунол.журнал. - 2008. - Том 2. - № 2-3. - С.161.

Матуа А.З., Шевцова З.В., Бигвава Х.А. Возрастные отличия 6.

иммунологических показателей у макак резусов. //Росс. иммунол. журнал. - 2008. - Том 2. № 2-3. - С.161-162.

Шевцова З.В., Матуа А.З., Баркая В.С., Конджария И.Г. Палба С.Л., Бигвавa 7.

Х.А., Елистратова Ж..В. Иммунный статус приматов в сравнительно-возрастном аспекте //Вопросы биологии и патологии приматов. Матер. науч. конференций. Сухум. - 2008. С.37-44.

Матуа А.З., Шевцова З.В., Колесникова Н.В., Амичба А.А., Ашуба С.А.

8.

Параметры врожденного и адаптивного иммунитета у неполовозрелых и молодых половозрелых павианов гамадрилов //Вопросы биологии и медицины и их значение для практического здравоохранения. Мат. науч.-практ. конферен., посвященной дню науки Абхазии. Сухум - 2009. - С.39-45.



 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.