авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

Смирнова Ольга Олеговна

Изменение рельефа поверхности эритроцитов

под воздействием некоторых токсикантов

03.03.01 – Физиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

Санкт-Петербург

2011 г.

1

Работа выполнена на кафедре физиологии животных Санкт-Петербургской Государственной Академии Ветеринарной Медицины.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Скопичев Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Кривой Игорь Ильич доктор биологических наук Боголюбов Дмитрий Сергеевич Ведущее учреждение: ФГУН Институт Токсикологии ФМБА России

Защита диссертации состоится «_» 2011 года в 16 часов на заседании совета Д 212.232.10 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт Петербург, Университетская наб., д. 7/9, аудитория 90.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. А.М. Горького Санкт Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан «_» 2011 года.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Алексеев Н. П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В патогенезе многих заболеваний важное место принадлежит нарушениям конфигурации эритроцитов (Баренбойм, Маленков, 1986;

Новицкий, 2008Карчинская, 2008). В условиях непосредственного контакта в периферическом русле токсины могут оказывать различное влияние на биохимические системы, ответственные за сохранение целостности мембран эритроцитов. Модель биологической мембраны эритроцита можно использовать для изучения патологических процессов. При многих патологиях за счёт повреждения цитоскелета эритроциты превращаются в эхиноциты. Вследствие деформации и агрегации эритроцитов нарушаются микроциркуляция и реологические свойства крови (Полещук и др., 2008;

Kikuchietal., 1994;

van-Gelderetal., 1996;

Parthasarathi, Lipowsky, 1999).Не исключено и влияние на структуру эритроцитов таких эндотоксинов, как молекулы средней массы (МСМ). Интерес к исследованию молекул средней массыопределяется прежде всего тем, что они получили известность как важные универсальные маркеры интоксикации.Эхиноцитоз и накопление продуктов гидролиза белка в виде молекул средней массы можно рассматривать как универсальные биохимические и морфологические изменения в составе крови при эндо- и экзо- генных интоксикациях. Немаловажно, что эти маркеры не только являются последствием действия токсинов, но и сами порождают цепи патологических реакций. Учитывая этот факт, актуальным становится вопрос поиска оптимальных методов и средств, способных осуществлять общуюдетоксикацию и, в том числе, устранять эхиноцитоз и действие биологически активных молекул средней массы. Абдоминальная декомпрессия –новое направление в ветеринарной медицине, осуществляемое путем воздействия отрицательного избыточного давления на локальные зоны тела. Механизм лечебного воздействия абдоминальной декомпрессии связан с приливом крови к органам брюшной полости во время разрежения, рефлекторным снижением тонуса периферических сосудов, уменьшением внутрибрюшного давления, улучшением циркуляции крови и ее реологических свойств (Длигач, Иоффе, 1982;

Аванесов, 2001;

Скопичев и др., 2003;

2006;

2007;

Скопичев, Жичкина, 2010). Использование локального отрицательного давления (ЛОД) способствует более быстрому очищению организма от токсинов различного происхождения.

Таким образом, актуальность темы диссертации определятся рассмотрением вопросов мало изученной проблемы деформации эритроцитов при интоксикациях различного генеза, а также исследованием нового направления ветеринарной физиотерапии - детоксикации с использованием локального отрицательного давления. Подобные работы необходимы в ходе разработке диагностических и лечебных мероприятий при заболеваниях, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома.

Цели и задачи исследования.Основной целью исследования явилось определение изменений рельефа поверхности эритроцитов в ответ на действие фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (ФОИ), молекул средней массы, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности (ХПН) и при детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Определить процентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови крыс после отравления фосфорорганическими соединениями: фосфаколом и карбофосом 2. Изучить методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) изменения рельефа поверхности эритроцитов в результате повреждающего действия фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (фосфакола и карбофоса) 3. Определить процентнуюдолю эхиноцитов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови кошек, больных хронической почечной недостаточности 4. Определитьпроцентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы в крови крыс при отравлении фосфорорганическими соединениями и кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность после детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии 5. Выяснить изменение содержания эхиноцитов в кровеносном русле паренхимы селезёнки и печени крыс, отравленных фосфаколом, после детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии 6. Установить invitro изменения формы эритроцитов при воздействии на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости, полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации 7. Выявить корреляционную связь между процентной долей эхиноцитов и содержанием молекул средней массы после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии Научная новизна и практическая значимость работы. В диссертационном исследовании зарегистрированы изменения рельефа поверхности эритроцитов с образованием эхиноцитовпод влиянием фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (карбофоса, фосфакола) invivo, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности кошек invivo, а также при воздействии молекул средней массыinvitro. На основании экспериментального материала и анализа литературных данныхвпервые предположена и установлена способность молекул средней массыоказывать непосредственное влияние на деформацию нормоцитовс образованиемэхиноцитовinvitro.

Показано, что применение сеансов абдоминальной декомпрессии при лечении эндо- и экзо- генных интоксикаций способствует значительному снижению в крови универсальных маркеров интоксикации: уровня молекул средней массы и процентной доли эхиноцитов. Следовательно, подтверждена эффективность этого метода детоксикации (на примере хронической почечной недостаточности кошек и отравления крысфосфорорганическими ингибиторамиацетилхолинэстеразы).

Установлена продолжительность сохранения эффекта снижения процентнойдолиэхиноцитов и содержаниеммолекул средней массы после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии: по данным проведённого эксперимента она составляет 1 сутки.Показано, что воздействие абдоминальной декомпрессии способствует «утилизации»эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени.

Впервые получены данные о наличии сильной положительной корреляции между долей эхиноцитов и содержаниеммолекул средней массы после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии. Ранее в литературе имелись лишь отрывочные сведения по данному вопросу.

Рассмотренные маркеры интоксикации могут быть исследованы в дальнейшем для оценки тяжести патологического состояния в клинической практике. Выявленная способность фракции, содержащеймолекулы средней массы, вызывать деформацию эритроцитов с образованием эхиноцитов может быть использована для дальнейшего подробного изучения изменения формы эритроцитовв ответ на действие различных повреждающих агентов.

Внедрение использования отрицательного давления на локальные зоны тела животных является перспективным направлением в комплексной профилактике и лечении ряда болезней, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома.

Материалы диссертации используются:

• При разработке и усовершенствовании аппаратуры для локальной абдоминальной декомпрессии научно-промышленной компанией ООО «Фирма АКЦ». Полученные в ходе диссертационного исследования результаты реализованы ООО «Фирма АКЦ» в ходе разработки и усовершенствования комплекта изделий абдоминальной декомпрессии КАД-01-АКЦ, что подтверждается представленным актом реализации научных результатов • При лечении болезней, сопровождающихся развитием интоксикации, с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии • При проведении лекционных и лабораторно-практических занятий со студентами и ветеринарными врачами Санкт-Петербургской Государственной Академии Ветеринарной медицины ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 1. Под влиянием таких веществ, как фосфорорганические соединения и молекулы средней массы, а также при хронической почечной недостаточности эритроциты деформируются с образованием эхиноцитов.

2. Совместно с содержанием в сыворотке крови молекул средней массы, увеличение процентной доли эхиноцитов можно отнести к универсальным маркерам токсических состояний.

3. Путём регистрации изменения рельефа поверхности эритроцитов (снижения процентной доли эхиноцитов) и снижения уровня молекул средней массыв сыворотке крови обосновано детоксикационное действие абдоминальной декомпрессии.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2009, 2010 гг.), на 61-й, 62 й, 64-й научных конференциях молодых учёных и студентов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2007, 2008, 2010 гг.), на всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2009 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано14 печатных работ, из них: 3 статьи в журналах, соответствующих перечню ВАК РФ;

8 статей в материалах конференций;

1 тезисы научно-практической конференции;

1 учебно-методическое пособие для ветеринарных врачей;

1 статья в журнале.

Объём и структура диссертации.Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа содержит 15 таблиц, 1 диаграмму и рисунков. Список литературы включает 198 наименований, в том числе 70 иностранных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методики исследования Опыты выполнены на самцах белых беспородных крыс массой 189-250г в возрасте 5 месяцев;

в работе также исследованы здоровые и больные хронической почечной недостаточностью кошки в возрасте 5-14 лет. Для исследований интоксикаций экзогенной этиологии в качестве модельных отравляющих веществ использовались фосфакол (0,01 % раствор) и карбофос (коммерческий 47,4 % раствор). В качестве модели эндогенной интоксикации были исследованы кошки, больные хронической почечной недостаточностью.

В ходе опытов использовались следующие методики:

Подсчёт процентной доли эхиноцитов. В мазках крови и мазках-отпечатках со срезов селезёнки и печени после окраски гематоксилин - эозином подсчитывали процентную долю эхиноцитов с использованием светового микроскопа «МКУ-1»

(Россия) и Видео Теста – Морфология («Видео ТесТ», Россия). Мазки просматривали под иммерсией (не менее 10 полей зрения в каждом мазке).

Сканирующая электронная микроскопия.Для выполнения СЭМ эритроцитов каплю крови помещали в бюкс, заполненный 1.5 % раствором глутаральдегида, приготовленном на растворе Хенкса. Через 30 минут, после осаждения эритроцитов на покровном стекле, их отмывали раствором Хенкса и обезвоживали в этаноле возрастающей концентрации (до 100%). Окончательную сушку образцов осуществляли переходом критической точки CO2 в аппарате HCR – 2 Hitachi – Н- (Hitachi, Япония). После напыления золотом в ионном напылителе образцы просматривали в электронном микроскопе Hitachi - H-300 (Hitachi, Япония), используя сканирующий вариант микроскопа, ускоряющее напряжение 20кВ.

Скрининговый метод определение концентрации молекул средней массы.Метод основан на освобождении сыворотки крови от содержащихся в ней высокомолекулярных пептидов с использованием трихлоруксусной кислоты и количественном определении в полученной после центрифугирования надосадочной жидкости уровня молекул средней массы по поглощению в монохроматическом световом потоке при длине волны 254 нм. Анализируемыйцентрифугат представляет собой неочищенную фракцию молекул средней массы.В центрифужные пробирки внесли по 0,25 мл сыворотки и 0,125 мл раствора трихлоруксусной кислоты (100 г/л).

После перемешивания содержимого произвели центрифугирование на обычной клинической центрифуге ОПН-3 при 3000 об/мин в течение 30 мин. Отобрали 0, мл надосадочной жидкости и перенесли в пробирку с 1,125 мл дистиллированной воды. Содержимое пробирки перемешали и фотометрировали при 254 нм, используя в качестве контрольной пробы дистиллированную воду. Использовали спектрофотометр Schimadzu UV – 1700 (Япония), позволяющий измерять оптическую плотность в ультрафиолетовой области спектра (250 - 260 нм) с использованием стандартных прямоугольных кварцевых кювет с длиной оптического пути 1 см.

Результаты определения содержания молекул средней массы в сыворотке крови выражены в условных единицах, представляющих показатели оптической плотности, учтенные с точностью до третьего знака после запятой (Камышников, 2003).

молекулярно-массового Жидкостно-гелевая хроматография.Определение распределения веществ пептидной природы в сыворотке крови проводили методом жидкосто-гелевой хроматографии с использованием колонки размером 0,50,015м, содержащей гель SephadexG-50. В качестве элюента использовали 0,15 М раствор хлорида натрия, при скорости пропускания элюата 20 мл/ч перистальтическим насосом Bromma 2132(LKB, Швеция). Вариант элюировании – изократический. В качестве детектора применяли проточный спектрофотометр Bromma 2138 UvicordS (LKB, Швеция) при длине волны 230 нм (поглощение, характерное для пептидных связей). Графическое изображение распределения пептидных фракций в элюате получали с помощью самописца Bromma 2210 Recorder 1-channel (LKB, Швеция).

декомпрессию Абдоминальная декомпрессия.Абдоминальную экспериментальным животным проводили на аппарате АДТ – 02 (разработчик изготовитель – научно-промышленная компания ООО «Фирма АКЦ»), представляющем собой электронно-пневматический прибор, формирующий в миниатюрной камере отрицательное избыточное давление с величиной максимального уровня разрежения 4,5 кПа.

Применение абдоминальной декомпрессии при отравлении крыс ФОИ.Использованы рекомендуемые при лечении отравления ФОИ режимы: 2 сеанса длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа (Скопичев и др., 2007;

Скопичев, Жичкина 2010).

Применение абдоминальной декомпрессии у кошек с хронической почечной недостаточностью. Использованы рекомендуемые для лечения ХПН режимы: сеанса длительностью по 3 мин каждый с интервалом 30 с, разрежение - 2 к Па (Скопичев и др., 2007;

Скопичев, Жичкина 2010).

Результаты исследования Изменение рельефа поверхности эритроцитов крови крыс под воздействием фосфорорганических соединений Деформация эритроцитов при отравлении крыс фосфаколом Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 189 - 250 г в возрасте 5 мес, n=30.Крысам контрольной группы (n = 10) внутримышечно вводили физ. раствор (натрия хлорид 0,9%) в дозе 0,5 мл. Остальным крысам внутримышечно вводили фосфакол: группа № 1, n = 10 - в дозе 0,5 ЛД50 (ЛД50=0,92 +/-0,12 мг/кг);

группа № 2, n = 10 – в дозе 5,0 ЛД50.У всех животных первый раз кровь взяли из хвостовой вены до введения фосфакола и физ. раствора, второй раз - через 15 мин после введения фосфакола и физ. раствора, третий раз – через 2 часа.

Все полученные образцы крови использовали для определения молекулярно массового распределения веществ пептидной природы в сыворотке, определения содержания МСМ в сыворотке, проведения световой микроскопии с целью подсчёта процентной доли эхиноцитов и сканирующей электронной микроскопии.

Хроматография контрольных образцов сыворотки крови крыс (n = 10) до введения физ. раствора, через 15 минут и через 2 часа после введения физ. раствора выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции - 1,05 кДа. Причем по количественному соотношению преобладает фракция низкомолекулярных пептидов (M±m):1,05 кДа - 91,47%±4,5%;

30 кДа - 8,53%±1,8%.

Хроматография образцов сыворотки крови крыс после отравления фосфаколом в дозе 0,5 ЛД50 (n = 10), 5 ЛД50 (n = 10) через 15 минут и 2 часа после введения фосфакола также выявила наличие двух фракций, но в образцах содержатся лишь следовые количества фракции с ММ 30 кДа. Это объясняется более глубокой степенью гидролиза веществ с пептидной связью. При этом концентрация молекул средней массы (низкомолекулярных пептидов) в сыворотке крови крыс после введения фосфакола достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 1).При проведении световой микроскопии с целью подсчёта доли эхиноцитов выявлено, что в мазках крови интактных крыс подавляющее большинство эритроцитов имеет формунормоцитов. После введения подопытным крысам фосфакола в дозе 0,5 ЛД50 и в дозе 5,0 ЛД50 доля эхиноцитов в крови крыс достоверно увеличивается по отношению к контрольной группе (таблица 2).

Морфологические исследования рельефа поверхности эритроцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии показали, что в контрольных образцах крови подавляющее большинство эритроцитов имеют форму дискоцитов.Применение фосфакола в дозе 0,5 ЛД50 уже через 15 мин после его введения привело к существенному изменению формы эритроцитов с образованием эхиноцитов, что характеризуется нарушением рельефа клеточной поверхности, образованием выростов на поверхности эритроцитов и уменьшением их размеров.

Значительное количество эритроцитов имеют дефекты плазмолеммы, сопровождающиеся их разрушением (рис 1).

Таблица 1. Содержание молекул средней массы (условные единицы, M±m) в сыворотке крови крыс (n=30) после введения фосфакола До введения Время от момента введения фосфакола Группа крыс фосфакола и 15 мин 2 часа физ.раствора Контроль (физ.

0,384±0,05 0.432±0,053 0,407±0, раствор) № 1 (фосфакол в 0,400±0,05 0,498±0,055* 0,609±0,058* дозе 0,5 ЛД50) № 2 (фосфакол в 0,420±0,055 0,653±0,058* 0,832±0,062** дозе 5 ЛД50) *р0,05 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс **р0,01 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс Таблица 2. Процентная доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе;

M±m) в крови крыс (n=30) после введения фосфакола.

До введения Время от введенияфосфакола Группа крыс фосфакола и физ.

15 мин 2 часа раствора Контроль (физ.

3,0±0,3 3,4±0,7 3,2±0, раствор) № 1 (фосфакол в 2,7±0,25 37,0±2,8** 43±4,5** дозе 0,5 ЛД50) № 2 (фосфакол в 2,9±0,25 51,0±2,4** 49,0±1,5** дозе 5 ЛД50) **р0,01 по отношению к доле эхиноцитов в крови крыс контрольной группы При введении фосфакола в дозе 5 ЛД50 нарушается рельеф клеточной поверхности, формируются гребни, наблюдается отшнуровка мембранного материала. При этом можно наблюдать образование значительных по размерам (до 2 3 мкм) выростов клеточной поверхности, а кренирование эритроцитов в сочетании с нарушением их стромы приводит к их последующему разрушению.

а) б) Рис. 1. Деформация эритроцитов крови крыс в группе № 1 (фосфакол в дозе 0, ЛД50) а) через 15 мин после введения фосфакола, эхиноцит б) через 2 часа после введения фосфакола, разрушение эритроцита Деформация эритроцитов при отравлении крыс карбофосом Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 200 - 250 г в возрасте 5 мес, n= 30.Контрольной группе крыс (n = 10) вводили внутрибрюшинно физ. раствор в дозе 0,5 мл. Остальным крысам внутрибрюшинно вводили карбофос в виде коммерческого 47,4 % раствора. Группе крыс № 1, n = 10 – в дозе 1/10 ЛД (ЛД50 = 1000 мг/кг +/- 25 мг/кг);

группе № 2, n=10 – в дозе ЛД50.У всех животных первый раз кровь взяли из хвостовой вены через 2 мин после введения карбофоса, второй раз – через 5 минут, третий – через 10 мин.Все образцы крови использовали для определения содержания молекул средней массы, определения молекулярно массового распределения веществ пептидной природы в сыворотке, проведения световой микроскопии с целью подсчёта доли эхиноцитов и сканирующей электронной микроскопии.

Хроматография контрольных образцов сыворотки крови крыс (n = 10) до введения физ. раствора, через 2, 5 и 10 минут после введения физ. раствора выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции составила 1,05 кДа. По количественному соотношению преобладала фракция низкомолекулярных пептидов (M±m):1,05 кДа 90,62%±4,5%;

30 кДа - 9,38%±1,5%.

Хроматография образцов сыворотки крови крыс после отравления карбофосом в дозе 1/10 ЛД50 (n = 10), 1ЛД50 (n = 10) через 2, 5 и 10 минут после введения карбофоса также выявила наличие двух фракций, но в данных образцах содержатся только следовые количества фракции с ММ 30 кДа. Это объясняется более глубокой степенью гидролиза веществ с пептидной связью. При этом концентрация молекул средней массы в сыворотке крови крыс после введения карбофоса достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 3).

При проведении световой микроскопии мазков крови крыс выявлено, что доля эхиноцитов в крови крыс после введения карбофоса достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 4).При проведении сканирующей электронной микроскопии выявлено, что в контрольных образцах крови количественно значимой деформации эритроцитов не наблюдается, подавляющее большинство эритроцитов имеет форму дискоцитов.При исследовании эритроцитов крови крыс после отравления карбофосом отмечен эхиноцитоз: рельеф поверхности изменяется с образованием гребней, наблюдается отшнуровка мембранного материала. Характерна агрегация деформированных эритроцитов (рис. 2).

Таблица 3. Содержание молекул средней массы (условные единицы;

M±m) в сыворотке крови крыс (n=30) после введения карбофоса.

До введения Время от момента введения карбофоса карбофоса и Группа животных 2 мин 5 мин 10 мин физ.раствора Контроль (физ.

0,440±0,05 0,450±0,048 0,436±0,05 0,492±0, раствор) № 1 (карбофос в 0,390±0,07 0,642±0,053* 0,704±0,05** 0,738±0,05** дозе 1/10 ЛД50) № 2 (карбофос в 0,412±0,05 0,715±0,053** 0,738±0,058** 0,867±0,055** дозе ЛД50) *р0,05 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс **р0,01 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс Таблица 4. Доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе;

M±m) в крови крыс (n=30) после введения карбофоса.

До введения Время после введения карбофоса Группа карбофоса и животных 2 мин 10 мин 5мин физ.раствора Контроль (физ.

2,7±0,25 2,5±0,25 3,0±0,27 2,7±0, раствор) № 1 (карбофос в 2,5±0,25 25±2,5** 43±4,1** 50±2,9** дозе 1/10 ЛД50) № 2 (карбофос в 2,7±0,25 42±2,5** 45±3,7** 62±4,3** дозе ЛД50) **р0,01 по отношению к доле эхиноцитов в крови крыс контрольной группы а) б) Рис. 2. Конгломерация эхиноцитов, кровь крыс группы № 2 через 10 мин после введения карбофоса в дозе 1ЛД50 а) конгломерат эхиноцитов б) конгломераты эхиноцитов с отложением фибрина. Масштабная линейка – 5 мкм.

Изменения формыи эритроцитов крови кошек с диагнозом ХПН.

Проведено исследование молекулярно-массового распределения веществ пептидной природы,содержания молекул средней массыв сыворотке крови и доли эхиноцитов в крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность. В качестве физиологического контроля исследована кровь 20 клинически здоровых кошек с концентрацией креатинина в сыворотке крови до 160 ммоль/л. В исследовании принимали участие 30 кошек в возрасте 5-14 лет с диагнозом ХПН на стадии азотемии. Исследуемые животные были разделены на 3 группы в зависимости от концентрации в сыворотке крови маркера уремии - креатинина (ммоль/л): первая группа - 160 (верхняя граница нормы) – 250, вторая – 250 – 450, третья – 450 и более.

В первую группу вошли 10 кошек в возрасте 5-12 лет, во вторую – 10 кошек в возрасте 5-14 лет, в третью – 10 кошек в возрасте 6 – 14 лет.

Хроматография образцов сыворотки крови клинически здоровых кошек (n = 20) выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции - 1,05 кДа. Причем по количественному соотношению преобладает фракция низкомолекулярных пептидов:1,05 кДа - 91,5%±4,5%;

30 кДа - 8,5%±1,5%.Хроматография образцов сыворотки крови кошек с диагнозом ХПН (n = 30) также выявила наличие двух фракций, но в этих образцах содержатся лишь следовые количества фракции с ММ кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови кошек с диагнозом ХПН достоверно увеличивается по отношению к физиологическому контролю (таблица 5). Доля эхиноцитов (10 полей зрения в каждой пробе;

M±m) в мазках крови клинически здоровых кошек (n=20) составила 4,2±0,05%, подавляющее большинство эритроцитов имеют форму дискоцитов.При проведении световой микроскопии мазков крови кошек, больных ХПН на разных стадиях, выявлено, что доля эхиноцитов достоверно увеличивается по отношению к физиологическому контролю (таблица 5).

Таблица 5. Процентная доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе;

M±m) и содержание молекул средней массы (условные единицы, M±m) в крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью(n=50).

Группа кошек (в зависимости от содержания Содержание Доля креатинина в сыворотке крови) МСМ эхиноцитов До 160 ммоль/л (физиологический контроль;

n=20) 0,402±0,050 4,2±0,05% 160-250 ммоль/л(n=10) 0,510±0,050* 9,0±1** 250 – 450ммоль/л (n=10) 0,615±0,050* 10±2** 450 и более ммоль/л (n=10) 0,795±0,057** 17±3** **р0,01 по отношению к физиологическому контролю *р0,05 по отношению к физиологическому контролю Изменения формы эритроцитов при отравлении фосфаколом и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии.

Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 220 - 250 г в возрасте 5 месяцев (n =200). Крысам контрольной группы (n = 100) внутрибрюшинно вводили физ. раствор в дозе 0,5 мл. Остальным крысам (n = 100) внутрибрюшинно вводили фосфакол в дозе ЛД50 (0,92 +/-0,12 мг/кг) в виде 0,01 % раствора. Контроль и опыт были разделены на 6 групп крыс, по 10 крыс в каждой группе. Через 10 минут после внутрибрюшинного введения контрольной группе физ.

раствора и подопытным группам фосфакола провели детоксикацию с применением абдоминальной декомпрессии (2 сеанса длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа) группам №1-9. Все исследуемые животные были умерщвлены после проведения абдоминальной декомпрессии в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных": группа № 1 – через 1 час;

№ 2 – через 2 часа;

№ 3 – через 5 часов;

№ 4 – через 10 часов;

№ 5 – через 15 часов;

№ 6 – через 1 сутки;

№ 7 – через 30 часов;

№ 8 – через 36 часов;

№ 9 – через 2 суток. Крысы группы № 10 были умерщвлены через сутки после введения фосфакола без проведения абдоминальной декомпрессии.

Для исследований взяли материал: кровь для определения содержания молекул средней массы в сыворотке и подсчёта доли эхиноцитов (до умерщвления), мазки отпечатки срезов печени и селезёнки для подсчёта процентной доли эхиноцитов(после умерщвления).

Таблица 6. Доля эхиноцитов (%;

10 полей зрения в каждой пробе;

M+/-m) и содержаниемолекул средней массы (условные единицы;

M±m) в крови крыс контрольной группы (n=100) и отравленных фосфаколом (n=100) после проведения абдоминальной декомпрессии и без лечения.

Контроль (физ. раствор) Опыт (фосфакол в дозе ЛД50) Группа крыс Доля Концентрация Доля Концентрация эхиноцитов МСМ эхиноцитов МСМ №1 (через 1 час 2,5±0,2 0,390±0,045 6±0,57** 0,452±0,048* после ЛОД) №2 (через 2 часа 2,5±0,25 0,458±0,050 9±1,05** 0,447±0,048* после ЛОД) №3 (через 5 часов 2,4±0,25 0,382±0,050 8±1,00** 0,513±0,050* после ЛОД) №4 (через 2,4±0,25 0,415±0,040 8±1,00** 0,510±0,050* часов после ЛОД) №5 (через 2,5±0,2 0,415±0,0450 9±1,00** 0,550±0,050* часов после ЛОД) №6 (через 1 сутки 2,5±0,25 0,466±0,050 11±1,5** 0,584±0,050* после ЛОД) №7 (через 2,3±0,25 0,443±0,050 17±1,5** 0,650±0,050** часов после ЛОД) №8 (через 2,5±0,25 0,436±0,045 20±2,1** 0,670±0,050** часов после ЛОД) №9 (через 2 суток 2,6±0,3 0,405±0,055 21±3,2** 0,673±0,050** после ЛОД) №10 (через 2,5±0,25 0,443±0,050 28±3,6** 0,659±0,055** сутки без ЛОД) *р0,05 по отношению к контрольной группе **р0,01 по отношению к контрольной группе Доля эхиноцитов в крови крыс после отравления фосфаколом и проведения сеансов абдоминальной декомпрессии увеличивается по мере увеличения временного промежутка между проведением абдоминальной декомпрессии и взятием крови и максимальна в группе, которой декомпрессия не проводилась и в группе, у которой кровь забрана через двое суток после детоксикации. После отравления фосфаколом наиболее близка к контрольным показателям доля эхиноцитов через 1, 2 и 5 часов после проведения абдоминальной декомпрессии. Аналогичные изменения характерны для содержания в сыворотке крови молекул средней массы.Провели корреляционный анализ для выявления связи между содержанием молекул средней массы в сыворотке крови и процентной долей эхиноцитов. Коэффициент корреляции составил 0, (р95%), что соответствует сильной положительной корреляции.В контрольной группе после введения внутрибрюшинно физ. раствора и лечения абдоминальной декомпрессией процентнаядоля эхиноцитов и содержание молекул средней массы значимо не изменяются (таблица 6).

После проведения отравленным фосфаколом крысам сеансов абдоминальной декомпрессии доля эхиноцитов, находящихся в сосудах селезёнки и печени, возрастает по сравнению с контрольными образцами и держится на повышенном уровне в течение первых суток. Через сутки после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии доля эхиноцитов начинает снижаться, (при этом их концентрация в периферической крови увеличивается). При этом в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки группы, не подвергшейся детоксикации, показатели близки к контрольным образцам, в то время как маркеры интоксикации в периферической крови имеют максимальные значения (таблица 7).

Таблица 7. Доля эхиноцитов (%) в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки крыс контрольной группы (n=100) и отравленных фосфаколом (n=100) после проведения абдоминальной декомпрессии и без лечения абдоминальной декомпрессией (10 полей зрения в каждой пробе;

M±m).

Контроль (физ. раствор) Опыт (фосфакол в дозе ЛД50) Доля Доля Доля Доля эхиноцитов в эхиноцитов в эхиноцитов в эхиноцитов в Группа крыс мазке- мазке мазке- мазке отпечатке отпечатке отпечатке отпечатке среза среза среза печени среза печени селезёнки селезёнки №1 (через 1 час 0,6±0,01 0,3±0,01 1,6±0,13** 1,6±0,14** после ЛОД) №2 (через 2 часа 0,5±0,01 0,3±0,01 2,3±0,25** 3,3±0,3** после ЛОД) №3(через 5 часов 0,6±0,01 0,3±0,01 2,6±0,25** 3,6±0,3** после ЛОД) №4 (через 10 0,6±0,01 0,2±0,01 2,6±0,25** 3,9±0,3** часов после ЛОД) №5 (через 15 0,6±0,01 0,3±0,01 2,6±0,25** 3,6±0,3** часов после ЛОД) №6(через 1 сутки 0,7±0,01 0,3±0,01 2±0,25** 2,3±0,25** после ЛОД) №7 (через 30 0,5±0,01 0,2±0,01 1,5±0,10** 1,5±0,12** часов после ЛОД) №8 (через 36 0,5±0,01 0,2±0,01 1,5±0,10** 1,5±0,10** часов после ЛОД) №9(через 2 суток 0,6±0,01 0,3±0,01 1,5±0,13** 1,5±0,13** после ЛОД) №10 (через 1 0,6±0,01 0,4±0,01 1,0±0,1** 0,3±0,06* сутки без ЛОД) *р0,05 по отношению к контрольной группе **р0,01 по отношению к контрольной группе Изменения формы эритроцитов при хронической почечной недостаточности и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии Исследуемые животные (всего 30 кошек в возрасте 5-14 лет) были разделены на группы в зависимости от концентрации в сыворотке крови маркера уремии креатинина (ммоль/л): первая группа 160 (верхняя граница нормы) – 250, вторая – – 450, третья – 450 и более. В первую группу вошли 10 кошек в возрасте 5-8 лет, во вторую – 10 кошек в возрасте 5-14 лет, в третью – 10 кошек в возрасте 7 – 14 лет. В качестве контрольных образцов исследована кровь 10 клинически здоровых кошек с уровнем креатинина в сыворотке крови до 160 ммоль/л.

Определяли содержание молекул средней массы и долю эхиноцитов в крови кошек контрольной группы и кошек, больныххронической почечной недостаточностью на стадии уремии, до и через 2 часа после проведения абдоминальной декомпрессии (разрежение 2 к Па, 3 цикла по 3 мин, пауза 30 с).

Через 2 часа после абдоминальной декомпрессии содержание эхиноцитов в крови кошек, больных ХПН, снижается во всех группах животных, аналогичные изменения происходят с содержанием в сыворотке крови молекул средней массы (таблица 8).

Таблица 8. Доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе;

M±m) в крови и содержание молекул средней массы (условные единицы, M±m) в сыворотке крови кошек контрольной группы (n=10) и кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность (n=30) до и после сеансов абдоминальной декомпрессии.

Содержание МСМ Доля эхиноцитов Через 2 часа Через 2 часа До Группа кошек До после после декомпрессии декомпрессии декомпрессии декомпрессии Контроль - до 160 0,442±0,053 0,440±0,053* 2,9±0,2 2,6±0,15* ммоль/л 160-250 ммоль/л 0,492±0,054 0,453±0,055* 9,8±1 3,2±0,30** 0,589±0,059 0,479±0,056* 250 – 450ммоль/л 13,6±1,4 5,7±0,50** 450 и более ммоль/л 0,814±0,068 0,532±0,055* 18,5±2,9 9,6±1,05** *р0,05 по отношению к доле эхиноцитов до абдоминальной декомпрессии **р0,01 по отношению к доле эхиноцитов до абдоминальной декомпрессии Определение способности молекул средней массы непосредственно оказывать влияние на деформацию эритроцитов Для выделения из сыворотки крови среднемолекулярных пептидов использован метод, базирующийся на способности молекул средней массы не осаждаться трихлоруксусной кислотой (Камышников, 2003).В эксперименте была использована сыворотка крови 20 кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность на стадии уремии из сформированных ранее групп №2 (n=10, содержание креатинина в сыворотке крови 250 – 450 ммоль/л) и №3 (n=10, содержаниекреатинина в сыворотке крови 450 и более ммоль/л). Кошки выбраны исходя из наличия в сыворотке крови молекул средней массы в повышенной концентрации. Полученную из сыворотки крови надосадочную жидкость ранее использовали для определения уровня молекул средней массы (условные единицы;

M±m): группа №2 - 0,615±0,050;

№3 - 0,795±0,057.

Анализируемыйцентрифугат жидкость) представляет собой (надосадочная неочищенную фракцию средних молекул.Надосадочную жидкость каждой пробы добавили к цельной, стабилизированной ЭДТА крови 20 клинически здоровых кошек с содержанием молекул средней массы 0,458±0,055 (условные единицы;

M±m).Долю эхиноцитов в крови клинически здоровых кошек подсчитывали до начала эксперимента, через 30 мин и через 1 час после добавления invitroнадосадочной жидкости, содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации.Доля эхиноцитов в крови клинически здоровых кошек до начала эксперимента составила 5%±0,8%, через 30 мин - 11,5%±0,7%** и через 1 час после добавления invitroнадосадочной жидкости - 16%±1,5%** (**р0,01 по отношению к доле эхиноцитов до начала эксперимента).

Обсуждение В работе была поставлена цель оценить изменения формы эритроцитов в ответ на действие фосфорорганических соединений, молекул средней массы, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности кошек и при детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии.Для исследований интоксикаций экзогенной этиологии в качестве модельных отравляющих веществ использовались ФОИ разной степени токсичности: фосфакол и карбофос.

В сыворотке крови крыс после отравления фосфаколом и карбофосом с использованием жидкосто-гелевой хроматографии выявлен распад белковых молекул с образованием продуктов гидролиза с молекулярной массой менее 30 кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови достоверно увеличивается по отношению к контрольным группам крыс.Световая микроскопия мазков периферической крови показала, что доля эхиноцитов после введения фосфакола и карбофоса подопытным группам крыс достоверно возрастает по отношению к контрольным группам крыс. Ранее был обнаружен дозозависимый эффект образования эхиноцитов в циркулирующей крови, что является причиной нарушения реологических свойств крови (Жичкина, Скопичев, 2004;

Скопичев и др., 2006;

Скопичев, Жичкина, 2010).

В ходе морфологических исследований рельефа поверхности эритроцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии выявлено, что в контрольных образцах крови крыс их подавляющее большинство имеет форму дискоцитов. При отравлении крысфосфаколоми карбофосомнарушается рельеф форма эритроцитов с образованием эхиноцитов, наблюдается отшнуровка мембранного материала. При исследовании эритроцитов крыс после отравления карбофосом наблюдали образование конгломератов деформированных эритроцитов.

В качестве модели эндогенной интоксикации были исследованы кошки в возрасте 5-14 лет, больные хронической почечной недостаточностью. При хронической почечной недостаточности эндогенная интоксикация развивается в результате накопления в сыворотке крови продуктов белкового обмена. Жидкосто - гелевая хроматография образцов сыворотки крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность (n = 30) выявила наличие двух фракций, в образцах содержатся лишь следовые количества фракции с молекулярной массой 30 кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность достоверно увеличивается по отношению к контролю. При проведении световой микроскопии мазков крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, выявлено, что процентная доля эхиноцитов достоверно увеличивается по отношению к контролю.

В качестве метода детоксикации, положительно влияющего на микроциркуляторный кровоток и способствующегоотфильтровыванию и удалениюиз кровотока деформированных эритроцитов,исследована абдоминальная декомпрессия (Скопичев и др. 2003;

Жичкина, 2004;

Скопичев и др., 2007;

Ardilletall., 1969).При отравлении фосфорорганическими соединениями абдоминальная декомпрессия имеет практическое значение в качестве неспецифической терапии. В работе были использованы рекомендуемые ранее режимы локального отрицательного давления в области брюшной полости: 2 сеанса в одном цикле длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа (Скопичев и др., 2007;

Скопичев, Жичкина 2010).Процентная доля эхиноцитов в крови крыс после отравления фосфаколом и проведения абдоминальной декомпрессии увеличивается по мере увеличения временного промежутка между проведением детоксикации и забором крови и максимальна в группе, которой декомпрессия не проводилась и в группе, у которой кровь забрана через двое суток после проведения абдоминальной декомпрессии. Наиболее близка к контрольной доля эхиноцитов через 1, 2 и 5 часов после проведения детоксикации.

Механизм лечебного воздействия абдоминальной декомпрессии связан с приливом крови к органам брюшной полости во время разрежения, улучшением циркуляции крови и её реологических свойств (Аванесов, 2001). После проведения отравленным фосфаколом в дозе ЛД50 крысам абдоминальной декомпрессии в результате дилатации мезентериальных кровеносных сосудов количество эхиноцитов, находящихся в сосудах селезёнки и печени, возрастает по сравнению с контрольными образцами и держится на повышенном уровне в течение первых суток. Через сутки после сеансов локального отрицательного давления процентная доля эхиноцитов начинает снижаться, при этом их содержание в периферической крови увеличивается.

При этом в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки группы, не подвергшейся детоксикации, показатели близки к контрольным образцам (в то время как такие маркеры интоксикации, как процентная доля эхиноцитов и содержание молекул средней массы, имеют максимальные значения).Таким образом, снижение процентной доли эхиноцитов в циркулирующей крови осуществляется за счёт их «утилизации» в паренхиме селезёнки и печени.

При лечении хронической почечной недостаточности с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии была установлена детоксикационная эффективность этого метода путём регистрации снижения маркеров уремии (Скопичев и др., 2007). В работе были использованы рекомендуемые ранее режимы абдоминальной декомпрессии: разрежение 2 кПа, сеанса в одном цикле по 3 мин каждый, пауза 30с. (Скопичев и др., 2007;

Скопичев, Жичкина, 2010). Через 2 часа после проведения абдоминальной декомпрессии кошкам, больным хронической почечной недостаточностью, доляэхиноцитов исодержание молекул средней массы в крови достоверно снижается во всех группах животных.

Проведённый корреляционный анализ показывает наличие сильной положительной связи между процентной долей эхиноцитов и уровнем молекул средней массы. Ранее также было показано, что укорочение периода полужизни (Т1/2) эритроцитов при уремии коррелирует со степенью нарушения функции почек.

Это зависит от присутствия в сыворотке различных токсических веществ.

(Ермоленко, Иващенко, 2000).В связи с вышеизложенным была проверена способность фракции, содержащеймолекул средней массы в повышенной концентрации, оказывать влияние на деформацию эритроцитов в эхиноцитыinvitro.

При воздействии invitro на стабилизированную кровь клинически здоровых кошек надосадочной жидкости с повышенной концентрацией молекул средней массы было обнаружено достоверное увеличение процентного содержания эхиноцитов в мазках крови.

Проведённый анализ состояния рельефа поверхности эритроцитов при хронической почечной недостаточности и при воздействии таких веществ, как фосфорорганические соединения и молекулы средней массы, позволил выявить их общий признак – изменение формы с образованием эхиноцитов.Таким образом, поставленные исследованием задачи были решены и достигнута цель работы.

Выводы 1. После отравления крыс фосфаколом и карбофосом процентная доля эхиноцитов в периферической крови достоверно увеличивается по отношению к интактным крысам. В сыворотке крови крыс после введения фосфорорганических соединений содержатся продукты распада белковых молекул молекулярной массой менее 30 кДа, при этом содержание молекул средней массы в сыворотке крови достоверно возрастает по отношению к интактным крысам.

2. После введения крысам фосфакола и карбофоса форма эритроцитов изменяется с образованием эхиноцитов, что характеризуется появлением выростов на клеточной поверхности, отшнуровкой мембранного материала, уменьшением размера клеток и агрегацией деформированных эритроцитов.

3. При хронической почечной недостаточности процентная доля эхиноцитов в крови кошек достоверно возрастает по отношению к контрольным животным. В сыворотке крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность содержатся продукты распада белковых молекул молекулярной массой менее 30 кДа, при этом в сыворотке крови достоверно увеличивается содержание молекул средней массы по отношению к интактным животным.

4. Локальное отрицательное давление (разряжение 2 кПа), применяемое в области брюшной полости у крыс после отравления фосфаколом и у кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность, способствует достоверному уменьшению в периферической крови процентной доли эхиноцитов и концентрации молекул средней массы. Этот эффект наблюдается в течение суток после проведения абдоминальной декомпрессии крысам, отравленным фосфаколом.

5. Процентная доля эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени крыс, отравленных фосфаколом, после проведения абдоминальной декомпрессии достоверно возрастает по сравнению с контрольными образцами. Через сутки после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии процентная доля эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени начинает снижаться, при этом их содержание в периферической крови увеличивается.

6. При воздействии invitro на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости (неочищенной фракции средних молекул), полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации, процентная доля эхиноцитов в мазках крови достоверно увеличивается.

7. Между процентной долей эхиноцитов и содержанием молекул средней массы в сыворотке крови после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии существует достоверная сильная положительная корреляция.

Практические предложения Материалы диссертации рекомендуется использовать:

• Для дальнейшей оценки тяжести патологического состояния в клинической практике, учитывая изменения уровня молекул средней массы и эхиноцитоз • Для дальнейшего более подробного изучения влияния различных токсинов на систему крови, в том числе на рельеф поверхности эритроцитов • При лечении болезней, сопровождающихся развитием интоксикации, с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии • При дальнейшей разработке и усовершенствовании аппаратуры для локальной абдоминальной декомпрессии научно-промышленной компанией ООО «Фирма АКЦ»

• При проведении лекционных и лабораторно-практических занятий со студентами и ветеринарными врачами Санкт-Петербургской Государственной Академии Ветеринарной медицины • В курсе физиологии, патологической физиологии и клинической фармакологии в высших учебных заведениях Полученные в ходе диссертационного исследования результаты реализованы ООО «Фирма АКЦ» в ходе разработки и усовершенствования комплекта изделий абдоминальной декомпрессии КАД-01-АКЦ, что подтверждается представленным актом реализации научных результатов.Полученные данные представляют научный интерес для ФГУН Институт токсикологии;

ФГОУ ВПО Санкт-Петербургская Государственная Академия Ветеринарной Медицины;

ФГОУ ВПО "Военно Медицинская Академия имени».

Список опубликованных работ по теме диссертации Статьи в журналах, соответствующих перечню ВАК РФ:

1. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение морфологических и биохимических показателей крови при детоксикации с применением локальной декомпрессии // Ветеринарная практика. - № 3 (46). – 2009. – С. 35-39.

2. Смирнова О.О. Изменение морфологических и биохимических показателей эритроцитов при интоксикации //Международный вестник ветеринарии. – 2010, №1. – С. 48-51.

3. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средней массы и эхиноцитоз при эндо- и экзо– генных интоксикациях. // Морфология. – 2010, т. 137, вып. №3. – С. 31 - 35.

Публикации в других изданиях:

1. Смирнова О.О. Острый экзотоксический шок // Мат. 61-ой науч. конф.

молодых учёных и студентов СПбГАВМ. – СПб, изд. СПбГАВМ, 2007. - С. 96 - 98.

2. Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средних масс в крови животных при интоксикациях различной этиологии // Мат. 62-ой юбилейной науч. конф. молодых учёных и студентов СПбГАВМ – СПб: изд. СПбГАВМ, 2008. - С. 104 - 106.

3. Смирнова О.О., Жичкина Л.В. Молекулы средней массы в плазме крови как маркер эндотоксикоза // Мат. междунар. науч. конф. профессорско преподавательского состава, науч. сотрудников и аспирантов СПбГАВМ. – СПб, изд.

СПбГАВМ, 2009. – С. 95 - 97.

4. Смирнова О.О. Молекулы средней массы в плазме крови при отравлении и детоксикации // Химия и жизнь: сб. тезисов и докладов региональной научно практической конференции / НГАУ. – Новосибирск, 2009. - С. 136.

5. Смирнова О.О. Изменение формы эритроцитов при интоксикации // Мат.

всеросс. съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». - СПб, 2009. – С. 78 - 79.

6. Смирнова О.О., Скопичев В.Г. Эхиноцитоз при интоксикациях различной степени//Инновационный потенциал молодых учёных в развитии АПК Сибири: мат. межрегион. конф. молодых учёных и специалистов аграрных вузов Сибирского федерального округа. - Новосибирск, 2009. - С. 182 – 184.

7. Смирнова О.О., Скопичев В.Г. Диагностическое значение эхиноцитоза при эндогенных и экзогенных интоксикациях // Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введённых в зоокультуру:

мат. междунар. симпозиума. - Петрозаводск, 2009. – С. 222 - 226.

8. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средней массы в сыворотке крови животных при почечной недостаточности. // Научная жизнь. - №6. – 2009. – С. 11 - 13.

9. Смирнова О.О. Влияние локальной абдоминальной декомпрессии на процентное содержание эхиноцитов в крови животных при интоксикациях // Мат.

междунар. науч. конфер. профессорско – преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ. – СПб, Изд. СПбГАВМ, 2010. – С. 76 - 78.

10. Смирнова О.О. Изменение формы эритроцитов под влиянием цитохолазина В.

// Материалы 64-й научной конференции молодых учёных и студентов СПбГАВМ. – СПб: изд. СПбГАВМ, 2010. – С. 82 – 83.

11. Скопичев В.Г., Жичкина Л.В., Смирнова О.О. Молекулы средней массы как критерий диагностики патологических состояний. Учебно-методическое пособие для ветеринарных врачей. – СПб: «Анонс», 2010. – 30 с.



 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.