авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 |

Морфофункциональные аспекты влияния акупунктуры на взаимодействие нейромедиаторов в структурах органов иммуногенеза и кожи

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ГУРЬЯНОВА Евгения Аркадьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ВЛИЯНИЯ

АКУПУНКТУРЫ НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НЕЙРОМЕДИАТОРОВ В

СТРУКТУРАХ ОРГАНОВ ИММУНОГЕНЕЗА И КОЖИ

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Саранск - 2011 2

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова»

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Любовцева Любовь Алексеевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Кругляков Павел Павлович доктор медицинских наук, профессор Яглов Валентин Васильевич доктор медицинских наук, профессор Степанова Ирина Петровна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится « » 2011 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при Мордовском государст венном университете им. Н.П. Огарва по адресу: 430005, Республика Мордо вия, г. Саранск, ул. Большевистская, д. 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский го сударственный университет имени Н.П. Огарева» (430005, Республика Мордо вия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

.

Автореферат разослан « _ »2011 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор В.П. Балашов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современная практическая медицина характеризу ется стремлением к выявлению механизмов действия акупунктуры. Получены результаты, демонстрирующие эффективность акупунктуры в плане повышения общей резистентности организма, оказания иммунокорригирующего действия, восстановления адаптационных способностей нейрососудистого аппарата, по вышения физической и умственной работоспособности, увеличения анаэробного порога энергообеспечения, улучшения микроциркуляции и реологических свойств крови, нормализации липидного обмена, обеспечения выраженного аналгезирующего эффекта (Гойденко В.С., 1994;

Зилов В.Г., 2006;

Карпеев А.А., 2002;

Любовцев В.Б., 2000;

Немсараева Г.Т., 2006). Вместе с тем многие аспекты механизмов действия акупунктуры, обеспечивающих вышеперечисленные эф фекты, ещ не до конца ясны, в том числе и процессы, происходящие на уровне первичного звена акупунктурной системы – кожи в области точек акупунктуры.

Остаются неизученными вопросы строения, функции, взаимодействия как меж ду клеточными структурами кожи в зонах точек акупунктуры (ТА), так и между точками и взаимосвязанными с ними органами (Ахмеров Н.У., 1985;

Вогралик В.Г., 2005;

Лиманский Ю. П., 2007).

Известно, что биогенные амины являются сигнальными молекулами единой нейроиммуноэндокринной системы, что вызывает большой интерес к изучению нейромедиаторов, обладающих разнообразными эффектами (Яглов В.В., 1989;

Любовцева Л.А., 1998;

Кветной И.М., 2006). Выявлено, что клетки диффузной эндокринной системы содержатся как в коже в проекции точек акупунктуры, так и во многих внутренних органах, в связи с чем нарушение синтеза и выделе ния биогенных аминов может сказаться на функционировании акупунктурной системы в целом (Степанова И.П., 2003;

Полякова В.О., 2007;

Любовцева Л.А. с соавт., 2009).Так, неизвестно влияние иглоукалывания (ИУ) на структурные пе рестройки тимуса и селезнки при использовании точек разной локализации (Табеева Д.М., 2005), а также на процессы взаимодействия кожи, тимуса и селе зенки между собой. С позиций акупунктуры интересно знать, какой из органов иммуногенеза является ведущим в норме и после ИУ в точки разной локализа ции.

В последние десятилетия в научной литературе были опубликованы работы по изучению влияния акупунктуры на деятельность организма. Однако наименее изученным аспектом проблемы является определение процессов, происходящих после ИУ в комплексе биоаминсодержащих структур кожи. Эти процессы обес печивают первичный механизм запуска акупунктурных реакций и явлений, воз никающих в органах, связанных с этими точками кутано-висцеральными связя ми (Василенко А.В., 2009;

Jong M. S., 2009;

Lundeberg T., 1991;

Fujiwara R., 1999;

Okumura M., 1999;

Liu Y.M., 2010). До сих пор в литературе не представлена картина морфофункционального состояния клеток диффузной эндокринной сис темы и иммунных клеток кожи, не дифференцированы особенности строения кожи в проекции акупунктурных точек, находящихся на различных меридианах и принадлежащих разным группам: корпоральных, дистальных, лицевых. Ис следования в этом направлении позволят детально изучить участие вышеупомя нутых клеток в нейроиммуноэндокринных механизмах иглоукалывания.

Исходя из вышесказанного, поэтапное изучение процессов, происходящих в тимусе, селезенке и коже после акупунктурного воздействия, предположительно позволит выявить проблему участия биоаминсодержащих структур кожи в про екции точек акупунктуры в механизмах акупунктурной регуляции, установить значение взаимодействия нейромедиаторных структур между точкой акупунк туры и корреспондируемым органом, а также выявить взаимодействие цен трального и периферического органов иммунитета между собой, что представ ляет значительный научно-практический интерес.

Цель исследования: изучение морфологических изменений в биоаминном статусе тимуса, селезнки и кожи в проекции точек акупунктуры при иглоука лывании и обоснование регулирующего влияния акупунктуры на центральные и периферические органы иммуногенеза.

В задачи работы входило:

1. Исследовать нейромедиаторный статус и морфофункциональные структуры тимуса и селезнки крыс после иглоукалывания в разные виды точек акупункту ры в динамике наблюдения.

2. Выявить корреляционные взаимоотношения между биоаминсодержащими структурами тимуса, селезнки и тучными клетками кожи крыс в проекции то чек акупунктуры на разных сроках после иглотерапии.

3. Сравнить влияние иглоукалывания и лазеропунктуры на содержание биоген ных аминов в коже крыс на разных сроках после воздействия в акупунктурные точки GV 14 и LI 11.

4. Провести сравнительный анализ и изучить особенности распределения со держания биогенных аминов в аминосодержащих структурах кожи человека в области точек акупунктуры лица до и после иглоукалывания.

5. Изучить распределение и провести сравнительный анализ состава биоаминсо держащих, иммунокомпетентных клеток и клеток диффузной эндокринной сис темы кожи человека в области вентральных, дорзальных и дистальных точек акупунктуры и вне их.

6. Определить участие нейромедиаторных структур тимуса, селезнки и кожи крыс в автономной нейрогуморальной регуляции изучаемых органов при дейст вии акупунктуры.

Научная новизна. Впервые описана сравнительная динамика нейроме диаторов в биоаминсодержащих структурах тимуса и селезенки крыс через мин, 1, 2, 4 ч после иглоукалывания в точки акупунктуры GV 14 и LI 11 с раз личной экспозицией.

Впервые описана сравнительная динамика состояния нейроаминов в био аминсодержащих структурах кожи крыс в проекции точек акупунктуры GV 14 и LI 11 через 15 мин, 1, 2, 4 ч после воздействия иглоукалыванием и лазеропунк турой при различной экспозиции процедуры.

Впервые изучены корреляционные взаимосвязи между биологически ак тивными веществами как внутри каждого органа, так и между изучаемыми орга нами. Определены взаимовлияния биоаминсодержащих клеток в изучаемых ор ганах после иглоукалывания и выявлено их поэтапное влияние во временном ас пекте на перестройку биоаминсодержащих структур этих органов. На основании полученных данных можно судить о регуляторном влиянии иглоукалывания че рез ТА, расположенные на разных меридианах, на органы иммуногенеза и их перестройку.

Впервые описана сравнительная динамика состояния биоаминсодержащих структур кожи человека в проекции лицевых точек акупунктуры TE 17 и SI через 15 мин, 1, 2, 4 ч после воздействия иглоукалыванием при различной экспо зиции процедуры.

Впервые выявлены локализация и особенности экспрессии иммунокомпе тентных и клеток диффузной эндокринной системы в коже человека в области корпоральных, дистальных и лицевых ТА.

Положения диссертации, выносимые на защиту 1. Наибольший эффект от воздействия иглоукалыванием в структурах ти муса и селезнки крыс определяется изменением нейроаминов в биоаминсодер жащих структурах через 1 ч после акупунктуры. Наиболее реагирующими структурами тимуса являются гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК) премедуллярной зоны, затем субкапсулярной зоны;

селезнки - адренергические нервные волокна центральной артериолы, затем ГЛК реактивного центра лим фоидного узелка селезенки.

2. Иглоукалывание изменяет корреляционные связи как между биогенны ми аминами в каждом из изучаемых органов у крыс, так и межорганные взаимо действия, тем самым стимулируя или подавляя работу органов.

3. В коже крыс наиболее реагирующими на иглоукалывание через 15 мин структурами по содержанию биогенных аминов являются эпителий, адренерги ческие нервные волокна и тучные клетки.

4. Иглоукалывание и лазеропунктура с разной экспозицией вызывают от личающиеся во временном аспекте реакции биоаминсодержащих структур кожи крыс по содержанию биогенных аминов и по степени сульфатации гепарина в дорзальных и дистальных точках акупунктуры, что объясняет разницу в типах возбуждающего метода акупунктуры.

5. Иглоукалывание с разной экспозицией вызывает отличающиеся реакции структур кожи человека в проекции точек акупунктуры лица в динамике наблю дения.

6. Часть гранулярных люминесцирующих клеток кожи человека, дающих реакцию на биогенные амины, содержит нейронспецифическую энолазу, синап тофизин. Кожа человека в области лицевых, дистальных, дорзальных и вен тральных точек акупунктуры отличается по числу и локализации, глубине зале гания иммунокомпетентных и клеток диффузной эндокринной системы, как ме жду собой, так и по сравнению с участками вне точек акупунктуры. Наибольшее число нейроэндокринных клеток выявлено в вентральной точке акупунктуры CV 6, Т-хелперов – в дорзальной точке GV 14.

Научно-практическая значимость работы. Выявленные морфофунк циональные особенности кожи в проекции дистальных, дорзальных, вентраль ных точек акупунктуры позволяют объяснить специфичность применения опре делнных точек акупунктуры в клинической практике. Разное распределение биогенных аминов и тучных клеток по слоям кожи позволяет объяснить разную глубину залегания активной части точки и, следовательно, рекомендуемую эм пирически глубину постановки иглы.

Выявленные закономерности позволяют дифференцированно подходить к выбору времени экспозиции иглы при назначении соответствующего лечения с целью повышения конечной эффективности акупунктуры.

Акупунктура через биоаминсодержащие структуры влияет на регуляцию изучаемых органов иммуногенеза, следовательно, результаты проведнного ис следования могут стать теоретическим обоснованием для проведения клиниче ских испытаний использования акупунктуры с иммуномодулирующей целью, что в конечном итоге, позволит снизить заболеваемость и корректировать им мунный гомеостаз у человека.

Выявление иммуностимулирующей активности иглоукалывания свиде тельствует о перспективности дальнейшего изучения этого метода в качестве средства профилактики и лечения и дает основание шире включить акупунктуру в стандарты лечения больных.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Международном конгрессе «Восстановительная медицина и реабилитация»

(Москва, 2005, 2006, 2007);

V симпозиуме с международным участием «Физио логия иммунной системы» (Москва, 2006);

Всероссийской конференции «Акту альные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006);

на I, II Всероссий ском Съезде врачей восстановительной медицины (Москва, 2007, 2008);

V все мирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007);

Конгрессе с международным участием «Традиционная медицина-2007» (Москва, 2007);

XII международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации»

(Москва, 2007);

Бабухинских чтениях (Орл, 2005, 2006, 2007, 2011);

VIII, IX Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2007, 2008);

Всероссийской конференции, посвященной 100-летию Л. И. Фалина (Мо сква, 2007);

Всероссийской конференции «Здоровьесберегающие технологии»

(Чебоксары, 2007);

Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 85-летию Д.С. Гордон «Морфология в теории и практике» (Чебок сары, 2008),;

VIII, IX, X конгрессах Международной ассоциации морфологов (Орел, 2006, Бухара, 2008);

конференции, посвященной 100-летию со дня рож дения Д.А. Жданова (Москва, 2008);

VI съезда анатомов, гистологов и эмбрио логов России (Саратов, 2009);

Всероссийской научно-практической конферен ции (Смоленск, 2009);

Международной научной конференции, посвященной 65 летию Ивановской школы морфологов (Иваново, 2009);

Международном кон грессе «Здравница» (Москва, 2008, 2009);

VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010);

«Однораловских морфологических чтениях»

(Воронеж, 2010);

Всероссийской научно-практической конференции «Актуаль ные проблемы биологии» (Чебоксары, 2011).

Внедрение результатов исследований. Основные положения диссерта ции внедрены в клиническую работу Центра Здоровья ФГБОУ ВПО «ЧГУ име ни И.Н. Ульянова», ГУЗ «Республиканский Центр восстановительной медицины и реабилитации» Минздравсоцразвития Чувашии, г. Чебоксары, а также вклю чены в лекционный курс на кафедрах восстановительной медицины ФДПО ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, восстановительной медицины и цитологии, гистологии, эмбриологии ФГБОУ ВПО «ЧГУ имени И.Н. Ульянова», рефлексотерапии ФГОУ «Институт усовершенствования вра чей» Минздравсоцразвития Чувашии.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 65 печатных работ, в том числе 17 работ в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, рекомендо ванных ВАК России, 1 монография, получено 1 рацпредложение. Подготовлены методические рекомендации для студентов медицинского вуза и практикующих врачей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 315 стр. ма шинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственного исследования (7 глав), обсуж дения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и библио графии, включающей 365 источника (196 отечественных, 160 иностранных пуб ликаций). Диссертация иллюстрирована 47 таблицами и 48 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал исследования В ходе работы проведены исследования морфофункционального состоя ния тимуса, селезнки, кожи крыс и кожи человека в проекции точек акупункту ры после иглоукалывания.

Для изучения органов крыс экспериментальные животные были разделены на несколько серий. Белые беспородные крысы-самцы, массой от 180 до 240 г, содержались в стандартных условиях вивария, получали стандартный рацион и воду ad libitum. При отборе материала для исследования учитывались возраст, масса и общее состояние животного в момент опыта. Все действия, предусмат ривавшие контакт с экспериментальными животными, осуществлялись в соот ветствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» утвержденных приказом Минздрава СССР №755 от 12 августа 1977.

Первая серия экспериментов проведена на 70 белых беспородных крысах.

Серия была разделена на группы. Животным первой группы (сравнения), со стоящей из 35 крыс, производилось иглоукалывание стальными иглами (пр-во з да «Контур», г. Чебоксары, Россия) в зоны рядом с ТА сбоку от меридиана.

Опытная группа (35 крыс) подвергалась воздействию иглоукалыванием в ТА GV 14 и LI 11 в течение 10 мин, что соответствует возбуждающему (II) методу воздействия. Забор материала (тимуса, селезнки и кожи) производили через мин, 1, 2, 4 ч, 1 сутки после извлечения иглы. Весь исследуемый материал – ку сочки кожи размером 0,50,5 см, тимус, селезнку – извлекали у крыс прижиз ненно под эфирным наркозом в стадии глубокого сна.

Вторая серия исследований была проведена на 140 белых беспородных крысах. Серия была разделена на группы. Животным первой группы (сравне ния), состоящей из 70 крыс, производилось 2- и 10-минутное иглоукалывание в зоны рядом с ТА сбоку от меридиана. Опытной группе (70 крыс) проводили иг лоукалывание стальными иглами в ТА GV 14 - корпоральная точка акупунктуры и LI 11 - точка, относящаяся к группе дистальных точек акупунктуры, являю щаяся точкой общего действия и обладающая иммуномодулирующими свойст вами (Якупов Р. А., 2007). Иглоукалывание проводили в течение 2 мин, что со ответствует возбуждающему (I) методу воздействия и 10 мин, что соответствует возбуждающему (II) методу воздействия, наиболее часто применяемому в прак тике (Табеева Д.М., 2001). Забор материала (кусочки кожи в области исследо ванных точек акупунктуры GV 14 и LI 11 размером 0,50,5 см) производили че рез 15 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 1 сутки после извлечения иглы.

Третья серия экспериментов с целью изучения влияния лазеропунктуры на структуры кожи в проекции точек акупунктуры проведена на 140 белых беспо родных крысах. Серия также была разделена на группы. Животным первой группы (сравнения), состоящей из 70 крыс, производилась лазеропунктура в зо ны рядом с ТА GV 14 и LI 11 сбоку от меридиана. Для лазеропунктуры исполь зовался низкоинтенсивный лазерный аппарат «Креолка» (полупроводниковый инжекционный импульсный на кристалле GaAs типа ЛПИ-101 с длиной волны – 0,89 мкм (890 нм), импульсная мощность излучения - 5 Ватт, частота следования импульсов - 1500 Гц, средняя мощность излучения — 0,75 ~ 1 мВт, пр-во г. Мо сква). Опытная группа (70 крыс) подвергалась воздействию лазеропунктурой в ТА GV 14 и LI 11. Лазеропунктура опытным и контрольным животным прово дилась в течение 30 и 60 секунд, что соответствует возбуждающему и гармони зирующему методу воздействия. Забор материала производили через 15 мин, 1, 2, 4 ч, 1 сутки после процедуры.

Иглоукалывание и лазеропунктуру проводили в одно и то же время суток после определения локализации ТА с помощью анатомо-топографического ме тода и стандартного прибора «Элитерис 5 УМ – 003» и последующей маркиров ки. Перед измерением электрокожного сопротивления кожу крыс тщательно вы бривали. Измерения осуществлялось на стабилизированном постоянном токе ве личиной 2 мкА при напряжении 1V. Для фиксации животных использовались клетки небольшого размера. Из полученных органов крыс приготавливались криостатные и парафиновые срезы. Изучение и измерение каждой структуры проведено в 10 полях зрения. Всего исследовалось до 50 структур в каждом пре парате. В табл. 1 отражена схема распределения животных по сериям, группам и этапам экспериментального раздела исследований.

Структурно-функциональная организация кожи в проекции точек аку пунктуры у человека изучена на 2 видах материала. Были изучены образцы ко жи трупов (с согласия родственников) в проекции точек акупунктуры LI 11, CV 6, GV 14 (15 человек: 7 мужчин и 8 женщин, возраст от 48 до 64 лет), условно здоровых при жизни и умерших от травм. Время с момента наступления смерти до взятия материала не превышало 8 ч.

Таблица Число крыс, использованных в экспериментах Иглоукалывание Итого 2 мин 10 мин Исследованные Инт Через Через Через Через4 Через Через Через Через Через Через объекты 1ч 2ч ч 1 с 15 1ч 2ч 4ч 1с мин мин Тимус О/К 5 - - - - - 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 Селезенка О/К 5 - - - - - 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 Кожа (дорзаль О/К 5 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 ная точка GV14) Кожа (дисталь О/К 5 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 ная точка LI 11) Лазеропунктура Инт 30 с 60 с Кожа (дорзаль ная точка GV О/К 5 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 14) Кожа (дисталь О/К 5 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 ная точка LI 11) Примечание: О – опытные, К – контрольные, инт – интактные Исследование кожи человека в проекции точек акупунктуры лица (GB 2, SI 19, TE 17, РС 7) до и после иглоукалывания было проведено на образцах, взя тых после операции фэйс-лифтинга (№=12). Пациенткам были женщины 45- лет, согласившиеся участвовать в эксперименте. На проведение эксперимента получено разрешение этического комитета ФГБОУ ВПО «ЧГУ имени И.Н. Уль янова» (протокол №2 от 17.10 2010). В данной группе непосредственно до опе рации проводилось иглоукалывание стальными иглами в течение 10 мин после маркировки в вышеуказанные точки и в контрольные участки кожи.

Локализация точек акупунктуры у трупов и у живых лиц осуществлялась с помощью анатомо-топографического метода и контролировалась путм опреде ления электрокожного сопротивления на аппаратно-программном комплексе «У Син» (Патент №2119325 от 27.09.1998). Контролем служила кожа, находящаяся рядом с исследованной точкой на расстоянии 1 см в сторону от меридиана.

Электрокожное сопротивление в точках составляло 100-150 кОм, вне точек аку пунктуры – более 300 кОм.

Локализация точек следующая: ТА LI 11 – находится на верхней конечно сти, в латеральном конце локтевой складки, ТА SI 19 – на середине между ко зелком и суставом нижней челюсти;

ТE 17 – находится кзади от основания моч ки уха, между сосцевидным отростком и восходящей ветвью нижней челюсти;

GB 2 – кпереди и книзу от козелка;

ТА GV 14 – между остистыми отростками шейного и I грудного позвонка, ТА CV 6 – на 1,5 цуня ниже пупка по средней линии;

внемеридианная ТА PC 7 – на 1 мм кнаружи от угла глаза на верхнем ве ке (Самосюк И.З., Лысенюк В.П., 2005).

Таблица Место взятия образцов кожи человека Точки акупунктуры Число Корпоральные Число лица образцов ко точки акупунктуры образцов кожи (операционный ма- жи (кожа трупов) териал) GV 14 и контроль ТЕ 17 и контроль 15 LR 14 и контроль SI 19 и контроль 15 LI 11 и контроль GB 2 и контроль 15 CV 6 и контроль PC 7 и контроль 15 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Окраска гематоксилин-эозином использовалась для общей оценки состоя 1.

ния структур органа после иглоукалывания.

Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа (1969) в моди 2.

фикации Е.М. Крохиной применялся для выявления структур тимуса, селезнки, кожи, содержащих катехоламины (КА) и серотонин (СТ).

Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Евена, Роста (1972) ис 3.

пользовали для выявления структур тимуса, селезнки, кожи, содержащих гис тамин.

Метод цитоспектрофлуориметрии (Карнаухов В.) использовался для коли 4.

чественного измерения содержания КА, СТ, гистамина. Анализ производился на люминесцентном микроскопе Leiсa (Германия) при помощи микрофлуори метрической насадки ФМЭЛ-1А. Интенсивность свечения измерялась в едини цах флуоресценции (условные единицы (у. е.) по шкале регистрирующего при бора-усилителя).

С целью определения влияния того или иного биоамина на общий процесс 5.

определяли серотониновый (Is) индекс, являющийся средней величиной от сум мы частных соотношений содержания биоаминов.

Аргентафинная реакция Массона-Фонтаны использовалась для гистохи 6.

мической идентификации индолсодержащих структур кожи.

Иммуногистохимическое исследование проводили методом трехэтапного 7.

непрямого иммуноферментного анализа с использованием первичных МКАТ против антигенных маркров нейроэндокринных клеток (синаптофизина, ней ронспецифической энолазы) и иммунокомпетентных клеток (CD4, CD 45, CD 68, PSNA) на базе Республиканского центра МЗ РТ «Современные технологии в морфологической диагностике» с применением реактивов и согласно рекомен дациям фирмы-изготовителя «Dako» (Дания).

Окраска полихромным толуидиновым синим по А. Унна применялась для 8.

контроля состояния тканевых мукополисахаридов и гепарина в тучных клетках тимуса, селезнки, кожи крыс и кожи человека. Анализ популяции тучных кле ток проводили по методике Д.П. Линднер с соавт.(1980): определяли число кле ток в 1 мм2 площади среза, соотношение по степени дегрануляции, а также сте пень сульфатации гепарина.

Постоянные микропрепараты изучались с помощью бинокулярного мик 9.

роскопа «Альтами-био» (Россия) при увеличениях 10x40, 10x100. Микрофото получали с использованием цифрового фотоаппарата Canon («Canon», Герма ния).

10. Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили с помощью персонального компьютера методом вариационной статистики с оцен кой достоверности по t-критерию Стьюдента с использованием пакета программ «Statistica 6.0». В работе приводятся следующие показатели: М' – средняя ариф метическая величина;

m' – ошибка средней арифметической величины. Досто верные различия при уровне p0,05.

11. Корреляционный анализ применялся для выявления взаимосвязи между нормально распределенными количественными признаками. Сила предполагае мой взаимосвязи между величинами определялась по значению коэффициента корреляции (Петри А., Сэбин К., 2003). Математическая обработка с вычислени ем коэффициента корреляции и его достоверности проводилась на персональном компьютере по специально разработанной программе. Известно, что коэффици ент корреляции независимо от знака указывает на значимую в паре связь, если выражается числом больше 0,5. Если коэффициент корреляции меньше 0,3, то связь в паре слабая или отсутствует;

0,3 - 0,7 – связь умеренная;

0,7 - 1,0 – связь в паре сильная или полная. Положительный коэффициент корреляции означает однонаправленное изменение средних значений в исследуемой паре, отрица тельный – разнонаправленную динамику изучаемых показателей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Исследование тимуса после 10-минутного иглоукалывания в точки акупунктуры GV 14 и LI Для понимания вопросов взаимодействия нейромедиаторных структур ор ганов иммунногенеза и кожи в проекции точек акупунктуры после иглоукалы вания нами были вначале определены особенности нейромедиаторного статуса в каждом исследованном органе. Люминесцентно-гистохимическая характеристи ка интактных тимуса, селезенки и кожи ранее были описаны В.Е. Сергеевой (1976);

Л.А. Любовцевой (1980);

Л.А. Сысоевой (1994);

Е.А. Гурьяновой (2003);

Н.Н. Табаевой (2007).

При люминесцентно-гистохимическом исследовании тимуса уже через 15 мин после ИУ уменьшилось число гранулярных люминесцирующих клеток (ГЛК) в премедуллярной зоне дольки, а в некоторых дольках сохранялись лишь «остатки» цепочки из одного ряда премедуллярных ГЛК (рис. 1, а, б). В субкап сулярной зоне, наоборот, число ГЛК увеличилось и достигло 12 – 15 вместо 5- у интактных животных (рис. 1, в, г). Число люминесцирующих ТК возросло в 1, раза. Содержание гистамина в ГЛК субкапсулярной зоны статистически досто верно повысилось в 1,82 раза. При общем снижении числа ГЛК премедуллярной зоны уровень гистамина в них вырос в 1,44 раза по сравнению с интактными животными. Содержание гистамина в тимоцитах коркового и мозгового вещест ва статистически достоверно увеличилось в 2,53 и в 2 раза по сравнению с кон трольными животными. В контрольных срезах рост содержания гистамина про исходил в меньшей степени.

Число телец Гассаля после ИУ не отличалось от такового в группе ин тактных животных и составляло 1,5±0,3 для каждой дольки. Однако на этом сроке мы зарегистрировали в них достоверное повышение содержания гистами на в 1,4 раза.

Динамика люминесценции КА и СТ характеризовалась повышением их содержания через 15 мин после ИУ в ГЛК премедуллярной зоны и тимоцитах обеих зон. Сходную люминесцентно-гистохимическую картину срезов тимуса наблюдал Б.М. Гордон (1996) при иммобилизационном стрессе. По-видимому, к специфическому влиянию акупунктуры присоединяется стрессовая реакция.

Однако в исследованиях Б. М. Гордона через 15 мин было замечено увеличение числа ГЛК как в субкапсулярной, так и в премедуллярной зонах тимусной доль ки, а увеличение общего числа тучных клеток происходило без усиления суль фатации гепарина в них.

Через 1 ч после ИУ содержание гистамина в тимоцитах коркового веще ства снизилось в 1,8 раза, а в тимоцитах мозгового вещества – в 1,3 раза по срав нению с предыдущим сроком. В ГЛК обеих зон тимусной дольки заметна тен денция к снижению содержания гистамина (рис. 2). Через 1 ч после процедуры началось резкое снижение содержания моноаминов в ГЛК обеих зон тимусных долек (рис. 2). В контрольных срезах в ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зон содержание гистамина достоверно не изменялось.

3 1 4 2 а б в г Рис. 1. Люминесцентная картина тимусной дольки крыс: а – цепочка премедуллярных клеток между корковым и мозговым веществом до иглоукалывания (ИУ);

б - исчезновение цепочки премедуллярных клеток через 15 мин после ИУ;

в - гранулярные люминесцирующие клетки субкапсулярной зоны до ИУ;

г - через 15 мин после ИУ. Микроскоп ЛЮМАМ. Метод Кросса.

Ув.: а, б – 200;

. в, г - 600. Обозначения: 1 – мозговое вещество, 2 – корковое вещество, 3 – премедуллярные клетки, 4 – субкапсулярные клетки Через 2 ч после ИУ содержание гистамина в тимоцитах мозгового веще ства продолжало постепенно снижаться, но превышало его концентрацию в 1, раза по сравнению с интактными животными. В ГЛК субкапсулярной зоны со держание гистамина снизилось в 1,7 раза, в ГЛК премедуллярной зоны – достиг ло уровня интактных крыс. Показатели содержания моноаминов в ГЛК обеих зон резко снизились.

Число ГЛК в премедуллярной зоне тимусной дольки и число люминесци рующих ТК в септах пока не восстановилось и осталось более чем в 2 раза меньшим, по сравнению с интактными крысами. Увеличилось число распавших ся ТК, определяющихся в виде жлтого «облачка», с множественными гранула ми, лежащими рядом, т.е. закончивших фазу выделения секрета.

Содержание гистамина (у.е) в структурах тимуса белых крыс после ИУ * у.е.

Интактные Через 15 мин Через 1 ч после Через 2 ч после Через 4 ч после крысы после ИУ ИУ ИУ ИУ группы животных Тимоциты коркового вещества Тимоциты мозгового вещества ГЛК премедулярной зоны ГЛК субкапсулярной зоны Содержание катехоламинов (у.е) в структурах тимуса белых крыс * после ИУ у.е. Через 4 ч Интактные Через 15 мин Через 1 ч после ИУ Через 2 ч после ИУ крысы послеИУ группы животных Тимоциты коркового вещества Тимоциты мозгового вещества ГЛК премедулярной зоны ГЛК субкапсулярной зоны Рис. 2. Динамика содержания гистамина и катехоламинов в структурах дольки тимуса крыс после иглоукалывания (ИУ) в точки LI 11 и GV 14;

* - статистически значимые различия от значений контрольной группы Сравнивая полученные результаты с данными по методу А. Унна, выявле но, что тучные клетки становятся полностью сульфатированными. Таким обра зом, ИУ усилило процесс сульфатации гепарина, что может быть связано с по вышением содержания нейроаминов в межклеточном пространстве (Бочкарев В.А., 1996;

Гималдинова Н.Е., 2007;

Мулендеев С.В., 2008).

Через 4 ч после ИУ в большинстве долек тимуса вновь восстановилась цепочка из премедуллярных ГЛК, состоящая из 1-2 рядов клеток. Число субкап сулярных ГЛК уменьшилось в 1,5 раза, но превысило первоначальные показате ли в 1,7 раза. Содержание гистамина в исследованных структурах тимуса вновь вернулось к контрольным цифрам. Однако на этом сроке в септах не выявлялись люминесцирующие тучные клетки, находящиеся в фазе накопления секрета.

Серотониновый индекс в структурах дольки тимуса интактной группы крыс имел значения от 1,33 до 1,53. Наибольший серотониновый индекс зареги стрирован в ГЛК субкапсулярной зоны дольки тимуса – 1,53, что свидетельству ет о выраженных супрессивных свойствах этих клеток. После ИУ в исследуемые ТА серотониновый индекс превышало единицу во всех структурах дольки тиму са. По сравнению с интактными и контрольными крысами, наибольшее сниже ние серотонинового индекса и приближение его к единице наблюдалось в тимо цитах мозгового вещества на сроке 1 и 2 ч после ИУ, а в ТК – на сроке 2 и 4 ч после ИУ. Наибольшую обеспеченность КА мозговых тимоцитов и уменьшение в них уровня супрессорного моноамина – серотонина, можно рассматривать как активацию их пролиферации. Известно, что КА оказывают стимулирующее воз действие на иммунные процессы (Забродский П.Ф. с соавт., 2001;

Elenkov I. J. et al., 2000).

При окраске гематоксилин-эозином через 1 ч после ИУ в тимусе опыт ных животных появллись крупные дольки, размеры коркового вещества которых превышали аналогичные показатели интактных крыс в 1,7 раза, а мозгового – в 1,5 раза. В некоторых дольках происходила инверсия мозгового вещества в кор ковое. Вероятно, данные перемещения свидетельствуют о подготовке к образо ванию новых долек (Любовцева Л.А., 1993). В контрольных срезах подобные изменения носили характер тенденции. Через 2 ч число измененных долек уве личилось в 1,4 раза по сравнению с предыдущим сроком и осталось на этом уровне до конца эксперимента. Через 4 ч мы наблюдали выход литических гра нул в субкапсулярной зоне тимусной дольки, что является характерной чертой дифференцированных CD 8+ Т-клеток (Пащенков М.В. с соавт., 2010).

При окраске по А. Унна через 15 мин после ИУ у опытных крыс выявлено увеличение числа 2-, появление 3-, и полное исчезновение 1-метахроматичных ТК. Это свидетельствует об усилении в них процессов сульфатации гепарина (Гордон Д.С., 1996). Наибольшие изменения в популяции ТК происходили через 1 и 2 ч после ИУ. Общее число ТК возрастало в 1,2 раза, причм увеличивалось число клеток только в междольковых септах. После ИУ усилились процессы де грануляции ТК: доля ТК (цельных) в фазе накопления постепенно уменьшилась и к 2 ч после иглоукалывания исчезла совсем (рис. 3).

Че ре з 2 часа после иглоукалывания Цельные Контрольные ж ивотные Т отально Т отально 29% дегранулир дегранули ованые рованные 50% 11% Частично Частично Цельные дегранули дегранулир 3% рованные ованные 47% 60% Рис. 3. Соотношение тучных клеток в септах тимуса крыс по степени их дегрануляции через 2 ч после 10-минутного иглоукалывания в точки акупунктуры GV 14 и LI У контрольных крыс в септах появились 1-метахроматичные ТК, а по сте пени функциональной активности - преобладали ТК в фазе выделения секрета (частично дегранулированные), что отличало их от экспериментальных живот ных.

При изучении корреляционных связей между тимоцитами мозгового и тимоцитами коркового вещества, между ГЛК субкапсулярной зоны и тимоцита ми коркового вещества, а также между ГЛК премедуллярной зоны и тимоцитами мозгового вещества у интактных животных по соотношению гистамин/гистамин зарегистрированы сильные отрицательные корреляционные связи равные (r=0,8), что свидетельствует об их доноро-реципиентных отношениях (Лузико ва Е. М., 2005). Связи между ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зон сла бые, что подтверждает рассогласованность синтеза биоаминов между собой на уровне нейромедиаторного обмена (Гималдинова Н.Е., 2008).

Через 1 ч после ИУ между ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зон по являлась сильная положительная корреляционная связь гистамин/гистамин (r=0,81), что указывает на общность характера процессов в данных структурах (Нестерин К. В., 2007).

Через 2 ч после ИУ устанавливались сильные отрицательные корреляцион ные связи по всем нейромедиаторам между ГЛК субкапсулярной зоны тимуса и тимоцитами коркового вещества. Это свидетельствует о том, что ГЛК начинают интенсивно забирать вышеназванные нейроамины от тимоцитов (Агафонкин С.

А., 2005).

Через 4 ч достигали максимума отрицательные корреляционные связи меж ду ГЛК субкапсулярной зоны тимуса и корковыми тимоцитами, что подтвер ждает их доноро-реципиентные отношения (Сарилова И.Л., 2009) Таким образом, иглоукалывание в акупунктурные точки GV 14 и LI 11 при водит как к изменениям содержания нейромедиаторов в структурах тимусной дольки крыс, так и к трансформациям корреляционных связей между биоамин содержащими структурами, т.е. к модифицированию клеточной регуляции на основе изменений синтеза и поглощения биоаминов.

Исследование селезенки крыс после 10-минутного иглоукалывания при одновременном воздействии на точки акупунктуры GV 14 и LI При люминесцентно-гистохимическом исследовании срезов селезнки крыс через 15 мин после ИУ вокруг лимфоидных узелков появлялся темный слабо люминесцирующий ободок, отделяющий его от красной пульпы (рис. 4, а). Зональность лимфоидного узелка несколько стиралась за счет выравнивания люминесценции фона во всех зонах. Однако в ГЛК реактивного центра содер жание гистамина возрастало в 3,08 раза, КА и серотонина – в 5,4 и 5,5 раза со ответственно (рис. 4, в). По сравнению с ГЛК других зон селезнки здесь опре делялась самая высокая концентрация биоаминов (табл. 3).

Содержание гистамина в ГЛК красной пульпы селезенки увеличилось в 2,1 раза, их число увеличилось в 1,2 раза. Уровень КА и серотонина изменялся незначительно. В адренергических нервных волокнах, проходящих по стенке a. centralis лимфоидного узелка, концентрация исследованных моноаминов уве личилась более чем в 6,5 раза и достигла своего максимума для всех сроков экс перимента. Это свидетельствует об активации периферического звена вегета тивной нервной системы - неотъемлемого компонента механизмов иглоукалы вания (Дуринян Р.А., 1981;

Peng G., 2008;

Kim S.K., Bae H., 2010). Визуально ад ренергические нервные волокна в срезах селезенки характеризовались расплыв чатостью.

Таблица Динамика интенсивности люминесценции (у.е.) гистамина в структурах селезенки крыс после одновременного 10-минутного иглоукалывания в точки аку пунктуры GV 14 и в LI Исследованные Интактные 15 мин по- 1 ч после 2 ч после 4 ч после структуры сле ИУ ИУ ИУ ИУ Фон красной пуль- О 26,39±1,23 23,37±1,02* 14,02±0,43* 7,75±0,54*# # # 10,2±0, пы К 24,38±1,15# 18,31±0,82# 12,02±0,56 10,75±0, ГЛК реактивного О 84,67±3,33*# 162,51±6,10*# 41,71±0,49*# 30,20±1,72# 27,3±1, центра ЛУ К 64,66±3,33# 67,54±5,10 38,73±0,49# 27,20±1,64# ГЛК периартери- О 37,95±1,24*# 48,05±2,24*# 40,21±0,94*# 33,10±1,62*# 25,3±2, альной зоны К 31,95±1,04# 30,05±1,24 25,20±0,98 25,12±1, ГЛК красной пуль- О 38,01±1,64*# 20,02±0,71# 23,10±1,21* 20,42±0,98* 18,25±0, пы К 18,02±0,96 20,03±0,91 18,1±1,22 18,42±0, ГЛК маргинальной О 36,30±1,90* 25,14±2,42 43,51±2,62*# # зоны К 20,69±1,28# 20,14±2,42 20,55±1, Примечание: ЛУ – лимфоидный узелок, О – опыт, К - контроль, * - статисти чески значимые различия от значений контрольной группы, # - статистически значимые различия от значений предыдущего срока Адренергическая иннервация обильна в красной пульпе селезенки, где выявлялись многочисленные ГЛК, тесно контактирующие с нервными термина лями. В селезенке контрольных крыс наблюдалась картина, подобная таковой при стрессе (Сысоева Л.А., 1997).

Через 1 ч в эритроцитах красной пульпы содержание гистамина посте пенно снижалось, но превышало первоначальные показатели более чем в 2 раза, содержание КА и серотонина – снижалось в 3,5 и 3,2 раза соответственно (рис.

5). Контуры адренергических нервных терминалей красной пульпы просматри вались не всегда четко и казались размытыми, около них было заметно оранже во-желтое свечение, вызванное выходом из нервных терминалей серотонина.

В контрольных срезах наблюдается возврат показателей всех биоаминов к норме в ГЛК красной пульпы, ГЛК периартериальной зоны и фоне красной пульпы.

Через 2 ч после ИУ число клеток в периферическом кольце из ГЛК мар гинальной зоны резко уменьшалось (рис. 4, б). Иногда в отдельных лимфоидных узелках определялись остатки маргинальных ГЛК, образованные скоплением или единично расположенными в этой зоне гранулами, с содержанием гистами на – 25,14±2,24 у.е. В этом случае мы разделяем точку зрения авторов, предпо лагающих, что часть гранул в клетках выбросили гистамин или прекратили его синтез (Лопунова Ж.К., 1986;

Гордон Д.С., 1991;

Jarvikallo A., 2003).

1 а б в г Рис. 4. Лимфоидный узелок селезенки крыс: а – через 15 мин после 10-минутного иглоукалы вания;

б – через 2 ч;

в – гранулярные люминесцирующие клетки в реактивном центре лимфо идного узелка через 1 ч;

г – через 2 ч после процедуры. Метод Фалька. Микроскоп ЛЮМАМ.

Ув.: а, б – 200;

в, г – 400. Обозначения: 1 – реактивный центр, 2 – центральная артериола В реактивном центре на этом сроке обнаруживалось небольшое число ГЛК до 3,5±0,28, со сниженным содержанием всех изучаемых нейроаминов (рис.

4, г). В адренергических нервных волокнах t. аdventitia центральной артериолы лимфоидного узелка уровень исследуемых моноаминов продолжал снижаться. В контрольных срезах картина селезнки не отличалась от таковой у интактных крыс.

а б Рис. 5. Динамика содержания катехоламинов в структурах селезенки крыс после иглоукалы вания (ИУ) в разные сроки. Примечание: * - статистически значимые различия от значений контрольной группы, # - статистически значимые различия от значений предыдущего срока Через 4 ч после ИУ снизилось содержание гистамина в лимфоцитах и ГЛК реактивного центра, ГЛК периартериальной зоны, эритроцитах красной пульпы. В реактивном центре на этом сроке число ГЛК достигало 5-7. Среди ГЛК реактивного центра появлялись крупные (25-26 мкм), яркие, угловато округлые клетки с компактно упакованными беловато-зелеными, желтоватыми гранулами с низким содержанием нейромедиаторов. По данным многих авторов эти клетки характеризуются как эндокринные (Гунин А.Г. с соавт., 2004;

Лю бовцева Л.А., 2009, Голубцова Н.Н., 2010). В маргинальной зоне восстановилась цепочка из ГЛК. Содержание гистамина в них выросло в 1,5 раза.

Содержание моноаминов с 2 ч до 4 ч после ИУ как в ГЛК около реактив ного центра, так и в ГЛК красной пульпы не претерпевало достоверных измене ний (рис. 5, б). Выявлена тенденция к снижению показателей люминесценции в адренергических нервных волокнах, в эритроцитах красной пульпы и лимфоци тах реактивного центра лимфоидного узелка селезенки. Установлено, что дина мика содержания моноаминов в центральной артериоле и периартериальной зо не идентична. Однако число выявляемых адренергических нервных волокон ос талось на уровне предыдущего срока. В красной пульпе они образуют люминес цирующую сеть. Содержание КА и серотонина в них, а также в ГЛК красной пульпы, расположенных, в основном, вокруг нервных волокон, снижалось, но не достигало значений у интактных животных. В контрольных срезах показатели гистамина остались на уровне предыдущего срока.

При анализе динамики серотонинового индекса выявлено, что структу ры селезенки интактной группы крыс имели значения серотонинового индекса от 1,28 до 1,55. Через 1 ч после ИУ серотониновый индекс ГЛК реактивного центра, фона красной пульпы имел тенденцию к увеличению, тогда как в цен тральной артериоле и лимфоцитах реактивного центра лимфоидного узелка на блюдалась противоположная тенденция (рис. 6). Через 2 ч во всех структурах селезенки наблюдалось снижение серотонинового индекса. Аналогичное сниже ние серотонинового индекса наблюдалось в период раннего контакта организма с антигеном и вызывало, по мнению Л.С. Елисеевой, перераспределение лимфо идных клеток, усиление первичного иммунного ответа, увеличение числа имму нокомпетентных клеток.

1, 1, 1, 1, 1,5 Центральная артерия 1, ГЛК реактивного центра 1, ГЛК красной пульпы 1, 1, 1, 1, интактная 15 мин 1 ч после 2 ч после 4 ч после группа после ИУ ИУ ИУ ИУ Рис. 6. Динамика серотонинового индекса в структурах различных зон селезенки после игло укалывания в различные сроки При окраске срезов селезнки гематоксилином-эозином через 15 мин после ИУ лимфоидные узелки имели разные размеры, отростчатую форму, раз меры лимфоидных узелков увеличиваются. Центры размножения были сдвину ты на периферию белой пульпы. Число митозов увеличилось в 1,4 раза (табл. 4).

В трабекулах увеличилась выявляемость сосудов за счт увеличенного кровена полнения. У контрольных крыс, получавших ИУ вне точек акупунктуры, в лим фоидном узелке увеличилось число клеток с картинами деструкции от единич ных клеток на отдельных препаратах до 3,5 %, соответственно, по сравнению с интактными животными. В красной пульпе появлялись расширенные венозные синусы.

Через 1 ч после ИУ в лимфоидных узелках зональность была менее вы ражена, имелась тенденция к увеличению числа макрофагов в 1,2 раза. Содер жание клеток с картинами митозов возросло в 1,5 раза, число эозинофилов уменьшилось в 1,6 раза. В красной пульпе определялось множество макрофа гов разнообразной формы. Увеличилось на 11% число оксифильных мегака риоцитов (МКЦ). У контрольных крыс картина осталась на прежнем уровне.

Таблица Цитологические показатели красной пульпы селезенки после иглоукалы вания (ИУ) на разных сроках эксперимента (M±m) Интактная 15 мин после ИУ 2 ч после ИУ 4 ч после ИУ группа Контроль Опыт Кон- Опыт Контроль Опыт троль 2,3±0,07 2,39±0,09 2,52±0,09* 2,52±0,07 3,14±0,08* 3,12±0,09# 7,00±0,15*# Мегака риоциты Плазмоци- 0,8±0,03 0,91±0,042 1,21±0,09*# 0,86±0,05 2,12±0,09*# 0,79±0,07 1,41±0,07*# ты 4,5±0,34 4,9±0,29 15,62±1,04*# 4,85±0,37 9,81±0,47*# 4,45±0,53 6,61±0,79*# Митозы Примечание: *- р0,05 достоверные показатели рассчитаны по сравнению с контрольными, # – р0,05 достоверные показатели рассчитаны по сравнению с предыдущим сроком Через 2 ч после ИУ размеры некоторых лимфоидных узелков достигли своего максимума. Они имели неправильную отростчатую форму, с проникаю щими в красную пульпу отростками. Венозные синусы красной пульпы были расширены. Непосредственно под капсулой селезенки располагались скопле ния мелких лимфоцитов, за которыми прослеживалась светлая полоса, т.е.

происходило оголение ретикулярной стромы красной пульпы. Число выявляе мых МКЦ увеличилось в 1,5 раза по сравнению с предыдущим сроком. Число митозов снизилось, но по-прежнему превышало таковое у интактных живот ных. У контрольных крыс также были выявлены расширенные венозные сину сы. Однако число МКЦ красной пульпы статистически достоверно не отлича лось от значений интактных животных.

Через 4 ч после ИУ некоторые лимфоидные узелки сливались между собой. В ряде лимфоидных узелков определялся выраженный реактивный центр и чткое деление на зоны, что может объясняться содержанием в них высоко дифференцированных Т- и В-лимфоцитов. В мантийной зоне лимфоидных узел ков увеличилось число плазматических клеток, что свидетельствует о бласт трансформации и включении в работу иммунной реакции немедленного типа. В красной пульпе число выявляемых МКЦ увеличилось более чем в 2,5 раза, число миелоцитов - уменьшилось. Число митозов снизилось в 1,4 раза по срав нению с предыдущим сроком, но не достигло первоначальных значений. Мор фологическая картина контрольных крыс не отличалась от наблюдаемой в нор ме.

При окраске по А. Унна в селезенке через 15 мин после ИУ у лимфоци тов периартериальной зоны лимфоидного узелка вокруг ядра выявлялся темно синий узкий ободок, у части лимфоцитов маргинальной зоны появлялась мета хромазия, что свидетельствует о бласттрансформации В-лимфоцитов (Лукашов Б.П., 1974). Для красной пульпы селезенки была характерна полиморфная окра ска. Здесь были расположены лимфоциты с более бледной и более яркой ци топлазмой, последние иногда образовывали скопления в виде «розеток».

Подобную картину наблюдали Н.Н. Табаева, Н.Е. Гималдинова (2008) при пересадке костного мозга. Вдоль трабекул располагались тяжи из лимфоци тов (рис. 7, а).

Через 1 ч после ИУ лимфоидные узелки обладали более светлой орто хромной окраской по внешнему контуру, граничащему с красной пульпой.

Лимфоциты красной пульпы были окрашены неравномерно, в ортохромный цвет. В белой и, особенно, в красной пульпе появлялись округлые, неокрашен ные жировые капли разного размера. Морфологическая картина контрольных крыс не отличалась от наблюдаемой в норме.

Через 2 ч лимфоидные узелки сливались между собой (рис. 7, б). В красной пульпе выявлялись 1-2 нечетко оформленные группы лимфоцитов, воз можно, по описанию это были колониеобразующие единицы (КОЕ). Число мак рофагов красной пульпы было в 1,6 раза больше, чем у контрольных крыс. В срезах контрольных животных отмечалось системное расширение венозных со судов красной пульпы.

а б Рис. 7. Изменения белой пульпы селезнки крыс под влиянием иглоукалывания: а – тяжи из лимфоцитов;

б – слияние лимфоидных узелков. Окраска по А. Унна. Микроскоп Альтами Био. Ув.: а - 600;

б - 200. Обозначения: 1 – реактивный центр;

2 – лимфоидный узелок;

3 - тя жи из лимфоцитов Через 4 ч после ИУ в красной пульпе около сосудов образовались груп пы из 2-3 плазмобластов. В красной пульпе число миелоцитов увеличилось в 1, раза по сравнению с интактными животными. Впервые в красной пульпе появи лись единичные лимфоциты с -метахромазией, что также указывает на бласт трансформацию лимфоцитов в плазмобласты.

При анализе корреляционных связей между биоаминсодержащими структурами селезнки крыс через 15 мин после ИУ нами зарегистрирована сильная положительная (r=0,93) корреляционная связь КА/КА между ГЛК реак тивного центра и адренергическими нервными волокнами a. centralis, что свиде тельствует о тандемном функционировании данных структур (Гущин Г.В., 1992). Корреляционная связь по моноаминам между ГЛК реактивного центра и ГЛК красной пульпы также стала положительной.

Через 1 ч после ИУ зарегистрировано максимальное число сильных по ложительных корреляционных связей гистамин/гистамин, в том числе между ГЛК реактивного центра и стенкой a. centralis (r=0,81). Через 2 ч регистрирова лось максимальное число сильных корреляционных связей по моноаминам. Че рез 4 ч после ИУ значения корреляционных связей гистамин/гистамин верну лись к исходным. Сохранялись высокие положительные коэффициенты корре ляции КА/КА и СТ/CТ в парах, образуемых ГЛК периартериальной зоны с ГЛК красной пульпы и ГЛК реактивного центра, что указывало на сходное функцио нирование этих клеток.

Таким образом, по результатам анализа данных, активными участниками раннего ответа на ИУ в акупунктурные точки GV 14 и LI 11 являются ГЛК реак тивного центра, ГЛК маргинальной зоны, а также адренергические нервные во локна a. centralis лимфоидного узелка крыс. Вследствие выявления бласттранс формирующихся лимфоцитов, увеличения числа макрофагов, митотически де лящихся клеток, можно сказать, что наблюдаемые под действием однократного ИУ изменения нейромедиаторов в продуцирующих и накапливающих структу рах селезенки регулируют дифференцировку и пролиферацию иммунокомпе тентных клеток, участвующих как в гуморальном, так и в Т-клеточном иммун ном ответе.

Корреляционные связи между биоаминсодержащими клетками тимуса и структурами селезенки крыс Наши исследования по изучению влияния ИУ на содержание биогенных аминов в люминесцирующих структурах тимуса и селезенки крыс показали, что ГЛК премедуллярной зоны тимуса, тимоциты коркового и мозгового вещества, реагируют быстрее и интенсивнее, чем ГЛК субкапсулярной зоны тимуса и ГЛК красной пульпы селезенки. Наиболее чувствительными цитоструктурами к ИУ в тимусе являются премедуллярные и субкапсулярные ГЛК и тучные клетки, а в селезнке - ГЛК реактивного центра селезенки и адренергические нервные во локна центральной артериолы.

У интактных животных по соотношению гистамин/гистамин нами были выявлены сильные положительные связи между ГЛК премедуллярной и ГЛК субкапсулярной зон дольки тимуса и стенкой a. centralis селезенки, ГЛК субкап сулярной зоны дольки тимуса и ГЛК красной пульпы селезенки (рис. 8). Оче видно, они взаимосвязаны и их фазы секреции и поглощения сходны.

По соотношению КА/КА сильная положительная корреляционная связь вы явлена между ГЛК субкапсулярной зоны дольки тимуса и адренергическими нервными волокнами a. centralis лимфоидного узелка селезенки. Вполне воз можно, что этот факт говорит о том, что субкапсулярные клетки тимуса адрено зависимы (Любовцева Л.А., 1993). В остальных исследованных парах нами были зарегистрированы связи умеренные и слабые.

Через 15 мин ИУ привело к разрыву связи между ГЛК субкапсулярной зо ны дольки тимуса и адренергическими нервными волокнами a. centralis лимфо идного узелка селезенки по соотношению всех исследованных нейромедиато ров.

Корреляционные взаимоотношения по содержанию нейромедиаторов между биоаминсодержащими структурами тимуса и селезнки после иглоукалывания в иммунорегуляторные точки Интактные 2 часа 4 часа Гистамин/гистамин Катехоламины/катехоламины Рис. 8. Корреляционные связи по содержанию гистамина и катехоламинов между биоаминсо держащими структурами тимусной дольки и селезенки крыс после иглоукалывания в точки LI 11 и GV 14. Обозначения: ГЛК – гранулярные люминесцирующие клетки, ПМ - премедул лярная зона тимуса, СК – субкапсулярная зона тимуса, РЦ – реактивный центр, ЦА – цен тральная артериола, КП – красная пульпа;

сплошная линия – умеренная корреляционная связь (r=0,3-0,69), двойная – сильная корреляционная связь (r=0,7-0,99);

красный цвет указывает на положительный характер связи, синий - на отрицательный По соотношению КА/КА и СТ/СТ между ГЛК премедуллярной зоны дольки тимуса и адренергическими нервными волокнами a. centralis лимфоидного узел ка селезенки корреляционная связь изменила знак и стала сильной отрицатель ной. Поскольку серотониновый индекс изменился мало, и функционально про цессы, зависящие от исследованных нейроаминов, не изменились, можно пред положить, что данный процесс идет без участия нервной системы (Гималдинова Н.Е., 2007).

Через 1 ч после ИУ по соотношению гистамин/гистамин ослабла взаимо связь между ГЛК субкапсулярной зоны тимуса и ГЛК около реактивного центра селезенки.

По соотношению КА/КА и СТ/СТ появилась сильная положительная корре ляционная взаимосвязь между ГЛК премедуллярной зоны тимуса и ГЛК около реактивного центра селезенки. Следовательно, они начали функционировать в тандеме. ИУ на этом сроке усилило эту связь, тем самым способствуя опреде ленным клеточным формам функционировать в одинаковом режиме синтеза биогенных аминов, так как содержание этих веществ в названных структурах увеличилось. По результатам реакции А. Унна, в селезнке произошло усиление бласттрансформации, из чего можно заключить, что вырабатываемые нейроме диаторы влияют на образование В-лимфоцитов. В это же время нами зарегист рировано увеличение числа CD4+ и CD8+ лимфоцитов в реактивном центре лим фоидного узелка селезнки.

Через 2 ч после ИУ был зарегистрирован максимум положительных силь ных корреляционных связей гистамин/гистамин, в том числе связь между пре медуллярными ГЛК тимуса и ГЛК красной пульпы селезенки (r=0,96). Этот факт можно объяснить тем, что ГЛК красной пульпы селезенки после ИУ начинают взаимодействовать непосредственно с аминопродуцентами центрального органа иммунной системы – тимуса. По данным Кротковой О.С. (2010) на этом сроке после иглоукалывания в красной пульпе происходит размножение лимфобластов и дальнейшая их дифференцировка.

По соотношению КА и СТ обращает на себя внимание появление положи тельной связи ГЛК субкапсулярной зоны дольки тимуса и адренергическими нервными волокнами a. centralis селезнки, а также между премедуллярными ГЛК дольки тимуса и ГЛК красной пульпы селезенки, которые ни на одном сро ке не дали взаимосвязи и, следовательно, функционировали вразнобой или на ходились на разных этапах секреторного цикла. Поскольку часть ГЛК красной пульпы относится к системе макрофагов (Табаева Н.Н., 2007), можно предполо жить, что они получают информацию через нейромедиаторы от ГЛК дольки ти муса дистантно.

Через 4 ч после ИУ значения исследованных взаимосвязей гиста мин/гистамин приблизились к первоначальным показателям. По взаимодейст вию КА/КА и СТ/СТ зарегистрировано максимум сильных положительных свя зей между структурами тимуса и селезнки.

Таким образом, ИУ оказывает комбинированное влияние на процессы син теза и инактивации биоаминов в структурах тимуса и селезнки, затрагивая не только гуморальный, но и клеточный иммунитет, стимулируя взаимодействие аминосодержащих структур исследованных нами органов иммуногенеза.

Исследование нейромедиаторов кожи крыс в области точек акупунктуры при воздействии иглоукалыванием При анализе динамики содержания гистамина, КА и СТ в дистальной точ ке акупунктуры LI 11 было выявлено, что после 2-мин ИУ наибольшее повы шение содержания нейромедиаторов происходило через 15 мин: гистамина - в сосочковом и сетчатом слоях дермы и в жировых клетках гиподермы (табл. 5), а КА и СТ – в эпителии, в интерстициальных ТК и в адренергических нервных во локнах. В субэпителиальных ТК, в ТК около волосяных фолликулов и сальных желз ИУ не вызывало достоверных изменений содержания нейромедиаторов, что возможно, связано с меньшей зрелостью в них гепарина. В интерстициаль ных ТК содержание гистамина достоверно уменьшилось.

После ИУ с 10-мин экспозицией в точке LI 11 через 15 мин содержание гистамина увеличилось по сравнению с первоначальным в 4–5 раз во всех ис следуемых структурах, кроме гиподермы, где его содержание возросло в 2 раза;

содержание КА и СТ увеличилось в эпителии и в адренергических нервных во локнах дермы. Наиболее высокого содержания гистамин достиг в эластических волокнах сетчатого слоя дермы, которые являются адсорбентами нейроаминов (Жирнова Н.С., 2007) и в фибробластах сосочкового слоя дермы.

Таблица Динамика люминесценции гистамина (у.е.) в структурах кожи крыс в области точек акупунктуры при 2-минутном иглоукалывании (М±m) Вне LI 11 В ТА LI 11 Вне GV 14 В ТА GV Интактные 10,11±0,92 12,71±0,46* 10,89±1,18 14,45±1,14* Через 15 мин после 33,11±1,34 36,31±1,93# 23,55±0,77# # 26,00±2, Эпителий ИУ Через 1 ч после ИУ 28,23±1,74 29,03±1,57# 20,75±1,41# 53,11±2,57*# Интактные 7,66±0,64 7,88±0,39 10,11±0,61 10,51±0, Фибробла- Через 15мин после # # # # 21,66±1,01 24,04±0,95 15,31±1,48 15,22±1,07* сты сосоч- ИУ кового слоя Через 1 ч после ИУ 11,44±0,78# 12,01±0,62# # 13,31±1,31 49,11±1,90* Интактные 7,88±0,88 8,01±0,72 9,01±0,55 9,00±0, Через 15мин после # # # 10,88±0, 16,1±1,08 29,00±1,82 10,44±0, Гиподерма ИУ Через 1 ч после ИУ 12,55±1,23# 28,00±2,15 17,88±1,82 27,05±1,23*# Интактные 14,33±0,98 17,12±0,85* 18,76±1,55 19,89±1, Интерсти Через 15 мин после # # # циальные 23,44±0, 18,33±1,91 14,03±0,32* 21,03±0, ИУ ТК Через 1 ч после ИУ не опр. 12,11±0,89 не опр. 20,05±1, Примечание: * - статистически достоверные показатели по сравнению с контролем вне ТА, # - статистически достоверные показатели по сравнению с предыдущим сроком Через 1 ч после процедуры снизилось содержание гистамина в фибробластах сосочкового слоя дермы, тем не менее, эти показатели остались повышенными по сравнению с первоначальными. Содержание моноаминов снизилось в эпителии и в адренергических нервных волокнах, а в гиподерме – увеличилось на 48% (рис. 9, а).

Через 4 ч показатели люминесценции биоаминов вернулись к исходным как при 2-мин, так и при 10-мин экспозиции. На этом сроке происходило макси мальное повышение функциональной активности интерстициальных ТК.

В контрольной зоне (рядом с точкой LI 11) изменения содержания ней ромедиаторов были на ранних сроках менее выражены, по сравнению с иглоука лыванием в точку. Уже через 1 ч после ИУ показатели люминесценции возвра тились к исходным. В дерме и гиподерме увеличение времени экспозиции иглы до 10 мин не привело к повышению содержанию моноаминов, как и в точке.

В дорзальной точке акупунктуры GV 14 через 15 мин после 2-мин экс позиции иглы содержание нейромедиаторов в исследованных структурах воз росло в меньшей степени, чем в дистальной точке (рис. 9, б).

Через 1 ч после ИУ, в отличие от точки LI 11, продолжалось повышение содержания нейромедиаторов в эпителии, затем через 2 ч интенсивность люми несценции моноаминов снизилась в эпителии и в адренергических нервных во локнах, а в сосочковом слое дермы – показатели приблизились к первоначаль ным. Через 4 ч показатели люминесценции вернулись к исходным в остальных структурах. ТК в дерме и на границе сетчатого слоя и гиподермы не выявлялись.

а б Рис. 9. Динамика люминесценции катехоламинов при 2-минутном иглоукалывании в различ ных структурах кожи крыс в области точек акупунктуры: а - LI 11;

б - GV 14. Примечание: * статистически достоверные показатели по сравнению с контролем вне ТА Вне точки GV 14 через 15 мин после ИУ с 2-мин экспозицией содержание катехоламинов и серотонина возросло в эпителии, фибробластах сосочкового слоя дермы и гиподерме в меньшей степени, чем в точках акупунктуры.

После 10-мин экспозиции игл через 15 мин в дорзальной точке GV 14 на блюдался более значительный рост содержания гистамина в эпителии, в фиб робластах сосочкового и эластических волокнах сетчатого слоя дермы, в интер стициальных ТК, а моноаминов – в адренергических нервных волокнах по срав нению с 2-мин экспозицией (рис. 10, б).

а б Рис. 10. Динамика люминесценции катехоламинов при 10-минутном иглоукалывании в раз личных структурах кожи крыс в области точек акупунктуры: а - LI 11;

б - GV 14. Примеча ние: * - статистически достоверные показатели по сравнению с контролем вне ТА В отличие от дистальной точки через 1 ч после ИУ продолжилось увели чение содержания гистамина в исследуемых структурах кожи более чем в 2 раза.

Содержание моноаминов через 1 ч после снятия иглы в исследованных структу рах снизилось, как и в дистальной точке акупунктуры.

Через 2 ч показатели содержания гистамина снизились в эпителии, фиб робластах сосочкового слоя и эластических волокнах сетчатого слоя в 1,5 раза, а в гиподерме – в 2 раза. Содержание КА снизилось в эластических волокнах сет чатого слоя дермы, КА и СТ – в гиподерме и интерстициальных ТК.

Через 4 ч после ИУ с разной экспозицией показатели гистамина достигли первоначальных значений лишь в сосочковом слое дермы.

В контрольных срезах через 15 мин после процедуры содержание нейро медиаторов повысилось в меньшей степени, чем в точке: гистамина – в эпите лии, фибробластах и эластических волокнах дермы, моноаминов – в эпителии, в адренергических нервных волокнах и ТК.

Таким образом, полученные данные указывают на то, что реакция в точках акупунктуры на воздействие иглы сильнее, чем в контрольных зонах. Увеличе ние времени экспозиции иглы приводит к увеличению содержания гистамина во всех структурах кожи в проекции обеих исследуемых точек акупунктуры, что можно охарактеризовать как начальный момент акупунктурной реакции. В дис тальной точке LI 11 после удаления иглы мы наблюдаем постепенное снижение интенсивности люминесценции гистамина в тканях, а в дорзальной точке GV интенсивность люминесценции продолжает нарастать, причем это явление тем выраженнее, чем меньше экспозиция иглы.

Влияние лазеропунктуры на нейромедиаторные структуры кожи крыс в области точек акупунктуры При изучении влияния лазеропунктуры в точки LI 11 и GV 14 на динами ку содержания нейромедиаторов, было установлено, что в обеих исследованных точках наибольшее повышение содержания гистамина наблюдалось через мин в эпителии;

КА и СТ – в эпителии и субэпителиальных ТК. В отличие от ИУ, при лазеропунктуре уже через 2 ч наблюдалась тотальная дегрануляция тучных клеток. Ранее было установлено, что лазер воздействует на структуру воды и биологические жидкие среды, а количество поглощенной энергии (доза) зависит от наличия и числа фотоакцепторов (Инюшин В.М., 2007;

Двалишвили М. Ю., 2006). Возможно, тучные клетки и являются основными поглощающими структурами (Игнатьева Е. И., 2007;

Krishnaswamy G. et al., 2001;

Noli C., 2001).

Увеличение времени процедуры, так же как и при ИУ, вызывало большее повышение содержания нейромедиаторов в исследованных структурах. Наибо лее реагирующей точкой являлась точка GV 14. Снижение содержания нейроме диаторов в структурах кожи крыс после их повышения при лазеропунктуре про исходило быстрее, чем после ИУ. При окраске препаратов методом А. Унна мы наблюдали усиление сульфатации гепарина при лазеропунктуре, что совпадает с данными других исследователей (Бадин А.М., 2003). С нашей точки зрения сульфатированный гепарин инактивирует излишки образовавшихся биогенных аминов и вызывает дегрануляцию тучных клеток, но при этом гранулы уже не содержат свободных биогенных аминов. Кроме того, лазеропунктура вызывает изменения нейромедиаторов в поверхностных слоях кожи, в отличие от игло укалывания. Преимущественное влияние лазеропунктуры на верхние слои кожи обусловливает применение лазеропунктуры в начальных стадиях функциональ ного состояния ТА – точки-суперпроводника, а иглоукалывания – в более позд них стадиях формирования электроаномальных точек (Никифоров В.Н., 1976, Любовцев В.Б., 2004). При воздействии акупунктуры наиболее реагирующими структурами являются эпителий, адренергические нервные волокна и ТК. В дор зальной ТА GV 14 при ИУ выявлена значительно большая реакция адренергиче ских нервных волокон.

Серотониновый индекс в структурах кожи исследуемых точек после иг лоукалывания снизился во всех структурах, особенно в эпителии и гиподерме, после лазеропунктуры – в эпителии, но остался выше 1, что говорит о превали ровании супрессивных свойств структур.

Анализируя функциональное состояние тучных клеток, определяемых ме тодом А. Унна в различных слоях кожи интактных крыс, было выявлено, что число тучных клеток в обеих изучаемых точках наибольшее в гиподерме (рис.

11). После иглоукалывания с 10-мин экспозицией иглы через 1 ч в точке LI 11 их число преобладало в сетчатом слое и таковым оставалось до 2 ч эксперимента. В точке GV 14 через 1 ч число выявляемых тучных клеток преобладало в сосочко вом слое, через 2 ч после снятия иглы численное соотношение этих клеток вер нулось к первоначальным результатам, а к 4 ч вновь их численное соотношение становилось таким же, как и на 1-часовом сроке. Таким образом, число тучных клеток в точке GV 14 после иглоукалывания изменялось синусоидально, а в точ ке LI 11 в этих же условиях происходили линейные изменения. Это подтвержда ет характеристику популяции ТК как быстрореагирующей субстанции (Быков В.Л., 1999). В обеих исследованных точках через 4 ч после ИУ распределение ТК оставалась иным, по сравнению с интактными животными (рис. 11).

Точка акупунктуры LI 11 Точка акупунктуры GV 4ч 4ч 2ч 2ч 1ч 1ч инт инт 0% 20% 40% 60% 80% 100% 0% 20% 40% 60% 80% 100% под эпителием сетчатый слой гиподерма под эпителием сетчатый слой гиподерма а б Рис. 11. Общее число тучных клеток в разных слоях кожи в области точек акупунктуры LI (а) и GV 14 (б) у интактных крыс (инт) и через 1, 2, 4 ч после иглоукалывания. Примечание:

по оси абсцисс – процентное содержание клеток, по оси ординат – время после процедуры Функциональное состояние ТК различалось в зависимости от слоя кожи и локализации точки. У интактных животных преобладали ТК в фазе выделения секрета в обеих точках. После ИУ это соотношение сохранилось, но доля других видов ТК на разных сроках изменилась по-разному (рис. 12).

Точка акупунктуры LI 11 Точка акупунктуры GV 100 % % 1ч 2ч 4ч 1ч 2ч 4ч 1ч 2ч 4ч 1ч 2ч 4ч 1ч 2ч 4ч 1ч 2ч 4ч под сетчатый гиподерма под эпителием сетчатый гиподерма эпителием слой а б Рис. 12. Процентное содержание тучных клеток в разных слоях кожи крыс в области точек акупунктуры LI 11 (а) и GV 14 (б) через 1, 2 и 4 ч после иглоукалывания. Примечание: первый столбик - цельные (в фазе накопления), второй столбик – частично дегранулированные (в фазе выведения секрета), третий столбик – распавшиеся (завершившие секреторный цикл) тучные клетки.

Таким образом, эксперименты показали, что введение иглы изменяет нейромедиаторный статус структур кожи в области точек акупунктуры, вызывая дегрануляцию тучных клеток и, возможно, их созревание. Выделенные гранулы несут вместе с собой разные концентрации биогенных аминов и гепарина, кото рые влияют на механизм иммунных реакций, а также по-разному воздействуют на нервные окончания, модулируя таким образом процессы восприятия окру жающей среды (Быков В.Л., 1999;

Вогралик В.Г., 2005). Нашими исследования ми показано, что время воздействия, место воздействия – все это влияет на со стояние тучных клеток и интенсивность реакции нейромедиаторов.

Корреляционные связи между содержанием нейромедиаторов в тучных клетках кожи и гранулярных люминесцирующих клетках тимуса при ИУ В наших экспериментах ИУ больше оказывало воздействие на точку LI 11, в связи с этим для проведения корреляционного анализа нами были использованы числовые данные этой точки. По взаимодействию всех исследованных нейроа минов у интактных животных нами выявлены сильные положительные связи между субэпителиальными ТК кожи и ГЛК премедуллярной зоны дольки тиму са, а также между интерстициальными ТК и ГЛК около реактивного центра лимфоидного узелка селезенки (рис. 13). По соотношению КА/КА и CТ/CТ сильная положительная корреляционная связь между ТК сосочкового и сетчатых слов дермы и адренергическими волокнами a. centralis лимфоидного узелка указывает на сходную динамику моноаминов в этих структурах.

Через 15 мин после снятия иглы по взаимодействию гистамин/гистамин ус тановилась сильная корреляционная связь между интерстициальными ТК и пре медуллярными ГЛК дольки тимуса, также между ТК кожи и всеми исследован ными структурами селезнки. В контроле данный вид связи также усилился, но в меньшей степени. По соотношению КА/КА и CТ/CТ, установились сильные корреляционные связи между ТК обоих слов дермы и адренергическими нерв ными волокнами a. centralis лимфоидного узелка.

Через 1 ч после ИУ по соотношению гистамин/гистамин появилась сильная корреляционная связь между ТК сетчатого слоя дермы и ГЛК субкапсулярной зоны дольки тимуса. На этом сроке в субкапсулярной зоне тимуса достоверно увеличилось число CD4+ и CD8+ лимфоцитов (Иванова О.В., 2010). Между ТК кожи и всеми структурами селезнки установились сильные корреляционные связи. В контроле преобладали умеренные корреляционные связи.

По соотношению КА/КА и СТ/СТ корреляционная связь между ТК сосоч кового и сетчатого слов дермы и ГЛК около реактивного центра лимфоидного узелка селезенки изменила знак с «+» на «–» и стала сильной отрицательной.

Возможно, что ГЛК лимфоидного узелка и ТК кожи функционируют в противо фазах, то есть повышение концентрации моноаминов в ГЛК сопровождается снижением концентрации моноаминов в ТК дермы. В это же время усилились связи между субэпителиальными ТК и ГЛК красной пульпы селезенки. Следова тельно, ТК и макрофаги начали функционировать в тандеме. Корреляционная связь между интерстициальными ТК и адренергическими нервными волокнами центральной артерии лимфоидного узелка достигла максимальных значений.

Через 2 ч после ИУ по соотношению всех исследованных нейромедиаторов установились сильные положительные связи между всеми исследованными био аминсодержащими клетками кожи и тимуса. Корреляционная связь между ТК сетчатого слоя дермы и ГЛК премедуллярной зоны дольки тимуса достигла мак симальных значений. По соотношению гистамин/гистамин усилилась связь ме жду ТК сетчатого слоя дермы и ГЛК красной пульпы селезенки. По соотноше нию моноаминов обращает на себя внимание исчезновение сильной корреляци онной связи между субэпителиальными ТК и ГЛК около реактивного центра лимфоидного узелка селезенки.

Через 4 ч после ИУ по соотношению гистамин/гистамин значения исследо ванных взаимосвязей приблизились к первоначальным показателям, по соотно шению КА/КА и по соотношению СТ/СТ на этом же сроке, значения корреляци онных связей, в основном, снизились.

ИУ вне точки акупунктуры привело к кратковременному усилению связи между ТК сетчатого слоя дермы и ГЛК премедуллярной зоны дольки тимуса че рез 15 мин, а через 1 ч показатели корреляции возвратились к исходным показа телям.

Таким образом, анализ корреляционных связей между основными нейроме диаторсодержащими структурами кожи в области точек акупунктуры и дольки тимуса показал, что ИУ усиливает корреляционные связи между интерстициаль ными ТК и премедуллярными ГЛК дольки тимуса уже через 15 мин после про цедуры по всем исследованным нейромедиаторам. Максимальное взаимодейст вие между исследованными клетками выявлено через 1 ч после ИУ. Существен но то, что ИУ способствует образованию связи между субкапсулярными ГЛК дольки тимуса и ТК дермы. Следовательно, в норме регуляция осуществляется через премедуллярные ГЛК дольки тимуса, а после ИУ к регуляции подключа ются субкапсулярные ГЛК.

Корреляционные взаимоотношения по содержанию гистамина между биоаминсодержащими структурами кожи, тимуса и селезнки после иглоукалывания в иммунорегуляторные точки Интактные 1 час 4 часа Рис. 13. Корреляционные взаимоотношения по содержанию гистамина между биоаминсодер жащими структурами кожи в проекции точки акупунктуры LI 11 и тимусной дольки и селе зенки после иглоукалывания в точки LI 11 и GV 14. Обозначения: как на рис. Закономерности нейромедиаторного состава кожи человека в проекции точек акупунктуры Нами выявлено, что в коже человека, также как и в коже некоторых жи вотных, основными биоаминсодержащими структурами являются ГЛК и тучные клетки. Выявлено, что существуют отличия в распределении нейромедиаторов в области разных точек акупунктуры лица. Так, в эпидермисе, сосочковом слое дермы и в интерстициальных ТК наибольшее содержание гистамина выявлено в точке ТЕ 17, а в ГЛК – в ТА GB 2. Наибольшее содержание КА и СТ в эпителии выявлено в точке GB 2, в адренергических нервных волокнах – в области ТА ТЕ 17, в ГЛК – точки SI 19. Из этого следует, что активная часть точек расположена на разном расстоянии от поверхности кожи, что объясняет в некоторой степени глубину укола, указанную в руководствах по иглоукалыванию (Табеева Д.М., 2001;

Самосюк И.З. с соавт., 2005). Доказано, что в ТА содержание нейромедиа торов в названных структурах достоверно выше, чем вне точек. Выявлены и от личия между ТА лица, тела и конечностей. Наибольшее число тучных клеток определялось в коже в проекции лицевых ТА, которые здесь расположены в ос новном под эпителием и около волосяных фолликулов.

Для проверки природы всех выявленных ГЛК нами была изучена экс прессия нейронспецифической энолазы и синаптофизина в коже человека в области ТА. Были выявлены иммуннопозитивные клетки к вышеуказанным маркрам в базальном и шиповатом слоях эпидермиса, около волосяных фолли кулов и в концевых секреторных отделах потовых желз. В цитоплазме некото рых кератиноцитов базального и шиповатого слоев эпидермиса определялись характерные гранулы темно-коричневого цвета, расположенные вокруг ядра (рис. 14, а). Экспрессия исследованных маркеров проявляется не на всех участ ках эпидермиса одинаково. Число NSE- и синаптофизинположительных керати ноцитов составляло от 3 до 30 клеток в группе. Наибольшее число NSE- и си наптофизинпозитивных клеток выявлялось в ТА CV 6. Эти клетки около воло сяных фолликулов характеризовались крупными (до 35 мкм) размерами, имели полигональную неправильную или вытянутую форму и красновато-коричневые глыбовидные разнородные гранулы в цитоплазме. NSE-позитивные клетки мес тами контактировали с нервными волокнами, окружающими волосяную сумку.

Встречались единичные волосяные фолликулы, около которых иммунопозитив ные клетки образовывали непрерывный слой, лежащий снаружи от соедини тельнотканной сумки (рис. 14, б). Секреторные клетки концевых отделов пото вых желез кожи экспрессировали NSE и синаптофизин в разной степени. В об ласти ТА лица и конечностей иммунопозитивные клетки встречались редко и показывали невысокий уровень NSE (табл. 6). Наибольшее их число определя лось в потовых железах кожи (рис. 14, в, г).

а б в г Рис. 14. Экспрессия NSE в коже человека: а - кератиноцитами базального эпидермиса;

б - в области волосяного фолликула кожи в проекции ТА ТЕ 17;

в -, г - концевые секреторные от делы потовых желез в области ТА LI 11. Реакция с нейронспецифической энолазой. Микро скоп Альтами-Био. Ув.: а, в, г - 400;

б - 200. Обозначения: 1 - базальные эпидермоциты;

2 – иммунопозитивные клетки В потовых железах кожи человека в проекции точки СV 6, можно выде лить 2 группы NSE- и синаптофизинпозитивных клеток. Одни содержали следы исследуемого фермента, что проявлялось светло-коричневым мелкодисперсным окрашиванием цитоплазмы, а в других – цитоплазма окрашивалась в темно коричневый цвет (рис. 14, в, г). В наших исследованиях соотношение темноок рашенных клеток к светлоокрашенным составляет 10:1. Иммунопозитивные клетки местами определялись между миоэпителиальными клетками. Наши дан ные отчасти совпадают с данными Zancanaro С. et al. (2003), которыми было вы явлено, что антитела к NSE метили лишь нервные стволики в перигландулярных соприкасающихся тканях и нервных терминалях вокруг трубочек потовых же лез. Часть NSE- и синаптофизинпозитивных клеток совпадают по локализации с ГЛК кожи.

По данным настоящего исследования, экспрессия NSE и синаптофизина в эпидермисе и концевых секреторных отделах потовых желез коррелирует между собой. Расширение зоны положительной экспрессии в базальных кератиноцитах сопровождается увеличением числа выпавших гранул NSE и синаптофизина в области петель потовых желез. Этот факт может свидетельствовать о зонально сти распределения клеток диффузной эндокринной системы кожи в области ТА.

Таблица Число NSE- и синаптофизинпозитивных клеток кожи человека в проекции точек акупунктуры в области секреторных отделов потовых желез (Мm) CV 6 LI 11 GV 14 SI 19 TЕ 17 PC В ТА NSE 16,01,0* 7,00,9 5,00,35 21,01,9 4,00, 15,01,1* Вне ТА 12,00,8 6,50,9 12,00,9 5,60,45 20,01,7 4,20, В ТА Sinapto- 15,01,1 5,00,4* 0,50,08 0,20,1 0,50, 11,01,3* Вне ТА phisin 13,00,9 3,70,2 9,10,3 0,450,09 0,30,1 0,50, Примечание: * - статистически достоверные показатели При анализе экспрессии иммунокомпетентных клеток кожи человека в области акупунктурных точек CD4+ клетки (Т-хелперы), в основном, локализо вались в сосочковом слое дермы. Наибольшее число Т-хелперов в сосочковом слое кожи выявлено в проекции дорзальной ТА GV 14: до 27,2±1,1. Около саль ных желез выявлено наибольшее число CD4+ клеток в проекции точки акупунк туры SI 19 - 19,8±1,3;

в контрольной зоне их число ниже - 12,0±1,2 (p0,05). Зна чительное число CD4+ клеток локализовано около волосяных фолликулов и в периваскулярной зоне кожи в проекции всех исследованных точек. В эпителии, около концевых отделов потовых желез встречались единичные CD4+ клетки. В этих случаях достоверных различий в численности этих клеток в коже в проек ции точек акупунктуры и контрольной зоне не наблюдалось.

Как показали наши исследования, CD 68+ клетки (макрофаги) в коже че ловека встречались очень редко. Они, в основном, локализовались в области сальной железы. Это крупные клетки округлой формой, размером 15-20 мкм, с бобовидным ядром. Достоверных различий в численности этих клеток в кон трольной зоне и в проекции ТА, а также между корпоральными ТА и точками лица не наблюдалось. Этот факт говорит о том, что данные клетки не являются специфичными для точек акупунктуры.

Анализ популяции PCNA-позитивных клеток (в стадии пролиферации) в коже человека установил, что чаще всего они локализовались в сосочковом слое дермы, около сальных и потовых желз. Выявлены значимые различия в численном соотношении PSNA-позитивных клеток в проекциях точек акупунк туры SI 19 и TE 17: Подобная картина наблюдалась и в контрольной зоне.



Pages:   || 2 |
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.