авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Исследование клеточных и плазменных факторов крови методом биоимпедансной спектроскопии

На правах рукописи

МАЛАХОВ МАКСИМ ВИКТОРОВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНЫХ И ПЛАЗМЕННЫХ

ФАКТОРОВ КРОВИ МЕТОДОМ БИОИМПЕДАНСНОЙ

СПЕКТРОСКОПИИ

03.03.01 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

ЯРОСЛАВЛЬ - 2011

Работа выполнена на кафедре физического воспитания

ФГБОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д.Ушинского»

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Андрей Александрович Мельников

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Марина Зотовна Федорова доктор биологических наук, профессор Игорь Юрьевич Смирнов

Ведущая организация ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится 27 октября в 15 час. 30 мин. на заседании совета Д 212.307.02 по защите докторских и кандидатских диссертаций при ФГБОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского» по адресу: 150000.

Ярославль, Которосльная наб., д. 46-в, ауд. 203.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ярославского государственного педагогического университета им. К.Д. Ушинского (150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, д. 108).

Автореферат разослан « » сентября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент И.А. Осетров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Кровь выполняет ряд жизненно важных функций, в том числе транспорт газов, питательных веществ, продуктов метаболизма (Б. Фолков, Э. Нил, 1976). Изменение гематологических и биохимических показателей может свидетельствовать о нарушении транспортной функции крови, а также быть признаком ряда патологических процессов (Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун, 2006), поэтому разработка оценки методов показателей крови является актуальной задачей как в биологии, так и в практической медицине.

Метод биоимпедансной спектроскопии позволяет проводить анализ водных секторов (K.R. Segal et al., 1991), а также оценивать состав тела (S.

Salinari, 2003.). Биоимпедансная спектроскопия (БИС) применяется в практической медицине (J.D. Sluyter et al., 2010;

R.L. Chiolro et al., 1992;

A.N. Roos et al., 1993). Следует отметить, что БИС используется как для изучения свойств целого организма (A. De Lorenzo et al, 1997), так и для исследования тканей (A.H. Kyle et al., 1999) и клеточных суспензий (K.

Asami et al., 1980).

Предприняты попытки использовать метод БИС и для исследования крови. В литературе имеются работы, посвящённые изучению электрических свойств крови (T.X. Zhao, 1996;

T. Chelidze, 2002) и суспензий эритроцитов (J.Z. Bao et al., 1994). Анализировалось влияние гематокрита (T.X. Zhao, 1993;

K. Cha et al., 1994;

L.I. Kalakutskiy et al., 2009) и скорости оседания эритроцитов (T.X. Zhao et al., 1993) на параметры БИС, изучалась динамика показателей биоимпедансной спектроскопии в процессе хранения крови (M. Sezdi et al., 2005;

Y. Hayashi et al., 2008;

T.X. Zhao, A. Shanwell, 1994). Однако нет работ, посвященных комплексному исследованию клеточных и плазменных факторов крови методом биоимпедансной спектроскопии.

Цель работы – провести комплексное исследование клеточных и плазменных факторов методом биоимпедансной спектроскопии.

Задачи исследования:

1. Оценить возможность применения биоимпедансной спектроскопии для изучения гематологических показателей, а также воспроизводимость метода БИС цельной крови.

2. Выявить связи параметров БИС цельной крови с её гематологическими и биохимическими показателями. Установить показатели крови, оказывающие наиболее сильное влияние на параметры БИС.

3. Изучить динамику показателей биоимпедансной спектроскопии цельной крови в начальный период её оседания и возможность БИС для определения скорости оседания эритроцитов.

4. Исследовать влияние возрастных изменений красных клеток крови на их электрические свойства.

5. Оценить влияние осмолярности суспендирующего раствора, а также белково-липидных комплексов, адсорбированных на мембранах обработанных и необработанных трипсином красных клеток крови на параметры БИС эритроцитарных суспензий.

6. Оценить возможность метода биоимпедансной спектроскопии для количественной оценки изменений, происходящих в цельной крови в процессе её хранения.

Научная новизна Впервые проведено комплексное исследование клеточных и плазменных факторов крови методом биоимпедансной спектроскопии.

Предложена и апробирована методика биоимпедансной спектроскопии для изучения суспензий эритроцитов и цельной крови. Впервые выполнена оценка воспроизводимости метода биоимпедансной спектроскопии крови, выявлены диапазоны параметров БИС, соответствующие нормальным значениям крови. Установлено, что метод биоимпедансной спектроскопии позволяет, не оказывая воздействий на эритроциты, с высокой точностью оценить гематокрит цельной крови.

Впервые изучены изменения параметров БИС в начальный период оседания крови. Выявлено, что динамика электрических свойств крови, помещённой в неподвижную измерительную камеру, в течение первых минут обусловлена процессами взаимодействия эритроцитов и их оседанием. Установлено, что с помощью метода биоимпедансной спектроскопии можно быстро определить СОЭ.

В работе впервые показано, что метод биоимпедансной спектроскопии является чувствительным к изменениям, происходящим в эритроцитах в процессе их старения. Впервые изучено влияние осмолярности суспендирующих растворов на параметры БИС концентрированных суспензий красных клеток крови. Установлено, что вариации параметров БИС в суспензиях с разной осмолярностью были обусловлены изменениями эритроцитов, вызванными осмотическими эффектами, а также неодинаковой электропроводностью суспендирующих растворов.

В работе впервые выявлено, что уменьшение количества абсорбированных на мембранах красных клеток крови протеинов под влиянием «отмывки» красных клеток крови или обработки трипсином отмытых эритроцитов с последующим их ресуспендированием в растворе белка приводит к уменьшению электрической ёмкости.

Получены новые факты о динамике электрических свойств крови в процессе её хранения. Показано, что метод БИС позволяет количественно оценить изменения, происходящие в хранящейся крови.

Теоретическая и практическая значимость Разработана и апробирована полезная модель для исследования крови и эритроцитарных суспензий методом биоимпедансной спектроскопии, которая может быть использована для определения гематокрита, мониторирования оседания эритроцитов и быстрой количественной оценки изменений, происходящих в крови в процессе её хранения. Данные диссертации содержат существенные предпосылки для разработки методов анализа других гематологических показателей и процесса агрегации эритроцитов.

Полученные результаты позволяют выявить новые возможности метода биоимпедансной спектроскопии клеточных суспензий и расширяют имеющееся знание о влиянии структурно-функциональных особенностей биологических объектов на их электрические свойства.

Новые сведения можно использовать при написании учебных пособий по физиологии крови и эритроцитов, а также в разделах по биофизике в разделе «Электрические свойства живых тканей».

Основные положения, выносимые на защиту 1. На параметры биоимпедансной спектроскопии крови основное влияние оказывают гематологические показатели, отражающие общее содержание эритроцитов в измеряем образце крови (гематокрит, концентрация эритроцитов).

2. Под влиянием изменений, происходящих в первые несколько минут в помещённой в вертикально фиксированную измерительную камеру крови (взаимодействие эритроцитов и их оседание), происходит рост сопротивления внеклеточной жидкости и электрической ёмкости и снижение Alpha.

3. Метод биоимпедансной спектроскопии является чувствительным к изменению внутриклеточной концентрации гемоглобина, формы и размеров эритроцитов, снижению количества белков на поверхности мембран красных клеток крови, а также к межклеточным взаимодействиям.

4. Изменения, происходящие в крови в процессе её хранения без добавления консервантов, оказывают влияние на все измеряемые параметры биоимпедансной спектроскопии.

5. Метод БИС может использоваться для быстрого определения гематокрита и мониторирования процесса оседания эритроцитов.

Апробация работы. Результаты диссертации доложены и об суждены на: конференции «Чтения Ушинского» (Ярославль, 2010, 2011);

VI Межд. школе-конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности «Системные и клеточные механизмы в физиологии двигательной системы и мышечной деятельности» (Москва, МГУ, 2011);

XII и XIII научно-практ. конф. «Диагностика и лечение нарушений регуляции сердечно-сосудистой системы» (Москва, ГКГ МВД РФ, 2010, 2011);

Всероссийской молодёжной школы-семинара «Инновации и перспективы медицинских информационных систем». (Таганрог, 2010), XIVth International Conference on Electrical Bioimpedance (ICEBI) and the 11th Conference on Biomedical Applications of EIT (Florida, 2010) и в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (6 подглав), главы, описывающей организацию и методы исследования, 11 подглав с изложением полученных результатов и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 16 отечественных и 219 иностранных источников.

Диссертация содержит 21 рисунок и 13 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы исследования. Для экспериментов использовались образцы венозной крови здоровых добровольцев (n=155). Забор крови в гепаринизированные пробирки осуществлялся методом венепункции квалифицированным медицинским персоналом в асептических условиях.

Электрические измерения. На биоимпедансном анализаторе АВС- «Медасс» в диапазоне частот 5 – 500 кГц определялись параметры модели Cole (K.S. Cole, 1940) крови и суспензий эритроцитов (сопротивление внеклеточной, Re, Ом и внутриклеточной, Ri, Ом жидкости, электрическая ёмкость Cm, пФ, характеристическая частота, Fchar, кГц, и параметр Alpha).

Сопротивление внеклеточной и внутриклеточной жидкости зависят от общего объёма, а также электропроводности соответственно внеклеточной и внутриклеточной жидкости (B.H. Cornish, B.J. Thomas 1993). На электрическую ёмкость оказывает влияние суммарная площадь клеточных мембран, а также их структура и проницаемость для ионов (S. Grimnes, O.G. Martinsen, 2008.). Параметр Alpha определяется размером и количеством клеток в измеряемом образце (S. Grimnes, O.G. Martinsen, 2008.), а также неоднородностью клеточных элементов по форме и размерам (A. Ivorra et al., 2004.).

Образцы крови или эритроцитарной суспензии объёмом 1 мл помещали в измерительную камеру, которая представляет собой пластиковую трубку (Рис. 1). Перпендикулярно оси трубки через центр параллельно друг другу проходят токовые и измерительные (потенциальные) электроды из позолоченной медной проволоки.

Электроды присоединялись к соответствующим клеммам биоимпедансного анализатора, и проводилось измерение образца крови или суспензии эритроцитов.

Определение гематологических и биохимических показателей. При решении задач исследования гематологические показатели определялись двумя способами:

на автоматическом анализаторе и рутинными методами. Для выявления взаимосвязей между показателями крови и параметрами БИС гематологические индексы (гематокрит (Ht, %), концентрация (RBC, 1012/л) и Рисунок Схема среднеклеточный объём фл) 1. (MCV, измерительной камеры эритроцитов, содержание гемоглобина (Hb, (ТЭ – токовые электроды, г/л), среднее содержание гемоглобина в ПЭ потенциальные – эритроците (MCH, пг), средняя концентрация электроды) гемоглобина в эритроцитах (MCHC, г/л) и концентрация лейкоцитов (WBC, 109/л), показатель анизоцитоза (RDW, %) определялись на анализаторе MEK-8222J/K. Скорость оседания эритроцитов за один час (СОЭ, мм/ч) оценивалась методом Панченкова.

При изучении электрических свойств суспензий, а также при исследовании динамики параметров БИС крови в процессе её хранения гематологические параметры (Ht, MCV, RBC) изучались рутинными методами. Содержание альбуминов (Alb, г/л), общее содержание белка (TP, г/л) (реактивы «Diasys», Германия), концентрацию ионов калия (Ki, ммоль/л), натрия (Nai, ммоль/л), хлора (Cli, ммоль/л) определяли на биохимическом анализаторе Sapphire 400 (Япония). Содержание фибриногена (Fibr, г/л) измерялось по методу А. Клауса (A.Clauss, 1957.).

Концентрацию глобулинов (Glob, г/л) определяли расчётным методом, вычитая из общего содержания белка концентрацию альбуминов и фибриногена.

Изучение динамики параметров БИС крови в начальный период её оседания. Образцы крови (n=18) помещали в вертикально фиксированную измерительную камеру. Вследствие вертикального расположения измерительной камеры количество эритроцитов в пространстве между измерительными электродами в процессе их оседания увеличивалось. Определялись параметры БИС на нулевой, первой, второй, третьей, четвёртой, пятой и шестой минутах измерения, а также рассчитывались их изменения в процентах на каждой минуте относительно соответствующих показателей на 0 минуте измерения (Re – Re6, %, Ri1 – Ri6, %, Fchar1 – Fchar6, %, Alpha1 – Alpha6, % и Cm1– Cm6, %).

Приготовление суспензий эритроцитов. Суспензии эритроцитов разных возрастов. Для изучения зависимости электрических свойств эритроцитов от их возраста производились измерения концентрированных (гематокрит 80%) суспензий молодых и старых красных клеток крови в аутологичной плазме (n=18). Разделение эритроцитов по возрастному составу производилось по градиенту плотности центрифугированием.

После центрифугирования верхнюю треть суспензий отбирали шприцом и использовали для измерений как молодые эритроциты, а нижнюю треть – как старые.

Суспензии для изучения эффектов осмолярности. Для исследования влияния осмотических эффектов на параметры БИС мы проводили измерение концентрированных суспензий эритроцитов в растворах с разной осмолярностью. Концентрированные суспензии красных клеток крови (n=18) разделялись на 3 порции. Первую порцию инкубировали в гипоосмотическом растворе (0,7%) хлорида натрия (осмолярность мосмоль/л), вторую – в изоосмотическом 0,85% растворе NaCl (осмолярность 290 мосмоль/л), третью – в гиперосмотическом 1,1% растворе хлорида натрия (осмолярность 375 мосмоль/л). Затем надосадочную жидкость полностью удаляли, доводили гематокрит до 92 – 93% растворами соответствующей осмолярности и далее проводили измерения полученных образцов отмытых концентрированных суспензий эритроцитов.

Суспензии для оценки эффектов «отмывки» и обработки трипсином. Для изучения влияния липопротеидов и белков, адсорбированных на мембране красных клеток крови, а также слоя поверхностных мембранных сиаловых кислот на параметры БИС проводились электрические измерения концентрированных (Ht=90%) суспензий нативных, отмытых и обработанных трипсином эритроцитов.

Концентрированные суспензии эритроцитов (n=18) делили на 3 равные порции. Первую порцию использовали для измерений как нативные эритроциты, а вторую и третью отмывали в растворе NaCl. Затем вторую порцию суспензии использовали для измерений как отмытые эритроциты, а третью инкубировали в растворе трипсина. После инкубации с трипсином эритроциты отмывали в растворе хлорида натрия и использовали для измерения как обработанные.

Для исследования влияния на электрические свойства суспензий красных клеток крови альбумина, адсорбированного на мембранах эритроцитов, при наличии и отсутствии поверхностного слоя сиаловых кислот проводились измерения суспензий отмытых («Альбумин») и обработанных трипсином («Альбумин+трипсин») эритроцитов в растворе альбумина. Из концентрированных суспензий красных клеток крови (n=18) приготавливали отмытые и обработанные трипсином эритроциты по методике, описанной выше. Затем суспензии как обработанных, так и не обработанных трипсином эритроцитов инкубировали в 10% растворе альбумина в течение часа. После этого суспензии доводили до стандартного гематокрита раствором альбумина и проводили электрические изменения.

Хранение образцов крови. Образцы венозной крови (n=18) объёмом 9 мл делились на три равные порции. Электрические измерения первой порции проводили в течение первого часа после забора крови (0-й день), две другие порции хранили без добавления консервантов при температуре +4 – +6оС в герметично закрытых гепаринизированных стерильных пластиковых пробирках. Измерения второй порции проводили на 10-й, а третей – на 21-й день хранения.

Статистические методы анализа данных. Данные представлены как среднее арифметическое (M) ± среднеквадратическое отклонение (s).

Гипотеза о взаимосвязи данных проверялась с помощью параметрической корреляции Пирсона. Парный t-критерий Стьюдента применялся для сравнительного анализа между гематологическими показателями и параметрами БИС суспензий молодых и старых эритроцитов, а также между биоимпедансными показателями суспензий «Альбумин» и «Альбумин+трипсин». Однофакторный дисперсионный анализ для повторных измерений (ANOVA) использовался для выявления различий между параметрами БИС крови при анализе эффектов оседания и хранения;

а также осмолярности суспензионной среды, эффектов «отмывки» и обработки трипсином в концентрированных суспензиях эритроцитов. Апостериорные сравнения выполнены с использованием критерия Ньюмена-Кейлса. Для выявления показателя, который внёс наибольший вклад в различия по параметрам БИС между образцами крови на разных сроках хранения, был использован дискриминантный анализ.

Для выявления показателей крови, оказывающих наиболее сильное влияние на параметры БИС, нами определялся коэффициент множественной регрессии () с помощью стандартной множественной регрессии. Пороговым уровнем статистической значимости () был принят =0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Определение возможностей метода БИС для изучения крови Оценка воспроизводимости метода БИС. Значения коэффициентов внутрисерийной вариации (CVвс) представлены в таблице 1.

Таблица Внутрисерийные коэффициенты вариации для параметров БИС (n=20) Параметр БИС Re Ri Cm Alpha CVвс, % 1,98 2,89 2,74 0, Полученные значения не превышают принятых норм коэффициентов внутрииндивидуальной биологической вариации для гематологических показателей (А.В. Мошкин, В.В. Долгов, 2004), следовательно, метод БИС может быть использован для физиологических исследований крови.

Значения параметров биоимпедансной спектроскопии образцов цельной крови. Установлено, что Ht, RBC и Hb у мужчин были выше, чем у женщин (p0,00001 для всех показателей), а MCV, MCH и MCHC не различались, что соответствует литературным данным (Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун, 2006).

Установлено, что Re и Cm у мужчин были выше, а Ri и Alpha – ниже, чем у женщин (Табл. 2).

Таблица Значения параметров биоимпедансной спектроскопии образцов цельной крови мужчин и женщин (n=46) Параметры БИС Мужчины (n=23) Женщины (n=23) Re, Ом 110,5±9,9 93,0±12,0*** Ri, Ом 132,1±7,9 148,7±12,5*** Alpha 0,305±0,006 0,312±0,007** Cm, пФ 98,4±11,4 83,9±13,5*** **, *** – p0,01;

0,001 по сравнению с мужчинами По-видимому, различия между параметрами БИС крови мужчин и женщин были связаны с различиями между гематологических показателями.

Таким образом, метод БИС является чувствительным к различиям гематологических показателей у мужчин и женщин.

Взаимосвязь параметров БИС с гематологическими и биохимическими показателями.

Использование корреляционного анализа показало, что Re и Cm положительно, а Ri и Alpha отрицательно коррелировали с Ht, RBC, Hb, MCV, MCH и MCHC (Табл. 3). Связей параметров БИС с WBC не выявлено.

Таким образом, все основные показатели красной крови были связаны с параметрами БИС. Кроме того, установлены положительные связи Cm с общим содержанием белка (TP) (r=0,42;

p0,01), а также с концентрацией крупномолекулярных белков: фибриногена (Fibr) (r=0,40;

p0,01) и глобулинов (Glob) (r=0,45;

p0,01).

Таблица Корреляции (r) между гематологическими и биоимпедансными параметрами крови (n=46) RBC Hb Ht MCV MCH MCHC Re 0,64*** 0,78*** 0,80*** 0,51*** 0,50*** 0,32* Ri -0,54*** -0,75*** -0,75*** -0,59*** -0,59*** -0,39* Cm 0,37* 0,64*** 0,61*** 0,56*** 0,59*** 0,44** Alpha -0,46** -0,60*** -0,60*** -0,42** -0,44** -0,28* (*, **, *** – p 0,05;

0,01;

0,001 соответственно).

Для выявления показателей крови, которые вносили наибольший вклад в вариацию параметров БИС, нами проведен множественный регрессионный анализ.

В качестве независимых переменных были выбраны основные гематологические и биохимические индексы (Ht, MCV, MCHC, TP, Fibr, Nai), в качестве зависимых – показатели БИС крови. Уравнения множественной регрессии для Re, Ri, Cm и Alpha выглядели следующим образом:

Re (Ом) = 2,25Ht*** + 0,26MCV - 0,09MCHC + 0,07TP + 0,46Nai + 6,81Fibr*** - 71,0 (R2=0,73;

p0,00001) (1) Ri (Ом) = 242,3 - 1,75Ht*** - 0,36MCV + 0,11MCHC - 0,16TP - 0,18Nai + 0,14Fibr (R2=0,51;

p0,00029) (2) Cm (пФ) = 1,25Ht** + 0,68MCV + 0,01MCHC + 0,48TP* + 0,11Nai + 7,462Fibr** - 89,1 (R2=0,48;

p0,001) (3) Alpha = 1,3211 - 0,0006Ht - 0,0030MCV*** - 0,0037RDW^ - 0,0002TP 0,0003Nai - 0,0017Fibr (R2=0,37;

p0,00863) (4) Примечание: ^, *, **, *** – p0,1;

0,05;

0,01;

0,001 соответственно для показателей крови, с которыми параметры БИС коррелировали независимо.

Таким образом, Re, Ri и Cm зависели главным образом от гематокрита, а электрическая ёмкость – также и от общего содержания сывороточного белка и концентрации фибриногена. На параметр Alpha основное влияние оказывал MCV, однако тенденция к достоверной корреляции Alpha с RDW (р0,1) указывает на определенную роль показателя анизоцитоза в изменчивости Alpha.

Связь Re и Ri с гематокритом (Табл. 3;

Уравнения 1, 2) обусловлена зависимостью этих показателей БИС от общего объёма внеклеточной и внутриклеточной жидкости (B.H. Cornish, B.J. Thomas, 1993). Поскольку с ростом Ht общий объём внеклеточной жидкости уменьшается, а внутриклеточной – увеличивается, сопротивление внеклеточной жидкости возрастает, а внутриклеточной – снижается.

Положительная корреляция Cm с Ht, полученная в нашей работе (Табл. 3;

Уравнение 3), объясняется зависимостью электрической ёмкости от суммарной площади клеточных мембран (S. Grimnes, O.G. Martinsen, 2008). С ростом Ht происходило увеличение суммарной площади мембран эритроцитов в измеряемом образце крови, поэтому электрическая ёмкость повышалась (Табл. 3). Связь Cm с общим содержанием белка и концентрацией фибриногена, по-видимому, определялась влиянием на электрическую ёмкость белков, адсорбированных на поверхности мембран форменных элементов (S. Grimnes, O.G. Martinsen, 2008).

Полученные в нашем исследовании тесные корреляции параметров БИС с гематокритом позволяют предположить, что метод биоимпедансной спектроскопии может быть использован для его количественной оценки. Результаты множественной регрессии показывают, что вариация значений Ht определяется параметрами БИС на 82% (Уравнение 5).

Ht = 0,27Re – 0,22Ri + 0,009Fchar + 68,47Alpha – 21,77 (R2=0,82;

p0,001) (5) Таким образом, с помощью предложенного нами метода значение гематокритного показателя может быть определено с достаточно высокой точностью.

Зависимость Alpha от MCV, выявленная в нашем исследовании (Табл.

3;

Уравнение 4), очевидно, была обусловлена влиянием размеров клеток в измеряемом образце на этот показатель БИС (O.G. Martinsen et al., 2002) По-видимому, в нашем исследовании значение Alpha в большей степени зависело от MCV, поскольку этот показатель отражает среднеклеточный размер эритроцитов. Кроме того, известно, что значение Alpha определяется также неоднородностью по форме и размерам клеточных элементов в измеряемом образце (A. Ivorra et al., 2004). Поскольку показатель анизоцитоза, RDW, отражает неоднородность размеров эритроцитов, он также оказывал влияние на Alpha (уравнение 4).

Таким образом, наиболее сильное влияние на параметры биоимпедансной спектроскопии оказывают гематологические показатели, отражающие общее содержание эритроцитов в измеряемом образце крови (Ht, RBC, Hb). Метод биоимпедансной спектроскопии может быть использован для быстрой и точной оценки гематокрита.

Динамика изменения параметров БИС цельной крови в начальный период оседания эритроцитов. В начальный период оседания крови (5 мин) значение Ri оставалось примерно на одном уровне (Рис. 1), Re возрастало (Рис. 2) в течение всего периода измерения. Как увеличение Cm (Рис. 3), так и снижение Alpha (Рис. 4) наблюдалось только в первую минуту измерения, а затем их значения существенно не менялись.

Рост Re крови, находящейся в неподвижной измерительной камере, был обусловлен уменьшением объёма внеклеточной жидкости (плазмы) в пространстве между измерительными электродами вследствие оседания форменных элементов. Нами выявлены тесные корреляции Re3 с величиной СОЭ (r=0,72 – 0,80;

p0,01 – 0,001).

Увеличение Cm в начальный период оседания, вероятно, было вызвано взаимным увеличением электрического заряда на клеточных мембранах при сближении эритроцитов в процессе агрегации (K. Asami, K. Sekine, 2007), а также, частично, повышением концентрации эритроцитов в зоне измерения.

Нами установлено, что значение Alpha уменьшалось в течение первой минуты, а затем не менялось (Рис. 4). Одним из факторов, влияющих на Alpha, является неоднородность клеточных элементов в измеряемом образце (A. Ivorra et al., 2004). По-видимому, формирование агрегатов из эритроцитов приводило к снижению однородности измеряемой крови, что и вызывало уменьшение Alpha.

Таким образом, динамика параметров БИС крови (рост Re, Cm и снижение Alpha), помещенной в неподвижную измерительную камеру в первые минуты, очевидно, была обусловлена взаимодействием эритроцитов и их оседанием. Наличие корреляций Re с ESR позволяет использовать метод биоимпедансной спектроскопии для быстрого определения скорости оседания эритроцитов.

144 136 *** *** Re, Ом *** Ri, Ом *** *** *** 122 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5 Время, мин Время, мин Рис. 1. Изменение Ri в процессе Рис. 2. Изменение величины Re в измерения (достоверные различия процессе измерения. (*** – p0, отсутствуют). по сравнению с 0 минутой) 105 0, 0, 0, *** *** *** *** 95 *** *** 0, Cm, пФ Alpha 0,310 * ** ** ** 85 *** *** 0, 0, 75 0, 70 0, 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 Время, мин Время, мин Рис. 3. Изменение величины Cm в Рис. 4. Изменение параметра Alpha процессе измерения (*** – в процессе измерения (*, **, *** – p0,001 по сравнению с 0 по p0,05;

p0,01;

p0, минутой). сравнению с 0 минутой) Влияние возрастных изменений красных клеток крови на параметры БИС эритроцитарных суспензий. При равном гематокрите (Ht=80%) в концентрированной суспензии эритроцитов в аутологичной плазме MCV старых красных клеток крови был меньше (p=0,02), а RBC – больше (p=0,01), чем молодых.

По результатам нашего исследования Re и Ri суспензий старых эритроцитов были выше, чем молодых (Табл. 4). Повышение Re суспензии старых клеток, вероятно, было вызвано уменьшением общего объёма внеклеточной жидкости в результате сближения эритроцитов.

Сближение красных клеток крови при центрифугировании концентрированных суспензий было связано с большей плотностью упаковки, обусловленной снижением поверхностного отрицательного заряда. Возрастание Ri объясняется уменьшением подвижности ионов в цитоплазме старых клеток, вследствие увеличения внутриклеточной концентрации гемоглобина из-за дегидратации эритроцитов (H. Pauly, H.P.

Schwan, 1966). Мы предполагаем, что снижение Cm суспензий старых эритроцитов было связано с уменьшением количества белков, адсорбированных на мембранах клеток (B. Neu et. al., 2003). Значение Alpha суспензий старых эритроцитов было меньше, чем молодых (Табл.

4), что, по-видимому, было обусловлено приближением формы красных клеток крови к сферической в процессе старения. Это, в свою очередь, приводило к повышению однородности суспензий.

Таблица Значения параметров БИС суспензий молодых и старых эритроцитов (M±s, n=18) Параметры Молодые Старые БИС эритроциты эритроциты Re, Ом 261,2±21,8 300,4±30,0* Ri, Ом 73,4±7,3 86,6±9,1*** Alpha 0,301±0,001 0,303±0,003* Cm, пФ 112,8±6,3 99,3±10,1** *, **, *** – p0,05;

0,01;

0,001 по сравнению с молодыми эритроцитами Таким образом, различия параметров БИС (рост Re, Ri, Alpha и снижение Cm) молодых и старых красных клеток крови в концентрированных суспензиях, очевидно, связаны со сближением форменных элементов, а также с возрастными изменениями внутриклеточной концентрации гемоглобина, размеров и формы эритроцитов.

Влияние осмолярности суспендирующего раствора на параметры БИС. По данным нашего исследования в концентрированных суспензиях эритроцитов при равном Ht (92 – 93%) повышение осмолярности суспендирующего раствора приводило к снижению MCV (p=0,0003) и росту RBC (p=0,0002), а снижение осмолярности – к противоположным изменениям гематологических показателей (p=0,0002 для MCV, p=0, для RBC). Re и Alpha возрастали в гипотонических растворах и снижались – в гипертонических. Ri и Cm – наоборот, увеличивались в суспензиях с высокой осмолярностью и снижались в гипоосмотических суспензиях (Табл. 5).

Таблица Параметры БИС суспензий в гипо-, гипер- и изоосмотических растворах (M±s, n=18) Осмолярность, мосмоль/л 240 290 Re, Ом 660,0±102,5** 562,9±72,6 450,7±28,9** Ri, Ом 64,4±4,6* 68,7±1,5 73,0±6,1* Cm, пФ 47,4±5,6** 53,4±4,6 59,7±3,4** Alpha 0,318±0,002* 0,316±0,006 0,314±0,005* *, ** – p0,05;

0,01 по сравнению с изоосмотической суспензией Вариации Re в растворах с разной осмолярностью очевидно, были обусловлены разной электропроводностью суспендирующих растворов, а изменения Ri в гипо- и гиперосмотических суспензиях – разной электропроводностью цитоплазмы эритроцитов (Табл. 5). В суспензиях с низкой осмолярностью концентрация ионов в суспендирующем растворе была низкой, и Re увеличивалось, в гиперосмотических суспензиях из-за увеличения концентрации ионов натрия и хлора электропроводность растворов возрастала, и Re снижалось. В гипотонических растворах концентрация внутриклеточного гемоглобина в эритроцитах снижалась, электропроводность цитоплазмы возрастала, Ri снижалось, в гипертонических суспензиях – наоборот. По результатам нашего исследования значение Cm увеличивалось в гиперосмотических суспензиях, и уменьшалось – в гипоосмотических (Табл. 5).

Электрическая ёмкость зависит от суммарной площади клеточных мембран (S. Grimnes, O.G. Martinsen, 2008), поскольку в гипертонических растворах RBC, а значит, и суммарная площадь клеточных мембран возрастала, значение Cm повышалось. В гипотонических суспензиях вследствие увеличения среднеклеточного объема и уменьшения концентрации клеток, суммарная площадь клеточных мембран уменьшалась, и Cm снижалась. Установлено, что Alpha возрастала гипотонических суспензиях и снижалась – в гипертонических (Табл. 5). В суспензиях с низкой осмолярностью эритроциты набухали, их форма приближалась к сферической, однородность измеряемых суспензий, вероятно, возрастала, значение Alpha повышалось. В гипертонических растворах – напротив, эритроциты сморщивались, их объемы уменьшались, однородность измеряемых суспензий снижалась, происходило уменьшение Alpha (E. Ponder, G. Saslow, 1930).

Таким образом, вариации показателей БИС в растворах с разной осмолярностью (рост Re и Alpha в гипотонических растворах и снижение – в гипертонических;

уменьшение Ri и Cm в гипоосмотических суспензиях и повышение – в гиперосмотических), по-видимому, определялись разной электропроводностью суспендирующих растворов, а также изменениями эритроцитов, обусловленных осмотическими эффектами.

Влияние белков, адсорбированных на мембране красных клеток крови, и слоя мембранных сиаловых кислот на параметры БИС эритроцитарных суспензий. «Отмывка» эритроцитов приводит к удалению белково-липидных комплексов с их поверхности (J.E. Lovelock, 1955).

Установлено, что гематокрит, среднеклеточный объём и концентрация эритроцитов в концентрированных суспензиях нативных и отмытых красных клеток крови не различались между собой. После обработки эритроцитов трипсином происходило повышение MCV (p=0,015) и снижение RBC (p=0,005). По данным нашего исследования в результате отмывки эритроцитов произошло снижение Re, Ri и Cm (Табл. 6).

Таблица Значения показателей биоимпедансной спектроскопии суспензий нативных и отмытых эритроцитов (M±s, n=18) Нативные эритроциты Отмытые эритроциты Re, Ом 838,6±137,0 647,1±116,4** Ri, Ом 78,8±6,2 73,6±5,0* Cm, пФ 49,14±5,2 44,53±5,3* Alpha 0,316±0,002 0,315±0, *, **, *** – p0,05;

0,01;

0,001 по сравнению с нативными эритроцитами.

Уменьшение Re (Табл. 6) суспензий эритроцитов после отмывки было обусловлено ростом их электропроводности из-за повышения подвижности ионов вследствие удаления адсорбированных на мембранах красных клеток крови белков (И.Ю. Смирнов и др., 2004). Снижение Ri суспензий отмытых красных клеток крови (Табл. 6), по-видимому, было связано с увеличением электропроводности их цитоплазмы вследствие увеличения проницаемости клеточных мембран для ионов (H. Pauly, H.P.

Schwan, 1966).

Под влиянием «отмывки» эритроцитов произошло снижение Cm (Табл. 6). Мы полагаем, что устранение протеинов с поверхности эритроцитов было причиной снижения электрической ёмкости.

Alpha суспензий отмытых и нативных эритроцитов не различались (Табл. 6), поскольку «отмывка» не повлияла на форму и размеры клеток, и однородность измеряемых суспензий не изменилась.

Таким образом, в результате удаления белково-липидных комплексов с поверхности эритроцитов произошло снижение Re, Ri и Cm. Среди факторов, ответственных за данные изменения, можно отметить уменьшение количества белков, адсорбированных на поверхности мембран красных клеток крови, увеличение проницаемости клеточных мембран для ионов, а также повышение электропроводности суспендирующего раствора.

Влияние удаления поверхностного слоя сиаловых кислот на параметры БИС суспензий. Обработка красных клеток крови трипсином вызывает отщепление слоя сиаловых кислот с их поверхности (B. Neu et al., 2003). По результатам нашего исследования ресуспендирование обработанных трипсином эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия привела к повышению Re и Alpha, значения Ri при этом снизилось, а Cm – не изменилось (Табл. 7). Повышение Re концентрированных суспензий эритроцитов после обработки их трипсином может быть связано с уменьшением общего объёма внеклеточной жидкости в результате сближения клеток из-за удаления поверхностного слоя отрицательно заряженных сиаловых кислот (H.J. Meiselman et al., 2004;

E.H. Eylar et al., 1962). Инкубация эритроцитов с трипсином вызвала повышение MCV (p=0,015), что в концентрированной суспензии стандартного объёма привело к увеличению общего количества внутриклеточной жидкости и, как следствие, уменьшению Ri.

Таблица Значения показателей биоимпедансной спектроскопии суспензий отмытых и обработанных трипсином эритроцитов (M±s, n=18) Отмытые эритроциты Обработанные трипсином эритроциты Re, Ом 647,1±116,4 759,7±119,1* Ri, Ом 73,6±5,1 68,4±4,9** Cm, пФ 44,53±5,3 45,13±4, Alpha 0,315±0,002 0,317±0,003* *, ** – p0,05;

0,01 по сравнению с отмытыми эритроцитами.

Значения Cm суспензий обработанных и необработанных трипсином эритроцитов не различались. По-видимому, на значение электрической ёмкости влияло два фактора. С одной стороны, в результате роста MCV происходило снижение концентрации эритроцитов, а значит, и суммарной площади клеточных мембран, поэтому Cm снижалась.

С другой стороны, сближение форменных элементов из-за уменьшения поверхностного отрицательного заряда приводило к росту электрической ёмкости (K. Asami, K. Sekine, 2007).

Таким образом, вследствие действия разнонаправленных факторов значение Cm оставалось на одном уровне. Возрастание Alpha после инкубации эритроцитов с трипсином, по-видимому, было обусловлено увеличением размеров клеток и повышением однородности суспензий вследствие приближения формы эритроцитов к сферической.

Таким образом, изменения параметров БИС суспензий отмытых эритроцитов (повышение Re, Alpha и снижение Ri) после отщепления поверхностного слоя сиаловых кислот были, вероятно, обусловлены сближением красных клеток крови, а также изменением их формы и объёма.

Влияние адсорбированного на мембранах эритроцитов альбумина на параметры БИС при наличии и отсутствии поверхностного слоя сиаловых кислот. В данном исследовании мы попытались выявить изолированное влияние белков, адсорбированных на мембранах красных клеток крови, на показатели биоимпедансной спектроскопии концентрированных эритроцитарных суспензий. Для этого нами проводилось сравнение параметров БИС суспензий отмытых эритроцитов, суспендированных в растворе альбумина, обработанных и необработанных трипсином («Альбумин+трипсин» и «Альбумин»

соответственно). Обработка трипсином эритроцитов, вызывает уменьшение количества адсорбированного посредством сиаловых кислот белка на мембранах (B. Neu et al., 2003). Поскольку суспендирующий раствор в сравниваемых суспензиях был одинаковым, его состав не оказывал влияние на электрические свойства измеряемых суспензий.

Следовательно, можно предположить, что различия в параметрах БИС между суспензиями «Альбумин» и «Альбумин+трипсин» определялись только влиянием адсорбированного на мембранах эритроцитов белка.

Гематокрит отмытых («Альбумин») и обработанных трипсином («Альбумин+трипсин») эритроцитарных суспензий в растворе альбумина был стандартным (Ht=94,3±2,1% и 93,8±3,3% для «Альбумин» и «Альбумин+трипсин» соответственно). Значения MCV и RBC обследуемых суспензий также не различались. Отсутствие изменений MCV под влиянием трипсина, очевидно, объясняется защитным действием альбумина. Результаты исследования показали, что вследствие обработки трипсином эритроцитарных суспензий произошло снижение Ri (p=0,02) и Cm (p=0,032), а остальные показатели БИС не изменились. Re суспензий «Альбумин» и «Альбумин+трипсин» не различалось, поскольку Ht, а значит и общий объём внеклеточной жидкости был одинаковым.

Снижение Ri после обработки эритроцитов трипсином, по-видимому, было связано с ростом электропроводности цитоплазмы, а не с изменением количества белка на поверхности эритроцитов. Повышение электропроводности цитоплазмы, вероятно, обусловлено увеличением проницаемости мембран клеток для ионов вследствие действия трипсина (V. Swystun et al., 2005). Cm суспензий «Альбумин+трипсин» была меньше, чем «Альбумин», что, очевидно, объясняется уменьшением количества белков, адсорбированных на мембранах эритроцитов под влиянием обработки трипсином. Параметр Alpha суспензий «Альбумин» и «Альбумин+трипсин» был одинаковым, так как в присутствии альбумина не произошло увеличения объёма красных клеток крови под влиянием трипсина, и однородность красных клеток крови в суспензиях не изменилась.

Таким образом, мы полагаем, что вариации параметров БИС суспензий эритроцитов в растворе белка после отщепления сиаловых кислот (снижение Ri и Cm) были связаны с уменьшением количества протеинов, адсорбированных на поверхности эритроцитов, а также с увеличением проницаемости мембран красных клеток крови для ионов.

Динамика параметров БИС крови в процессе хранения. Нами установлено, что показатель MCV повышался в течение первых 10 дней хранения (p=0,001), а затем существенно не менялся. RBC уменьшалась в течение всего периода хранения (p=0,001), а Ht повышался в течение первых 10 дней (p=0,008), а потом его значение снижалось и к 21 дню достигало исходных величин (p=0,02 по сравнению с 10 днём). Результаты исследования показали, что Re в первые 10 дней хранения возрастало, а к 21 дню снижалось до исходных значений, Ri и Cm постоянно снижались, Alpha возрастала в течение первых 10 дней, а затем её значение существенно не менялось (Табл. 8).

Динамика Re в процессе хранения отражает изменение Ht, так как гематокрит связан с общим объёмом внеклеточной жидкости, который в значительной мере определяет сопротивление внеклеточной жидкости (B.H. Cornish, B.J. Thomas, 1993). Снижение Ri в процессе хранения было обусловлено ростом Ht, а значит, и увеличением общего объёма внутриклеточной жидкости (B.H. Cornish, B.J. Thomas, 1993), а также повышением электропроводности цитоплазмы из-за уменьшения концентрации внутриклеточного гемоглобина (H. Pauly, H.P. Schwan, 1966). Падение Cm в течение всего периода хранения объясняется уменьшением суммарной площади клеточных мембран из-за гемолиза эритроцитов. Повышение Alpha в процессе хранения, вероятно, обусловлено увеличением размеров эритроцитов, а также повышением однородности крови вследствие приближения формы клеток к сферической.

Таблица Параметры БИС крови на 0, 10 и 21 день хранения (M±s, n=18) 0 день 10 день 21 день Re, Ом 113,4±9,3 119,4±12,9* 109,4±5,6^ Ri, Ом 144,6±4,4 113,3±6,2*** 65±15,1*** Cm, пФ 93,4±12,8 81,3±11,1* 54,7±6,4*** Alpha 0,312±0,005 0,318±0,007* 0,316±0,007* Fchar, кГц 1600±201*** 590±72 712±145** *, **, *** – p0,05;

0,01;

0,001 по сравнению с 0 днём, ^ – p0.05 по сравнению с 10 днём Таким образом, все параметры БИС менялись в процессе хранения крови. Для выявления биоимпедансного показателя, который вносил набольший вклад в различия между параметрами БИС крови на разных сроках хранения, проведен дискриминантный анализ. По его результатам таким показателем была характеристическая частота, значение которой постоянно повышалось с увеличением срока хранения. Можно предположить, что этот параметр БИС может быть использован для количественной оценки изменений, происходящей в крови в процессе её хранения.

Все параметры БИС изменялись в процессе хранения крови.

Наибольший вклад в различия между показателями БИС крови на разных сроках хранения вносила характеристическая частота.

ВЫВОДЫ 1. Методика биоимпедансной спектроскопии крови обладает высокой воспроизводимостью. Коэффициенты внутрисерийной вариации при измерении цельной крови для всех параметров БИС не превышали 3%.

Метод БИС может быть использован для изучения крови.

2. Параметры биоимпедансной спектроскопии были связаны с показателями красной крови. Наиболее сильные корреляционные связи установлены для показателей, отражающих общее содержание эритроцитов в измеряемом образце крови (Ht, RBC, Hb), а с показателями, характеризующими свойства отдельных эритроцитов (MCV, MCH, MCHC) получены слабые корреляции. Связей параметров БИС с лейкоцитами выявлено не было. С помощью метода БИС можно определять гематокритный показатель.

3. Плазменные факторы (содержание белков) оказывают существенное влияния на электрическую ёмкость, что обусловлено эффектами адсорбции белков на мембранах клеток, а не их прямым влиянием на электрические свойства крови.

4. Изменения, происходящие в первые пять минут в крови, помещённой в вертикально фиксированную измерительную камеру, оказывают влияние на параметры БИС. Динамика показателей биоимпедансной спектроскопии была связана с процессами взаимодействия форменных элементов и оседания агрегатов. Метод биоимпедансной спектроскопии можно применять для быстрого определения величины СОЭ.

5. Метод БИС является чувствительным к возрастным изменениям красных клеток крови. В процессе старения в концентрированных суспензиях эритроцитов в аутологичной плазме происходит рост сопротивления внеклеточной и внутриклеточной жидкости, а также параметра Alpha, электрическая ёмкость при этом снижается.

6. Все параметры биоимпедансной спектроскопии концентрированных эритроцитарных суспензий с разной осмолярностью различались между собой. Различия показателей БИС были обусловлены разной электропроводностью суспендирующих растворов, а также изменениями красных клеток крови, обусловленных осмотическими эффектами.

7. «Отмывка» эритроцитов приводила к снижению электрической ёмкости, что было обусловлено удалением белково-липидных комплексов, адсорбированных на мембранах, а также к уменьшению сопротивления внеклеточной и внутриклеточной жидкости.

8. Отщепление мембранных сиаловых кислот трипсином с поверхности эритроцитов и последующее их суспендирование в растворе альбумина вызывало снижение электрической ёмкости, что было связано с уменьшением количества белков, адсорбированных на мембранах эритроцитов посредством сиаловых кислот.

9. Процессы, происходящие в хранящейся крови, оказывают влияние на все измеряемые параметры БИС. Динамика Re отражает изменение гематокрита, рост Alpha связан с увеличением MCV, падение Cm обусловлено снижением суммарной площади клеточных мембран вследствие гемолиза в процессе хранения крови. Наибольший вклад в различия между показателями БИС крови на разных сроках хранения вносила Fchar. Метод биоимпедансной спектроскопии может быть использован для количественной оценки изменений, происходящих в крови при её хранении.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ОТРАЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ АВТОРА:

1. Малахов М.В. Параметры биоимпедансной спектроскопии отмытых и обработанных трипсином эритроцитов [Текст] / М.В. Малахов //Вестник Удмуртского университета. – 2010. – Вып. 3. – С. 29-32 (Журнал включен в перечень изданий рекомендованных ВАК РФ) (авторских 100%).

2. Малахов М.В. Оценка гематологических и биохимических показателей крови методом биоимпедансной спектроскопии [Текст] / М.В. Малахов, А.А. Мельников, Д.В. Николаев, А.В. Смирнов, А.Д. Викулов //Клиническая лабораторная диагностика. – 2011. – № 1. – С. 20-23 (Журнал включен в перечень изданий рекомендованных ВАК РФ) (авторских 20%) 3. Малахов М.В. Изменение параметров биоимпедансной спектроскопии цельной крови в начальный период оседания эритроцитов [Текст] / М.В.

Малахов, А.А. Мельников, А.Д. Викулов //Ярославский педагогический вестник. – 2010. – T. 3. (Естественные науки). – № 4. – С. 104-110 (Журнал включен в перечень изданий рекомендованных ВАК РФ) (авторских 33%).

4. Малахов М.В. Параметры биоимпедансной спектроскопии молодых и старых эритроцитов [Текст] / М.В. Малахов, А.А. Мельников, А.Д Викулов //Физиология человека. – 2011. – Т. 37. – №. 3. - С. 132–134 (Журнал включен в перечень изданий рекомендованных ВАК РФ) (авторских 33%).

5. Малахов М.В. Влияние адсорбированных на мембране эритроцитов белков на параметры биоимпедансной спектроскопии красных клеток крови [Текст] / Малахов М.В., Мельников В.А., Викулов А.Д. // Вестник Томского государственного педагогического университета. – 2011. – Вып. 5, – С. 66 – 68 (Журнал включен в перечень изданий рекомендованных ВАК РФ) (авторских 33%).

6. Патент №107863 Российская Федерация, МПК G01N 33/49. Камера для измерения показателей красной крови методом биоимпедансного анализа / Малахов М.В., Мельников А.А., Николаев Д.В., Смирнов А.В.;

заявитель и патентообладатель Ярославский государственный университет им К.Д.

Ушинского. № 2010151705/15;

заявл. 15.12.2010;

опубл. 27.08.20111, Бюл.

№ 24. 2 с.

7. Malahov M.V., Melnikov A.A., Smirnov A.V., Nikolaev D.V., Vikulov A.D.

Bioimpedance spectroscopy as technique of hematological and biochemical analysis of blood //J. Phys.: Conf. Ser. – 2010. – V. 224. - №1. – doi:10.1088/1742-6596/224/1/012130 (авторских 20%).

8. Малахов М.В. Взаимосвязь показателей биоимпедансной спектроскопии крови с ее составом / М.В. Малахов, А.А. Мельников, Д.В. Николаев, А.В.Смирнов, А.Д. Викулов // Мат. XII научно-практ. Конф. «Диагностика и лечение нарушений регуляции сердечно-сосудистой системы». НТЦ Медасс.

ГКГ МВД РФ. Москва, 2010. – С. 222-230 (авторских 20%).

9. Малахов М.В. Параметр Alpha как показатель неоднородности крови / М.В.Малахов, А.А. Мельников // Мат. XII научно-практ. Конф.

«Диагностика и лечение нарушений регуляции сердечно-сосудистой системы». НТЦ Медасс. ГКГ МВД РФ. Москва, 2010. – С. 231- (авторских 50%).

10. Малахов М.В. Оценка среднеклеточного объёма эритроцитов методом биоимпедансной спектроскопии / М.В. Малахов // Тезисы трудов Всероссийской молодёжной школы-семинара “Инновации и перспективы медицинских информационных систем”. Таганрог, 2010. – С. 68- (авторских 100%).

11. Малахов М.В. Влияние клеточных и плазменных факторов на параметры биоимпедансной спектроскопии крови и эритроцитарных суспензий / М.В Малахов., А.А.Мельников // Мат. XIII научно-практ. конф. "Диагностика и лечение нарушений регуляции сердечно-сосудистой системы". НТЦ Медасс.

ГКГ МВД РФ. Москва, 2011. - С. 163-176 (авторских 50%).

12. Малахов М.В. Оценка показателей красной крови методом биоимпедансной спектроскопии / М.В. Малахов, А.А. Мельников // Тезисы докладов VI Всероссийской с международным участием Школы конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности «Системные и клеточные механизмы в физиологии двигательной активности и мышечной деятельности», Москва, 2011, – С. 81 (авторских 50%).

13. Малахов М.В. Параметры биоимпедансной спектроскопии суспензий эритроцитов разного возрастного состава / М.В.Малахов, А.А. Мельников // Мат. X Всероссийской молодёжной научной конф. «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике». Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН. – 2011., – С. 134 – (авторских 50%).



 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.